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肝乐颗粒对肝纤维化大鼠的保护作用
目的:观察肝乐颗粒(Ganle Keli,GL)对肝纤维化大鼠的保护作用.方法:除正常组外,其余各组采用四氯化碳诱导肝纤维化模型,每周2次,连续12周.于造模第7周起,给药组分别ig给予相应的受试药物,正常组和模型组给予等量溶媒,疗程6周.实验结束后,股动脉采血,比色法测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、羟脯氨酸(Hyp)含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色;免疫组化技术测定肝组织中核因子-kB(NF-kB)蛋白的表达,RT-PCR技术测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达.结果:肝乐颗粒1.5,3,6 g·kg-1各剂量组能明显降低肝纤维化大鼠ALT,AST,MDA,Hyp含量,升高SOD水平;减轻大鼠肝纤维化增生程度的同时抑制肝组织中NF-kB蛋白和TNF-αmRNA的表达.结论:肝乐颗粒对CCl4诱导的肝纤维化大鼠有很好的保护作用.
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肝乐颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用
目的:明确肝乐颗粒对转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路的干预作用,探讨其防治肝纤维化的分子学机制.方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,肝乐颗粒(1.5,3.0,6.0 g·kg-1)和秋水仙碱(1.0×10-4g·kg-l).采用50％四氯化碳每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型.造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应剂量的肝乐颗粒和秋水仙碱,每天1次,连续6周.末次给药8h后,处置大鼠,取固定部位肝脏组织,苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测肝组织中Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ),Smad2,TGF-β1或TGF-βⅠ型受体(TβR Ⅰ)蛋白的表达,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测肝组织中Collagen Ⅰ,Smad2,TGF-β1mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化损伤程度,肝组织中Collagen Ⅰ,TGF-β1,Smad2,TβR Ⅰ蛋白及mRNA的表达明显增加(P＜0.01);与模型组比较,肝乐颗粒中、高剂量组不仅可减轻肝组织病理损伤程度,减少胶原沉积,还可显著降低Collagen Ⅰ,TGF-β1,Smad2,TβR Ⅰ蛋白及mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:肝乐颗粒对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路,从而抑制HSC活化,减少细胞外基质过度沉积有关.
关键词： 肝乐颗粒 肝纤维化 活性生长因子-β1/Smad信号通路 -
高效液相色谱法测定肝乐颗粒中丹酚酸B的含量
目的建立高效液相色谱测定肝乐颗粒中丹酚酸B含量的方法.方法 50%甲醇超声提取,YWG-C18(4.6 mm×200 mm)液相色谱柱测定,流动相为甲醇:5%乙酸水(31∶ 69),柱温为室温,检测波长为281 nm,流速:1 mL/min.结果丹酚酸B的线性范围在80.27～401.35 μg,r=0.9998,平均回收率为97.3%,RSD为0.54(n=5).结论利用高效液相色谱测定肝乐颗粒中丹酚酸B的含量,操作简便,结果准确,可作为该产品质量控制的方法之一.
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肝乐颗粒的质量控制研究
目的:探讨制订肝乐颗粒的质量标准.方法:采用薄层色谱法,对肝乐颗粒中黄芪、丹参、白芍、何首乌进行鉴别.结果:黄芪、丹参、白芍、何首乌的定性鉴别灵敏、专属.结论:建立的定性方法,可作为本品的质量控制标准.
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多指标综合评分法正交试验优选肝乐颗粒醇提工艺
目的:采用UPLC指纹图谱结合多指标综合评分法优选肝乐颗粒的醇提工艺.方法:采用正交设计法,以绿原酸和芍药苷的含量、干膏得率、正交样品指纹图谱中9个主要共有峰的总面积为指标,考察溶剂倍数、乙醇体积分数、提取时间和提取次数四因素对肝乐颗粒醇提工艺的影响.采用综合评分法进行数据分析,建立9个正交样品的指纹图谱,并对其用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本:2004A)和SPSS 19.0软件分别进行相似度分析、聚类分析,优选肝乐颗粒的佳醇提工艺.结果:肝乐颗粒的佳醇提工艺为:溶剂倍数为10倍量的60％乙醇回流提取3次,每次2h;9个正交样品的相似度均大于0.97;聚类分析表明正交样品可大致聚成4类.结论:优选的提取工艺合理、可行,有效成分含量高,建立的指纹图谱重现性好,验证了优选醇提工艺的可行性,为肝乐颗粒醇提工艺的确定提供实验依据.
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多指标正交试验结合UPLC优选肝乐颗粒水提工艺
目的:优选肝乐颗粒的水提工艺.方法:以绿原酸含量、芍药苷含量、柚皮苷含量、新橙皮苷含量及干浸膏得率为评价指标,利用L9(34)正交试验法,考察加水量、提取时间、提取次数及浸泡时间对肝乐颗粒水提工艺的影响.结果:肝乐颗粒佳水提工艺为:药材加8倍量水,浸泡时间为2 h,水煮提取3次,每次1 h.按照优选出的佳提取工艺进行验证试验,得到4种指标成分的含量分别为绿原酸(0.5236±0.0054)mg·g-1,RSD为1.50％;芍药苷(4.257±0.0035)mg·g-1,RSD为1.73％;柚皮苷(6.638±0.0026)mg·g-1,RSD为1.87％;新橙皮苷(3.628±0.0062)mg·g-1,RSD为0.99％;干浸膏得率为23.13％±0.36％,RSD为1.71％.结论:优选出的水提工艺科学合理、稳定可行,为肝乐颗粒的大规模生产提供了更加可靠的实验依据.
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肝乐颗粒联合恩替卡韦治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎临床疗效观察
目的:观察肝乐颗粒联合恩替卡韦在肝郁脾虚型慢性乙型肝炎(以下简称慢乙肝)治疗中的疗效.方法:采用随机对照的方法.将60例肝郁脾虚型慢乙肝患者随机分为治疗组(肝乐颗粒联合恩替卡韦)和对照组(恩替卡韦),观察6个月后患者中医证候及肝功能等改善情况.结果:治疗组与对照组中医证候及肝功能均有不同程度改善,但治疗组改善作用明显高于对照组(P＜0.05).结论:肝乐颗粒对肝郁脾虚型慢乙肝有明显治疗作用.
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高效液相色谱法-蒸发光散射检测器同时测定肝乐颗粒中黄芪甲苷和芍药苷的含量
目的 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)建立肝乐颗粒中黄芪甲苷和芍药苷的含量测定方法.方法 以水和甲醇分别为流动相A和流动相B,在Hypersil ODS XB-C18柱(4.6mm×250 mm,5μm)上进行梯度洗脱.洗脱程序:0～5 min,A 60％;6～10 min,A 25％,11～18 min,A 10％;流速:1.2 mL/min;柱温:30℃.ELSD参数优化:增益值分别设为1、2、3;漂移管温度分别设为50、70、90、110℃;载气流量分别为1.2、1.6、2.0、2.4 L/min.结果 通过优化参数,在增益值为2,漂移管温度为90℃和载气流量为2.0 L/min时,对芍药苷和黄芪甲苷的含量检测结果佳.芍药苷和黄芪甲苷的平均加样回收率分别为99.58％、100.37％,RSD分别为2.32％、1.21％.结论 该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,所优化的ELSD参数及建立的HPLC-ELSD法适合肝乐颗粒中芍药苷和黄芪甲苷含量的同时测定.
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肝乐颗粒中黄曲霉毒素测定方法的研究
目的 建立肝乐颗粒中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的检查方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为CLOVERSIL C18柱(6 mm×150 mm,5μm)柱温为35℃;以乙腈-甲醇(18:40)为流动相A,以水为流动相B,梯度洗脱;激发波长为360 nm,发射波长为450 nm;流速为1.0 mL/min.结果 高效液相色谱法线性关系良好(r＞0.999),回收率范围73.7％～ 96.2％(RSD范围0.1％～2.4％).结论 本方法简便可行,专属性强,可用于肝乐颗粒中黄曲霉毒素的检测.
