首页 > 文献资料
-
IL-21对CTL细胞抗daudi细胞作用及机制的研究
目的：通过特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）与IL-21共同作用daudi细胞，观察CTL与IL-21对daudi细胞的作用机制。方法培养肿瘤特异性CTL细胞，体外培养daudi细胞，设置对照组和实验组共6组细胞，CTL细胞与IL-21联合作用淋巴瘤细胞。MTT法检测细胞抑制率，检测细胞培养上清中IFN-γ的含量，检测CTL细胞的毒性作用，RT-PCR检测daudi细胞中Caspase-3 mRNA的表达。结果各组均能抑制daudi细胞的生长，对照组培养上清中IFN-γ含量（401.32±3.54）pg/ml， CTL细胞杀伤率（82.34±2.7）%，Caspase-3 mRNA相对表达量（3.37±0.04）均明显高于对照组（P＜0.05）。结论 IL-21是通过增强CTL细胞杀伤作用，上调Caspase-3蛋白表达，从而抑制daudi细胞增殖。
-
EBV立刻早期蛋白Zta基因对Daudi细胞周期的影响及其机制研究
目的 探讨EBV立刻早期蛋白Zta基因对Daudi细胞周期的影响及其可能机制.方法 构建Zta基因真核表达载体,通过电穿孔将该载体转染Daudi细胞,用流式细胞术检测细胞周期的变化,用蛋白印迹试验检测细胞周期蛋白p21、Rb、E2F-1的表达.结果 成功构建了 Zta基因表达载体,转染Zta基因可抑制Daudi细胞的增殖,并促进Daudi细胞由G0/G11期[(30.0±3.4)％)]向S期[(47.7±1.1)％]的转化.同时转染Zta基因可下调Rb的表达、上调E2F-1、p21的表达.结论 转染Zta基因使Daudi细胞周期由Go/G1期向S期转变,其机制可能与Rb的表达下降、E2F-1和p21表达上调有关.
-
干扰素调节因子4在B细胞淋巴瘤细胞株中表达及其与细胞耐药的关系
背景:干扰素调节因子4是B细胞终末分化的重要转录因子,限制性表达于淋巴细胞,在基因调控中起重要作用,但其与疾病预后的终关系仍未确定.目的:假设干扰素调节因子4在B淋巴细胞中的表达与细胞耐药有关,观察新型抗肿瘤药蛋白酶体抑制剂硼替佐米对干扰素调节因子4的影响.设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2006-03/2007-02在河南省肿瘤医院中心实验室完成.材料:Daudi和Namalwa细胞株由上海血液学研究所提供.阿霉素为山西普德药业有限公司产品,硼替佐米为西安杨森公司产品.方法:将Daudi和Namalwa细胞各自接种于200 μ L RPMI-1640培养体系中,分别加入0,5,10,20,30,50,100 μg/L阿霉素:对T-Namalwa细胞,另设立联合用药组,即15nmol/L硼替佐米+上述各浓度阿霉素:药物处理48h后,加入MTT继续培养.选择单药50 μg/L阿霉素、15 mnol/L硼替佐米以及两药联合作用Namalwa细胞12,24,48,72h,行半定量RT-PCR和Western印迹分析.主要观察指标:干扰素调节因子4在细胞株中的表达.MTT法检测细胞增殖抑制率.AnnexinV/PI法检测细胞凋亡情况.药物对Namalwa细胞干扰素调节因子4基因和蛋白表达的影响.结果:Namalwa细胞表达干扰素调节因子4基因和蛋白,Dandi细胞中未检测出其表达.各浓度阿霉紊作用48 h后,Daudi细胞增殖抑制率显著高于Namalwa细胞(P<0.05);阿霉素联合硼替佐米共培养48 h,Namalwa细胞增殖抑制率显著高于单药阿霉素(P<0.05).硼替佐米、阿霉素联合硼替佐米作用48 h细胞凋亡率显著高于单药阿霉素(P<0.01).单药阿霉素处理12,24,48,72 h,干扰素调节因子4基因和蛋白均未发生明显变化:单药硼替佐米处理48 h干扰素调节因子4基因表达开始下调,72h出现蛋白表达下调;两药联合处理24 hEP出现干扰索调节因子4基因表达下调,4Bh随之出现蛋白表达下调.结论:Namalwa细胞中干扰素调节因子4的表达与阿霉素耐药有关,硼替佐米能够下调干扰素调节因子4的表达,克服阿霉素的耐药.
-
两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究
目的:研制功能性抗cD40L单克隆抗体,探讨其生物学特性及其运用价值.方法:采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD40LmAb,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD40LmAb的生物学功能.结果:经表型分析、Western blot和竞争抑制试验,证实mAbBl、mAb4F1是识别人CD40L分子的特异性单抗,且识别的位点不同;mAbBl、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD40L-TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应.结论:成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD40L单克隆抗体的杂交瘤(1B1、4F1),这两株单抗对cD40L的生物学功能具有明显的阻断作用,为阻断型单抗.
-
抗人CD40单克隆抗体偶联纳米胶束药物载体系统的构建及其生物学特性
目的:将抗人CD40单克隆抗体5C11与3种含有不同反应基团的聚合胶束(polymeric micelle,PM)偶联,构建相应5C11偶联的聚合胶束(5C11 coupled polymeric micelle,PM-5C11),筛选出其中适合与5C11偶联的PM,并观察该偶联物的生物学特性.方法:分别合成3种不同化学结构的聚合物材料,制备相应PM,与5C11偶联后制备PM-5C11,选择其中偶联率和生物安全性均较高的作为适PM-5C11.将适PM-5C11与人Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株作用,观测其生物学活性及其被Daudi细胞摄取的能力.结果:成功制备了分别含对甲苯磺酸酯基、丙烯基、羧基的3种PM,其中含对甲苯磺酸酯基和羧基的PM与5C11的偶联率均明显高于含丙烯基的PM的偶联率[(28.08±2.24)％、(29.06±1.37)％ vs (21.26±1.04)％,P＜0.05]；由于含羧基的PM在制备过程中易残留细胞毒性物质,故选取含对甲苯磺酸酯基的PM作为适PM.相应的适PM成功偶联5C11形成PM-5C11,适PM-5C11显示出5C11原有的生物学活性,并且可被Daudi细胞摄取.结论:构建的3种PM中,含对甲苯磺酸酯基的PM在生物安全性、偶联率及相应PM-5C11的生物学活性方面优,可作为构建纳米药物载体的佳选择.
-
顺铂诱导Daudi细胞增殖抑制中分化抑制因子3的表达分析
目的 探讨Id3在顺铂诱导人Burkitt's B淋巴瘤细胞(Daudi)增殖抑制和凋亡中的作用.方法 应用顺铂处理人Daudi细胞,台盼蓝染色法检测不同浓度的顺铂对Daudi细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率;用RT-PCR检测顺铂处理后Id3、Id2、钙调素(CaM)基因表达水平变化.结果 Daudi细胞增殖抑制率随顺铂浓度的增加而增加;2μg/ml的顺铂作用24 h后,Daudi细胞表现出G1期阻滞,S期和G2/M期细胞比例下降;AnnexinV/PI双染法和FCM结果表明,顺铂可诱导Daudi细胞发生凋亡;RT-PCR结果表明,顺铂处理Daudi细胞可导致Id3 mRNA的表达增加,而Id2、CaM mRNA无明显变化.结论 Id3基因的上调表达可能在顺铂抑制Daudi细胞增殖、诱导细胞凋亡中发挥作用.
-
IL-21 DNA微球疫苗的制备及其对CTL细胞抗肿瘤作用的影响
目的 探讨聚丙烯酸树脂包裹白介素21 DNA核酸疫苗免疫Babl/c小鼠的作用,检测小鼠CTL细胞抗daudi细胞的作用.方法 采用乳剂—溶剂挥发法制备微球疫苗,分组免疫BALB/c小鼠,将制备所得的抗Daudi细胞肿瘤特异性CTL细胞作用于Daudi细胞,通过MTT法计算Daudi细胞增值抑制率,流式细胞仪测量Daudi细胞凋亡率,检测CTL细胞的杀伤作用.结果 光学显微镜观察微球疫苗粒径约为(50.6±12.2)μm,且微球疫苗组对Daudi细胞的杀伤作用明显高于核酸疫苗单独免疫组.结论 聚丙烯酸树脂能有效地保护核酸疫苗,并能提高其在细胞内的表达,为肿瘤疫苗的后续研究提供了思路和理论依据.
-
Akt抑制剂与利妥昔单抗联合应用对伯基特淋巴瘤细胞株Daudi增殖及凋亡的影响
目的 探讨Akt抑制剂(AZD5363)与利妥昔单抗联合应用对伯基特淋巴瘤(BL)细胞株Daudi增殖和凋亡的影响,并探讨其相关机制.方法 培养人BL细胞株Daudi,将其分为对照组(只含等量溶媒)、AZD5363组(加入40μmol/L AZD5363)、利妥昔单抗组(加入50μg/mL利妥昔单抗)、联合用药组(加入40μmol/L AZD5363+50μg/mL利妥昔单抗),置于培养箱中培养24～72 h.分别采用CCK8法、流式细胞术测算AZD5363、利妥昔单抗及两者联合对Daudi细胞的增殖抑制和凋亡率,采用Western blotting法检测细胞磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(T-Akt)蛋白.结果 与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,联合用药组在24、48、72 h时Daudi细胞增殖抑制率高(P均＜0.05).AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组与对照组相比,联合用药组与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,干预Daudi细胞48、72 h后细胞凋亡率高(P均＜0.05).对照组、AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组细胞p-Akt相对表达量分别为0.59±0.06、0.33±0.03、0.45±0.04、0.18±0.04,AZD5363组、利妥昔单抗组、联合用药组与对照组相比,联合用药组与AZD5363组、利妥昔单抗组相比,P均＜0.05.结论 AZD5363与利妥昔单抗联合应用可增强对BL细胞株Daudi的增殖抑制作用,促使细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制Akt磷酸化,阻断PI3k/Akt信号转导通路,从而发挥抗肿瘤效应.
-
STGC3基因高表达Daudi细胞系的建立与鉴定
目的 探讨STGC3基因高表达对Daudi细胞形态、倍增时间和增殖速度的影响.方法 采用电穿孔基因转染技术,将PCDNA3.1(+)/STGC3真核表达载体导入Daudi细胞系,G418筛选,建立高表达STGC3基因的Daudi细胞系,利用Western-blotting检测转基因细胞系中STGC3蛋白的表达；运用免疫细胞化学和HE染色方法及绘制细胞生长曲线,了解STGC3基因表达在Daudi细胞中的定位,以及对细胞倍增时间和增殖速度的影响.结果 在转基因的Daudi细胞系中,STGC3蛋白高表达并定位于胞浆与胞核.转染STGC3基因后,Daudi细胞倍增时间延长,增殖速度明显减慢(P＜0.05).结论 成功建立STGC3基因高表达Daudi细胞系.
-
B细胞非霍奇金淋巴瘤小鼠模型的建立
背景与目的:近年来非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)发病率呈上升趋势.其中侵袭性NHL占了很大的比例,然而传统化疗方案提高NHL疗效的空间有限.本研究旨在建立淋巴瘤小鼠模型,为探讨治疗NHL新方案并研究其药物作用机制提供动物模型.方法:应用人弥漫大B细胞NHL细胞株su-DHL-4及人Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi,经尾静脉注射入SCID小鼠体内,探索建立淋巴瘤小鼠模型的条件及特点.Daudi淋巴瘤小鼠分为对照组及美罗华治疗组,观察小鼠的发病情况及生存时间.结果:su-DHL-4淋巴瘤小鼠在中位时间39.5 d后开始发病,主要表现为精神萎靡、消瘦、竖毛、活动迟缓,于小鼠腹腔、尾部或后肢部位出现肿块.未发现肝脏、脾脏、骨髓等脏器出现淋巴瘤细胞浸润.Daudi淋巴瘤小鼠于中位时间30.5 d发病,出现双后肢瘫痪,于瘫痪后9.5 d左右死亡.Daudi淋巴瘤小鼠的脏器大多受淋巴瘤细胞的累及,骨髓中出现大量Daudi细胞浸润.美罗华治疗使小鼠骨髓中的Daudi细胞呈现明显的凋亡形态.对照组Daudi淋巴瘤小鼠的中位瘫痪时间及生存时间分别为30.5 d及加d,美罗华治疗组的小鼠分别为52.5d及76.5d,美罗华治疗组小鼠的中位瘫痪时间及生存时间显著延长(P<0.05).结论:应用SU-DHL-4细胞及Daudi细胞均可以成功建立B细胞NHL小鼠模型.
关键词： 淋巴瘤 小鼠模型 daudi细胞 SU-DHL-4细胞 美罗华 -
紫杉醇对Daudi细胞增殖活性与表面超微结构的影响
目的:研究紫杉醇对Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi细胞凋亡的影响.方法:用原子力显微镜(AFM)分析细胞膜超微结构的改变,CCK8法检测Daudi细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)测定凋亡率.结果:AFM显示紫杉醇可引起细胞形貌的改变,正常Daudi细胞呈圆形,表面较光滑:紫杉醇处理后,Daudi细胞坍塌,细胞表面粗糙、凹凸不平.紫杉醇对Daudi细胞的增殖具有抑制作用,且呈时间浓度依赖性.FCM检测示Daudi细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P<0.05),呈浓度依赖性.结论:紫杉醇可改变细胞膜超微结构,抑制Daudi细胞的增殖,促进其凋亡.
-
BMT-1抑制急性B淋巴母细胞瘤细胞增殖活力及其机制研究
目的 探讨苯并咪唑衍生物BMT-1对急性B淋巴母细胞瘤细胞增殖活力的影响及其相关机制.方法 采用CCK-8方法测定BMT-1对Daudi、Nalm-6的细胞毒性;采用流式细胞技术方法检测BMT-1对Daudi细胞凋亡及线粒体膜电位的影响;采用Western Blot方法检测Daudi细胞凋亡相关蛋白PARP的表达情况.结果BMT-1对Daudi、Nalm-6细胞具有较强的细胞毒性;BMT-1可诱导Daudi细胞凋亡,引起Daudi细胞线粒体膜电位下降,并可使得Daudi细胞产生PARP蛋白剪切体.结论 BMT-1对B淋巴母细胞瘤具有细胞毒性作用,其关键机制为诱导细胞凋亡和引起线粒体膜电位下降,为BMT-1治疗急性淋巴细胞白血病提供了理论基础.
-
人CD20跨膜区与g3pN端融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的:构建g3pN1-hCD20跨膜及胞外区基因表达载体,并在大肠杆菌中进行高效融合表达.方法:利用反转录PCR和PCR方法,分别从Daudi细胞和M13K07噬菌体中扩增hCD20基因和编码g3pN1蛋白Nl端的基因,并重组到pTIGTrx表达载体中,在大肠杆菌中融合表达.结果:表达产物可被抗CD20分子的单克隆抗体(mAb)识别.结论:成功地表达并鉴定了目的蛋白.
