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13种巴基斯坦草药对PC12细胞保护作用的研究
目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H202、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据.方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H202、GLU,分别建立神经细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率.结果:虎爪豆、诃子等能明显促进PC12细胞增殖作用(P＜0.05)；在H202 150μmol· L-1损伤模型中,药物组和模型组相比,罗勒、仙人掌、芦笋、灯油藤、诃子等能显著减轻H202的细胞损伤作用(P＜0.05)；在GLU 30mmol·L-1诱导PC12细胞损伤,与模型组比较,凤仙花、仙人掌、虎爪豆、诃子等均显示出损伤保护作用(P＜0.05).其中,诃子不仅能促进PC12细胞增殖,且在两种PC12细胞损伤模型中均具有较强的损伤保护作用.结论:具有促进PC12细胞增殖的药物为诃子、罗勒、虎爪豆；具有对抗H202损伤作用的药物有:诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、灯油藤、罗勒；具有减弱GLU诱导PC12细胞损伤的药物为:虎爪豆、诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、甘草；诃子在3种模型中均表现出较强的细胞损伤保护作用.本研究结果为神经退行性疾病药物的开发和选择提供了初步的实验依据.
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黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1对过氧化氢所致大鼠海马神经元损伤的保护作用
目的:探讨黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1对过氧化氢所致的大鼠海马神经元损伤的保护作用.方法:采用新生1d SD大鼠海马神经元原代培养,以H2O2(50μM)造成细胞损伤模型,将黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1的高(20μg/ml)和低(0.2μg/ml)两个剂量加入到培养细胞液中.在4h时,检测细胞形态及释放出的LDH活性变化,观察到上述药物对海马神经元损伤的直接保护作用.结果:低剂量黄芩苷和三七皂苷R1与模型组比较,未见明显差异,三种组分高剂量和丹参酮ⅡA低剂量组与模型组比较,均有明显差异.结论:黄芩苷、丹参酮ⅡA、三七皂苷R1对过氧化氢所致的大鼠海马神经元损伤具有一定的保护作用.
关键词： 海马神经元 H202 黄芩苷 丹参酮ⅡA:三七皂苷R1 -
Gαq对H2O2诱导THP-1细胞凋亡的影响
[目的]研究Gαq对H2O2诱导的人单核细胞白血病细胞(THP-1)凋亡的影响.[方法]实验分为3组:对照组,H2O2诱导凋亡组,Gp-2A抑制组,每组3个重复.Gp-2A抑制组在培养基加入10μM Gp Antagonist 2A(Gαq抑制剂Gp-2A),培养24 h后与H2O2诱导凋亡组同时加入等浓度H2O2,对照组加等量PBS,8 h后用流式细胞仪检侧细胞凋亡.[结果]在1 mM H2O2下,加入Gp-2A的实验组凋亡明显低于不加组.[结论]Gp-2A可以明显抑制低浓度下H2O2诱导的Thp-1细胞的凋亡.
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黑素细胞中PINK1的表达及在氧化损伤中的作用
目的 明确正常人黑素细胞PIG1中PINK1的表达,探讨PINK1在黑素细胞氧化损伤中的作用.方法 ①采用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)及免疫印迹法(WB),检测PIG1黑素细胞中PINK1的mRNA及蛋白的表达水平;②不同浓度 H202处理PIG1细胞24h, CCK-8法测定细胞增殖活力,确定H2O2适浓度;③设计并合成3对PINK1干扰片段(siRNA)转染PIG1细胞,采用RT-qPCR法筛选干扰效率高的siRNA;④实验分组:对照组、Mock组、NC组、转染组.细胞转染48 h后,再加入H2O2处理24h,观察各组细胞形态,CCK-8法测定细胞增殖活力.结果 ①在PIG1黑素细胞中检测到PINK1 mRNA及蛋白的表达;②黑素细胞增殖活力呈H2O2浓度依赖性降低,0.6mmol/L H2O2组降低至(49.02 ±2.40)％,接近IC50,故以此浓度作用24h建立氧化损伤模型;③与Mock组相比,PINKl-siR-NA3转染48h干扰效率高(＞90％ );④与对照组相比,PINK1-siRNA3转染组树突回缩及变圆悬浮的细胞明显增多,转染组细胞增殖活力明显降低(P ＜0.01) .结论 本研究首次明确了 PINK1在正常人黑素细胞中的表达,下调PINK1可加重 H202所致的黑素细胞形态学改变及活力降低,表明PINK1对黑素细胞具有一定的保护性作用.
