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AG490抑制K562细胞增殖和下调PHLPP蛋白的表达
本研究旨在探讨AG490抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡过程中p-Akt及PHLPP表达的变化.以不同浓度的AG490作用于人慢性髓系急性红白血病细胞株K562,采用WST-1法检测细胞的增殖活性,Annexin VFITC双染检测细胞凋亡,Western blot检测p-Akt、Akt、PHLPP蛋白表达水平的变化.结果表明,AG490以时间及浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,其48 h的IC50值为338.0 μmol/L；AG490 100 μmol/L诱导K562细胞凋亡,呈明显的时间依赖性；AG490 100 μmol/L作用于K562细胞后p-Akt及其调节蛋白PHLPP的表达水平呈时间依赖性方式下降,但是对总Akt的表达水平无明显影响.结论:AG490可能通过下调p-Akt的表达抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,但同时也可能通过下调p-Akt的调节蛋白PHLPP的表达水平而使AG490对K562增殖的抑制效果受限.
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胃癌组织中5-脂氧合酶的表达及其与磷酸化Akt相的关性
目的: 检测5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在胃癌组织中的表达,并探讨5-LOX对磷酸化Akt(phosphorylatedAkt,p-Akt)表达的影响.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中5-LOX mRNA表达水平;免疫印迹法(Westernblot)检测5-LOX和p-Akt蛋白的表达水平.结果: 5-LOX在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(76.7% vs 40%,P＜0.05,mRNA水平;56.7%vs30%,P＜0.05,蛋白水平).p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达也显著高于癌旁正常组织(56.7%vs26.7%,P＜0.05).相关性分析表明,胃癌组织中5-LOX蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=0.186,P＞0.05).结论: 5-LOX蛋白对胃癌的发生、发展有一定促进作用,但与PI3-K/Akt信号通路无关.
关键词： 胃肿瘤 5-脂氧合酶 磷酸化Akt 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹 -
Toll样受体4与胰腺癌PANC1细胞对吉西他滨敏感性的关系
目的 观察Toll样受体4(TLR4)与胰腺癌PANC1细胞对吉西他滨(GEM)敏感性的关系,探讨其相关机制.方法 将PANC1细胞分为GEM组、脂多糖(LPS)+ GEM组、TLR4-siRNA+ GEM组.GEM组给予GEM处理,LPS+ GEM组先用1 mg/L的LPS干预4h后再用GEM处理,TLR4-siRNA+GEM组先用100 pmol/ml TLR4-siRNA转染细胞4h后再用GEM处理.以不做任何处理的细胞作为对照组.采用MTT法检测各组细胞的增殖,Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞TLR4、磷酸化AKT (p-AKT)、活性Caspase-3蛋白表达.结果 GEM组、LPS+ GEM组、TLR4-siRNA+ GEM组GEM对PANC1细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(8.90±0.62)、(14.21±0.95)、(3.96±0.27) mg/L,LPS+ GEM组显著高于GEM组,TLR4-siRNA+ GEM组显著低于GEM组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).LPS+ GEM组典型凋亡形态学改变的细胞数较GEM组减少,而TLR4-siRNA+ GEM组则较GEM组增多;对照组、GEM组、LPS+ GEM组、TLR4-siRNA+ GEM组细胞凋亡率分别为(2.1±0.3)％、(15.1±2.3)％、(9.8±1.5)％、(22.9±3.1)％,LPS+GEM组显著低于GEM组,TLR4-siRNA+GEM组显著高于GEM组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).4组的TLR4表达量分别为0.83±0.08、0.81±0.07、0.85±0.07、0.16±0.03;p-AKT表达量为0.61±0.05、0.36±0.03、0.73±0.07、0.21±0.02;活性Caspase-3表达量为0.66±0.05、0.73±0.07、0.45 ±0.04、0.91±0.07.TLR4-siRNA+ GEM组的TLR4、p-AKT表达均较GEM组显著下降(P值均＜0.01),而活性Caspase-3表达显著增高(P＜0.05).LPS+ GEM组的p-AKT表达较GEM组显著增加(P＜0.01),而活性Caspase-3蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论 TLR4可抑制胰腺癌PNAC1细胞对GEM的敏感性,其机制可能与激活PI3 K/AKT通路,下调活性Caspase-3表达有关.
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芒柄花素联合MK2206对不同亚型乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 体外观察芒柄花素联合Akt抑制剂MK2206对不同分子亚型人乳腺癌MC卜7、BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测芒柄花素单独或联合MK2206对4种不同分子亚型乳腺癌细胞增殖的抑制作用.流式细胞术分析单独用药及联合用药对乳腺癌细胞生长凋亡的影响.实时荧光定量PCR法检测实验组中凋亡相关基因Bcb2和Bax的表达.蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白表达.结果 芒柄花素和MK2206均能抑制4种乳腺癌细胞的生长,呈剂量依赖性.选择80 μmol/L芒柄花素和20 nmol/L MK2206单独和联合处理4种细胞.联合用药后的抑制率高于单用药组,其中BT-474及MDA-MB-231细胞的联合用药组产生了协同作用,Q＞1.15.两种药物均可诱导4种细胞凋亡,两药联用可使BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞凋亡率显著增加,P＜0.01.实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法检测结果发现,单独用药能上调Bax及下调Bcl-2基因表达水平,并下调p-Akt蛋白表达水平,其中BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞的联合用药组效果更显著,P＜0.01.结论 MK2206联合芒柄花素可抑制4种不同亚型乳腺癌细胞的增殖,诱导凋亡,联合用药效果更显著,4种细胞效果有差异,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016对肺癌A549细胞和小鼠Lewis肺癌的抑制作用
目的 探讨新型组蛋白去乙酰化酶(H DAC)抑制剂DWP0016对肺癌的抑制作用及可能机制.方法 ①体外实验:DWP0016 0.625～10 μmol·L-1作用A549细胞48 h,MTT法检测细胞存活,实时荧光定量PCR检测10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN) mRNA水平;Western蛋白质印迹法测定总组蛋白H3,乙酰化H3(Ac-H3),细胞周期调控因子p21,PTEN,总Akt和磷酸化Akt (p-Akt)的表达.②在体实验:小鼠腋下接种0.2 ml Lewis肿瘤细胞悬液制备肺癌模型,7d后按照分组分别ip给予DWP001612.5,25和50 mg· kg-1及伏林司他(SAHA)50 mg· kg-1,每天1次,连续8d.取肿瘤组织称重,计算肿瘤抑制率;免疫组化法检测肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达.结果 ①体外实验:MTT结果显示,DWP0016抑制A549细胞增殖的IC50为2.51 μmol·L-1,SAHA IC50为6.03 μmol·L-1.与正常对照组相比,DWP0016 2.5 μmol· L-1组细胞组蛋白H3乙酰化及p21蛋白表达显著上升(P＜0.05),PTEN的转录水平和蛋白水平上调,Akt的磷酸化水平下调(P＜0.05).②在体实验:与模型组比较,给予DWP001612.5 mg·kg-1移植瘤小鼠的瘤质量显著降低(P＜0.05),抑瘤率达42.0％,给予DWP0016 50 mg·kg-1肿瘤抑制率高于SAHA 50 mg·kg-1 (P＜0.05);与模型组比较,肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达增加.结论 DWP0016能明显抑制A549细胞增殖和Lewis肺癌模型小鼠的肿瘤生长,其机制与诱导Ac-H3的表达、激活p21、促进抑癌因子PTEN的转录及下调Akt的磷酸化水平有关.
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非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体与磷酸化Akt蛋白的表达及其意义
目的 评价非小细胞肺癌(NSCLC)标本中表皮生长因子受体(EGFR)与其信号传导通路下游的磷酸化Akt(p-Akt)蛋白质表达的意义.方法 制作189例非小细胞肺癌标本的组织微阵列,运用免疫组织化学方法检测肺癌组织中的EGFR和p-Akt蛋白质的表达,分析该两种蛋白表达与患者预后生存之间的关系.结果 EGFR在NSCLC中的阳性表达率为54.5%(103/189),单因素分析提示其表达程度与性别(x2=4.267,P=0.039),病理类型(x2=14.749,P=0.002),分化程度(x2=6.295,P=0.043)以及病理分期(x2=9.318,P=0.025)相关,而Logistic多因素回归分析显示EGFR表达仅与病理类型之间的相关性具有统计学意义(P=0.047).p-Akt在NSCLC中的阳性表达率为51.3%(97/189),其阳性表达率与各临床病理特征无关(P＞0.05).二者阳性表达均与预后无关(P值分别为0.972和0.903).结论 NSCLC中EGFR和p-Akt蛋白质阳性表达率对患者预后无提示意义,尚不能以EGFR或p-Akt蛋白质表达作为NSCLC分子分期或判断预后的指标.
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PI3K/Akt信号通路与卵巢癌耐药关系的研究
目的 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测PI3K和p-Akt蛋白在40例原发性上皮性卵巢癌组织中的表达情况:应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇(PTX)、表阿霉素(EADM)、顺铂(CDDP)和卡铂(CBP)4种临床常用化疗药物的敏感性.结果 65例卵巢癌标本进行体外药敏试验,25例失败,可评价标本为40例.卵巢癌组织中PI3K蛋白的阳性率为60%(24/40).p-Akt蛋白的阳性率为65%(26/40),二者呈正相关(r=0.578,P<0.01).PI3K蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均下降,耐药率均升高,其中CDDP的平均抑制率差异显著(z=-3.567,P<0.01).p-Akt蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均下降,耐药率均升高,其中CDDP、CBP两种药物的平均抑制率差异均显著(z=-2.201和z=-2.298;P<0.05和P<0.05).结论 在卵巢上皮癌组织中,铂类药物的原发性耐药可能与PI3K/Akt信号通路异常活化有关.
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DSG2、E-cadherin及pAkt在前列腺癌组织中的表达及相关性
目的 探讨桥粒芯糖蛋白(DSG)2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及磷酸化Akt (pAkt)在前列腺癌组织中的表达水平及其相关性.方法 选取117例前列腺癌患者(前列腺癌组)、100例良性前列腺增生患者(良性病变组)及30例健康志愿者(对照组)为研究对象,采用组织芯片法检测三组研究对象组织中的DSG2、E-cadherin、pAkt表达水平.结果 前列腺癌组、良性病变组DSG2、E-cadherin表达水平低于对照组,pAkt表达水平高于对照组,并且前列腺癌组DSG2、E-cadherin表达水平低于良性病变组,pAkt表达水平高于良性病变组(P＜0.05).前列腺特异性抗原(PSA)≥8 ng/ml的前列腺癌患者组织中DSG2、E-cadherin表达水平低于PSA＜8 ng/ml患者,pAkt表达水平高于PSA＜8 ng/ml患者;Ⅲ～Ⅳ期前列腺癌患者组织中DSG2、E-cadherin表达水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者,有转移的前列腺癌组织中DSG2、E-cadherin表达水平低于无转移者,pAkt表达水平高于无转移者(P＜0.05).经Pearson积矩相关分析,DSG2与E-cadherin呈正相关关系(r=0.659,P＜0.05),DSG2、E-cadherin与pAkt均呈负相关关系(r=-0.739、-0.682,P＜0.05).结论 前列腺癌组织中DSG2、E-cadherin呈低表达,pAkt呈高表达,三者相互作用共同参与了前列腺癌的发生发展,同时可用于评估前列腺癌的病情和预后.
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黄芪注射液及其有效成分对乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响
目的:观察黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对basal-like乳腺癌细胞株MDA-MB-468和MDA-MB-231增殖和磷酸化Akt(phospho-Akt,P-Akt)蛋白表达的影响.方法:用不同浓度的黄芪注射液、黄芪甲苷和芒柄花素对乳腺癌细胞株MDA-MB-468和MDA-MB-231进行干预,以不加药物干预的细胞作为空白对照.用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察药物对细胞增殖的作用.再选取药物抑制细胞增殖的佳浓度,用细胞内蛋白质印迹法观察对p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)蛋白表达水平的影响.结果:根据MTT比色法实验结果确定黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素和黄芪甲苷配伍芒柄花素的佳浓度,黄芪注射液终浓度为生药含量1 g/mL,黄芪甲苷终浓度为80μg/mL,芒柄花素终浓度为40μg/mL,黄芪甲苷:芒柄花素为1:4.干预MDA-MB-468细胞1 d后,各用药组p-Akt(Thr 308)和p-Akt(Ser 473)蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);药物干预2 d后,各用药组p-Akt(Thr 308)水平显著下调(P<0.05),其中以芒柄花素组、黄芪甲苷+芒柄花素组下调为明显;芒柄花素和黄芪甲苷+芒柄花素明显下调p-Akt(Ser 473)蛋白表达.干预MDA-MB-231细胞1d后,与阴性对照组比较,芒柄花素组和黄芪甲苷+芒柄花素组p-Akt(Thr 308)蛋白水平有明显的下调;在药物干预2 d后,黄芪注射液、芒柄花素和黄芪甲苷+芒柄花素组p-Akt(Thr 308)蛋白水平都有明显下调.各用药组p-Akt(Ser 473)蛋白水平与阴性对照组比较,差异无统计学意义.结论:黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对乳腺癌细胞株MDA-MB-468和MDA-MB-231均有抑制增殖的作用,但抑制作用程度及其浓度存在差异,其抑制细胞增殖的机制可能与下调Akt的磷酸化有关.
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PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以不同浓度的渥曼青霉素作用于人类髓细胞白血病细胞K562,采用MTT法检测细胞增殖活性,单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤形成的"彗星"样拖尾现象,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡,Western blotting、RT-PCR检测渥曼青霉素作用K562细胞后总Akt和磷酸化Akt以及NF-κB基因及蛋白表达水平的变化.结果: 渥曼青霉素以时间-剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC_(50)是25 nmol/L.渥曼青霉素诱导K562细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量依赖性增强.渥曼青霉素作用后K562细胞DNA链断裂,呈现"彗星"拖尾现象,其尾长与拖尾率显著高于对照组(P<0.01).渥曼青霉素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制磷酸化Akt以及NF-κB表达,但对总Akt蛋白没有明显影响.结论: 渥曼青霉素以时间和剂量依赖方式明显抑制K562细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与其下调磷酸化PI3K/Akt信号通路以及NF-κB蛋白表达有关.
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miRNA-200c通过抑制Akt通路提高胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性
目的:研究miRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制.方法:Western blotting检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞E-cadherin、PTEN、p-Akt及总Akt蛋白的表达；瞬时转染miRNA-200c前体(miRNA-200c precursor,Pre-200c)提高SGC7901/DDP细胞miRNA-200c的表达,MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,并分析p-Akt表达的改变；应用Akt通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞抑制Akt磷酸化,检测处理后细胞对顺铂的敏感性.结果:与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中p-Akt蛋白的表达量显著增高(1.02±0.09 vs 0.17±0.02,P＜0.05),E-cadherin、PTEN蛋白的表达量显著降低(0.10±0.03vs 0.47 ±0.06,0.18±0.06 vs 0.87±0.06；均P＜0.05).转染Pre-200c后,顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50显著低于对照组[(7.52 ±0.19)vs(12.18 ±0.29) mg/L,P＜0.05],细胞中p-Akt蛋白的表达量也显著低于对照组(0.22 ±0.04vs0.69±0.09,P＜0.05)；LY94002处理后,SGC7901/DDP细胞p-Akt蛋白的表达显著抑制(0.18 ±0.06 vs 0.66±0.10,P＜0.05),顺铂对细胞的IC50显著低于对照组[(6.80±0.28)vs(11.94±1.73) mg/L,P＜0.05].结论:SGC7901/DDP细胞的耐药可能与E-cadherin和PTEN蛋白的表达缺失及Akt通路的异常激活有关,而miRNA-200c提高该细胞对顺铂的敏感性可能是通过抑制Akt通路而发挥作用.
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藤黄酸对人胃腺癌细胞BGC-823细胞端粒酶逆转录酶和AKt蛋白磷酸化表达的影响
目的探讨藤黄酸（ GA）对人胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和端粒酶逆转录酶（ hTERT） mRNA、AKt蛋白磷酸化表达的影响。方法将处于对数生长期的BGC-823细胞制成细胞悬液，加入96孔酶标板内，加入不同浓度的GA孵育24、48、72 h后，收集细胞，采用MTT比色法测定半抑制浓度（ IC50）值；分别采用聚合酶链式反应（ PCR）、酶联免疫反应（ ELISA）法检测端粒酶的活性和逆转录PCR（ RT-PCR）法检测hTERT mRNA的表达；通过免疫共沉淀（IP）法获得hTERT与磷酸化AKt（p-AKt）蛋白的结合体，然后用Western blot法检测p-AKt蛋白表达的变化。结果 GA可以明显抑制胃癌细胞BGC-823的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达，呈一定的时效、量效关系；进一步研究发现，GA能够抑制hTERT 和p-AKt蛋白的结合，且作用呈时间依赖性，进而影响p-AKt参与的hTERT的活化，从而完成对hTERT转录后的调控，抑制端粒酶的活性。结论 GA可明显抑制胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和hTERT的表达，GA对BGC-823细胞生长抑制的作用机制可能与GA影响p-AKt参与的hTERT的活化，从而完成对hTERT转录后的调控有关。
关键词： 人胃癌细胞BGC-823 藤黄酸 端粒酶 端粒酶逆转录酶 磷酸化Akt -
磷酸化STAT3和磷酸化Akt在黑素瘤中的过度表达与肿瘤浸润及转移相关性研究
目的:了解磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(phosphorylated signal tranducers and activators of transcription,p-STAT3)和磷酸化Akt(p-Akt)在黑素瘤中的表达及与肿瘤浸润、转移的关系;方法:采用免疫组化法检测41例黑素瘤和23例色素痣中的p-STAT3和p-Akt,评估它们与肿瘤浸润、转移的关系.结果:p-STAT3在23例色素痣中有2例表达阳性,在41例黑素瘤中有29例表达阳性;p-Akt在23例色素痣中有3例表达阳性,41例黑素瘤中有26例表达阳性,经卡方检验,P＜0.05,差异有统计学意义.在黑素瘤中,p-STAT3与p-Akt的阳性表达之间呈正相关,并且p-STAT3和p-Akt的表达阳性率在有浸润或转移的黑素瘤中远高于无浸润或转移的黑素瘤,差异有统计学意义.结论:p-STAT3和p-Akt在黑素瘤的发病、浸润及转移机制中具有重要作用.
关键词： 磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3 磷酸化Akt 黑素瘤 色素痣 -
磷酸化Akt和磷酸化β-Catenin蛋白在胃癌组织中的表达
目的 探讨胃癌中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化β-catenin(p-β-catenin)蛋白表达与临床病理参数的相关性.方法 取手术切除的86例胃癌组织标本(A组)、胃癌旁组织75例(B组)和正常胃黏膜组织40例(C组),用免疫组织化学法检测p-Akt和p-β-catenin蛋白表达,分析p-Akt和p-β-catenin蛋白的表达差异及其与临床病理特征的相关性.结果 A组p-Akt和p-β-catenin蛋白阳性表达率为81.4％和88.4％,与B组的68.0％和72.0％相仿,但均高于C组的12.5％和15.0％(P＜0.01).A组p-Akt和p-β-catenin蛋白表达与患者的年龄、性别和类型均无统计学差异,而与肿瘤的分化程度及TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).A组p-Akt表达与p-β-catenin蛋白表达呈正相关.结论 p-Akt和p-β-catenin蛋白在胃癌组织中表达明显上调,可联合检测作为评估胃癌恶性生物学行为和预后的指标.
关键词： 磷酸化Akt 磷酸化β-catenin 胃癌 -
脑胶质瘤中表皮生长因子受体磷酸化AKT的表达及临床意义
目的 探讨不同病理级别脑胶质瘤中表皮生长因子受体(EGFR)及磷酸化AKT (PAKT)的表达及临床意义.方法 收集经手术切除的65例脑胶质瘤标本和5例正常脑组织,行免疫组织化学方法染色,检测EGFR与PAKT表达水平.结果 脑胶质瘤组织中EGFR和PAKT的阳性表达率分别为73.84%和63.08%;EGFR和PAKT在Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤的表达率为80.85%和72.34%,均显著高于I～Ⅱ级的55.56%和38.89%(P＜0.05).EGFR与PAKT的表达水平呈正相关(r=0.68,P＜0.01).结论 EGFR与PAKT在脑胶质瘤中存在过表达与共表达,且与胶质瘤的恶性程度相关;检测两者表达水平对胶质瘤的早期诊断、靶向治疗及预测患者的预后有重要价值.
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蝮蛇毒蛋白提取物刺激糖作用的初步研究
目的:探讨蛇毒蛋白提取物刺激Hep G2细胞的葡萄糖吸收及对糖吸收相关酶Akt活性的影响.方法:培养的Hep G2细胞分成4组:正常对照组、胰岛素组、蛇毒蛋白提取物组、胰岛素+蛇毒蛋白提取物组,每组6孔.用液闪计数法检测Hep G2细胞对葡萄糖的吸收;用Western blot法检测Akt的活性变化.结果:与正常对照组相比,蛇毒蛋白提取物组可显著增加细胞对葡萄糖的吸收(P＜0.01),并加强胰岛素刺激的葡萄糖吸收(P＜0.01);蛇毒蛋白提取物可激活Akt的活性.结论:蛇毒蛋白提取物具有刺激糖吸收以及加强胰岛素刺激的糖吸收的作用,可作为糖尿病治疗的潜在药物.
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槲皮素通过调控PI3K/Akt信号通路对血管内皮祖细胞发挥保护作用
目的 探讨槲皮素(quercetin,Que)对氧化应激情况下血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的保护作用及其作用机制.方法 分离并诱导分化人脐血EPCs,随机分为对照组;过氧化氢(H2 O2)组:加入500μmol·L-1的H2 O2,建立氧化应激损伤EPCs模型;Que干预组:先分别加入浓度为60、90μmol·L-1的Que预处理30 min后,再加500μmol·L-1 H2 O2共同培养,培养12、24、48 h后,WST-1法观察EPCs增殖情况;Western blot检测Akt、磷酸化Akt的表达水平;实时荧光RT-PCR法检测PI3K、Akt3 mRNA的表达水平.结果 与空白对照组对比,经过H2 O2处理的EPCs增殖能力明显降低,且EPCs的Akt蛋白表达明显下降,PI3K、AKT3 mRNA明显下降(P<0.01,P<0.05).加入60、90μmol·L-1 Que处理12、24、48 h后,损伤的EPCs细胞增殖能力明显增加,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05).同时明显升高EPCs磷酸化Akt的蛋白表达(P<0.05),以及PI3K、AKT3 mRNA表达(P<0.01).结论 槲皮素对H2 O2诱导血管EPCs氧化应激损伤起到修复作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路,减少氧化应激对脑血管病灶的影响,促进脑血管EPCs增殖和分化.
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乳腺癌组织中 PTEN、p-AKT 蛋白表达变化及相关性分析
目的：探讨乳腺癌组织中蛋白酪氨酸磷酸酶基因（ PTEN）、p-AKT蛋白水平变化及相关性。方法采用免疫组化法检测乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性病变组织中PTEN和p-AKT蛋白表达，探讨二者之间的相关性，并分析其与临床病理学指标之间的关系。结果乳腺癌组织、癌旁组织、良性病变组织 PTEN蛋白表达阳性率分别为17．50％、32％、57％，p-AKT蛋白表达阳性率分别为43．5％、23％、17％，三者比较，P均＜0．05；PTEN与p-AKT表达呈负相关（r＝-0．54， P＜0．05）。 PTEN和p-AKT蛋白在乳腺癌中的表达水平与组织学分级及淋巴结转移有关（P均＜0．05）。结论乳腺癌组织中PTEN蛋白水平降低，p-AKT蛋白水平升高，PTEN与p -AKT表达呈负相关；PTEN 蛋白表达缺失导致 AKT 信号传导通路持续活化可能在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。
关键词： 乳腺肿瘤 乳腺癌 蛋白酪氨酸磷酸酶基因 磷酸化Akt -
Akt抑制剂与利妥昔单抗联合应用对伯基特淋巴瘤细胞株Daudi增殖及凋亡的影响
目的 探讨Akt抑制剂(AZD5363)与利妥昔单抗联合应用对伯基特淋巴瘤(BL)细胞株Daudi增殖和凋亡的影响,并探讨其相关机制.方法 培养人BL细胞株Daudi,将其分为对照组(只含等量溶媒)、AZD5363组(加入40μmol/L AZD5363)、利妥昔单抗组(加入50μg/mL利妥昔单抗)、联合用药组(加入40μmol/L AZD5363+50μg/mL利妥昔单抗),置于培养箱中培养24～72 h.分别采用CCK8法、流式细胞术测算AZD5363、利妥昔单抗及两者联合对Daudi细胞的增殖抑制和凋亡率,采用Western blotting法检测细胞磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(T-Akt)蛋白.结果 与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,联合用药组在24、48、72 h时Daudi细胞增殖抑制率高(P均＜0.05).AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组与对照组相比,联合用药组与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,干预Daudi细胞48、72 h后细胞凋亡率高(P均＜0.05).对照组、AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组细胞p-Akt相对表达量分别为0.59±0.06、0.33±0.03、0.45±0.04、0.18±0.04,AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组与对照组相比,联合用药组与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,P均＜0.05.结论 AZD5363与利妥昔单抗联合应用可增强对BL细胞株Daudi的增殖抑制作用,促使细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制Akt磷酸化,阻断PI3k/Akt信号转导通路,从而发挥抗肿瘤效应.
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腋窝淋巴结阴性乳腺癌组织中PTEN、p-Akt、P-gp表达及意义
目的 进一步探讨磷酸化Akt(p-Akt)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)及多药耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)在乳腺癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化法检测81份腋窝淋巴结阴性(LNN)乳腺浸润性癌组织标本中p-Akt、PTEN及P-gp表达,采用四格表的x2检验、确切概率法和Cox比例风险模型分析三者与乳腺癌临床病理因素的关系.结果 LNN乳腺癌组织中p-Akt阳性表达率明显高于癌旁组织(P=0.034)；PTEN阳性表达率显著低于癌旁组织(P =0.001)；p-Akt过表达与PTEN低表达均与肿瘤分化、雌激素受体(ER)阴性、复发转移和5年生存率有关.P-gp在LNN乳腺癌组织中阳性表达率为39.5％,与肿瘤复发转移显著有关.多因素分析发现,p-Akt和PTEN是影响预后的独立因素,且p-Akt与P-gp表达呈正相关(r=0.548,P=0.045).结论 p-Akt、PTEN及P-gp均参与了乳腺癌的发生、发展,检测三者水平有助于患者预后判新.
