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PI3K抑制剂对急性胰腺炎细胞因子和组织病理学评分的影响
目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,P13K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠细胞因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6]转录和表达以及胰腺组织病理评分的影响,探讨其对SAP大鼠的保护作用.方法:将60只SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎组(S组)、假手术组(C组)、生理盐水组(NS组)、溶剂(DMSO)对照组(R组)、PI3K/Akt抑制剂wortmannin组(W组).采用改良的Aho法制作SAP模型,分别在造模3、6h后抽血并处死大鼠,收集胰腺组织.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA转录水平变化,并常规HE染色进行胰腺组织病理评分,同时观察各组腹水量、血清及腹水淀粉酶的变化.结果:S组和R组大鼠术后3、6h的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较C组和NS组差异有统计学意义(P＜0.05)；W组的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较同时段的S组和R组有所降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与C组和NS组相比,S组和R组大鼠术后3、6h的血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平和胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA转录水平差异有统计学意义(P＜0.05)；W组的上述指标均低于S组和R组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PI3K抑制剂wortmanin通过抑制PI3K/Akt信号转导通路下调SAP大鼠细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的转录和表达水平,减轻胰腺组织的病理损伤,对SAP大鼠具有保护作用.
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用及其机制
目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因pAkt、Skp2 及P2 7kip1表达的变化.方法:将不同浓度的渥曼青霉素(O、10、50、100、200 nmol/L)分别作用于对数生长期的人肝癌HepG2细胞3、10、24 h,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测pAkt、Skp2及P27kip1蛋白表达变化,RT-PCR检测Skp2及P27kip1mRNA表达变化.结果:渥曼青霉素可明显抑制HepG2细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.渥曼青霉素可导致G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P＜0.05).随着渥曼青霉素浓度的增加及作用时间的延长,HepG2细胞凋亡率逐渐升高(8.46％±1.17％至28.03％±2.67％)(P＜0.05).Western blot结果显示渥曼青霉素可下调pAkt和Skp2蛋白的表达,上调P27kip1蛋白表达(P＜0.05).RT-PCR结果显示渥曼青霉素可明显下调Skp2 mRNA的表达,而P27kip1mRNA表达无明显变化.结论:PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,引发G0/G1期阻滞并诱导其凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路参与Skp2及P27kip1调控有关.
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磷脂酰肌醇3-激酶途径对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响及罗红霉素的干预作用
气道蘑塑是支气管哮喘(简称哮喘)的重要病理特征,气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增生和肥大在哮喘气道重塑中发挥了重要作用[1].磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3 K)途径是介导ASMCs增殖重要信号转导途径[2].罗红霉素是新一代大环内酯类抗生素,初步研究结果表明,罗红霉素能影响哮喘气道重塑,但具体机制尚不明确.本研究通过复制大鼠慢性哮喘模型,研究PI3K的重要下游信号分子Akt、p70S6K及cyclinD1活性变化,并给予PI3K特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)及罗红霉素干预,探讨PI3K信号途径在哮喘ASMCs增殖中的作用及罗红霉素对哮喘气道重塑的影响,进一步揭示哮喘的发病机制及有效的干预措施.
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渥曼青霉素对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎的影响
溃疡性结肠炎(UC)的病因和发病机制尚未完全明确,治疗缺乏特异有效的药物.
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足叶乙甙活化蛋白激酶B信号通路影响胃癌化疗效果的机制研究
我们以前的研究表明,某些化疗药可活化蛋白激酶B(PKB)信号通路,降低胃癌细胞对化疗的敏感性[1-2].然而,目前PKB通路在胃癌化疗过程中的作用及其作用机制还远未阐明.本研究采用化疗药足叶乙甙及PKB信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)作用于胃癌细胞系SGC7901和BGC823,观察它们对胃癌细胞的影响,以进一步探讨PKB信号通路对胃癌化疗效果的影响及其可能机制.
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DNA-PKcs失活对c-Myc蛋白表达的影响
目的:通过DNA-PKcs表达抑制的细胞模型,研究DNA-PKcs与癌基因c-myc表达调控的关系.方法:利用siRNA技术或抑制剂建立DNA-PKcs表达抑制细胞模型,Western印迹检测DNA-PKcs和c-Myc蛋白表达变化,Northern印迹检测癌基因c-myc的mRNA表达,SEAP检测系统检测c-myc转录活性变化.结果:稳定表达DNA-PKcs siRNA的细胞DNA-PKcs蛋白和c-Myc蛋白表达明显降低,同时c-myc转录活性也被抑制,但c-myc在mRNA水平无明显变化.渥曼青霉素(wortmannin,0.2 μmol/L)同样也可抑制c-Myc蛋白表达和转录活性,而对c-myc的mRNA表达无影响.结论:DNA-PKcs参与c-myc基因的表达调控,DNA-PKcs是一个潜在的肿瘤治疗靶分子.
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渥曼青霉素对胶质瘤细胞U251的辐射增敏作用
目的利用渥曼青霉素(wortmannin,WM)抑制人恶性胶质瘤细胞U251磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路的活性,探讨对U251细胞辐射敏感性的影响及可能的作用机制.方法 采用10μmol/L WM预处理U251 2 h,并接受10 Gy X射线照射,检测PI3K/Akt信号通路的活性、集落形成率和凋亡的变化;通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白活化型Caspase-3、Bax、Bcl-2及XIAP表达的变化.结果 10 μmol/L WM预处理2h,明显抑制了U251细胞phospho-Akt的表达(t=0.000 1,P＜0.01).WM预处理联合X射线照射后,U251细胞的凋亡率由对照组和单纯照射组的(2.14±1.32)％和(11.5±2.9)％增加到(22.6±3.8)％,差异具有统计学意义(t=0.009 3、0.002 7,P＜0.01);集落形成率由对照组和单纯照射组的(88.54±4.76)％和(56.31±4.05)％降低到(12.25±9.59)％(t=0.000 03、0.000 2,P＜0.01);同时伴随着凋亡相关蛋白活化型Caspase-3表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值明显增高以及XIAP的显著降低.结论 WM通过抑制PI3 K/Akt信号通路活性,增加凋亡蛋白Caspase-3的活化和Bax/Bcl-2比值,下调凋亡抑制蛋白XIAP来增强恶性胶质瘤细胞的辐射敏感性.
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亮氨酸对原代培养大鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取及蛋白激酶B表达的影响
目的 以原代培养的大鼠骨骼肌细胞为研究对象,观察亮氨酸对骨骼肌细胞及渥曼青霉素(wortmannin)处理后葡萄糖摄取能力及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(AKT)表达的影响,从而为探讨亮氨酸与胰岛素抵抗的关系和相关机制提供依据.方法 组织块法培养大鼠原代骨骼肌细胞,不同浓度的亮氨酸(0,0.4,2.0,4.0,8.0mmol/L)作用80min或45min,酶法测定基础状态下和胰岛素刺激下葡萄糖摄取能力,确定亮氨酸作用的佳浓度和作用时间;在此基础上,应用PI-3K抑制剂wortmannin作用30min,测定葡萄糖摄取能力,Western blot检测AKT及磷酸化AKT表达水平.结果 胰岛素刺激状态下,2mmol/L亮氨酸作用45min骨骼肌细胞葡萄糖摄取能力达大;2mmol/L亮氨酸干预可改善wortmannin对胰岛素刺激下骨骼肌细胞葡萄糖摄取的抑制作用,显著增强胰岛素信号传导关键分子pSer473 AKT的表达.结论亮氨酸可改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗.这种作用不完全依赖于PI-3K胰岛素信号传导通路,并且可能与其增强AKT磷酸化水平有关.
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S1P对心肌细胞的保护作用研究
目的:探究1-磷酸鞘氨醇(SIP)对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及其分子机制.方法:在大鼠乳鼠心肌细胞原代培养墓础上,应用液体石蜡覆盖法制备心肌细胞缺氧/复氧模型,采用流式细胞术PI染色法和流式细胞术罗丹明123染色法检测S1P对缺氧/复氧心肌细胞的细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;Western Blot分析法检测S1P作用后的心肌细胞p-Akt1蛋白水平变化,并且观察PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)阻断剂渥曼青霉素(wormannin)对S1P上述作用的影响.结果:在S1P的影响下,缺氧/复氧心肌细胞的凋亡率显著下降(P<0.01),线粒体膜电位的去极化被明显抑制(P < 0.05),p-Akt1水平明显升高(P < 0.01),wormannin能够部分阻断S1P的上述效应.结论:S1P能够显著抑制缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,其机制可能与S1P激活PI3K-Akt信号通路进而稳定线粒体膜电位有关.
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渥曼青霉素对大鼠脑外伤诱导的凋亡损害的影响
目的 探讨渥曼青霉素(wortmannin)对大鼠脑外伤(TBI)模型引起的细胞凋亡的影响及可能机制.方法 ①健康成年雄性Wistar大鼠100只,随机分为假手术组(sham组)(n=20)、手术对照组(saline组)(n=40)、药物治疗组(wortmannin组)(n=40).采用改良自由落体法建立大鼠脑外伤模型,sham组暴露硬脑膜而不撞击,wortmannin组打击前左侧脑室注射5 μl wortmannin(50 nmol/L),saline组造模前注射5 μl生理盐水.②免疫印迹法、Real-time PCR检测脑组织caspase-3、Bax表达情况;DNA凝胶电泳检测脑外伤引起的DNA片段断裂.③图像分析脑体积缺损情况.结果 ①与sham组相比,saline组脑外伤可明显引起caspase-3、Bax表达增多,Bcl-2表达减少;DNA片段断裂增多,脑体积缺损情况显著.②与saline相比,wortmannin干预能明显抑制caspase-3与Bax的激活(P<0.01),促进Bcl-2表达的增高(P<0.01);抑制脑外伤引起的DNA片段断裂及脑体积缺损(P<0.05).结论 wortmannin能减轻脑外伤引起的细胞凋亡与脑损害,其机制可能是通过抑制caspase依赖的细胞凋亡途径实现的.
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氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株(HCT-116和SW-480)增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用.方法:将处于对数生长期的HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂(PFT-α)组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术(FCM)检测各组细胞12、24和48 h的存活率和细胞凋亡率.结果:与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低(P＜0.05),并随时间延长而逐渐降低；流式细胞术(FCM)检测,各组细胞凋亡率随时间的延长而增高(P＜0.05)；与渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化(P＞0.05),而SW-480细胞48 h的存活率显著降低(P＜0.05),凋亡率显著增高(P＜0.05).结论:渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡；抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡.
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PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以不同浓度的渥曼青霉素作用于人类髓细胞白血病细胞K562,采用MTT法检测细胞增殖活性,单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤形成的"彗星"样拖尾现象,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡,Western blotting、RT-PCR检测渥曼青霉素作用K562细胞后总Akt和磷酸化Akt以及NF-κB基因及蛋白表达水平的变化.结果: 渥曼青霉素以时间-剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC_(50)是25 nmol/L.渥曼青霉素诱导K562细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量依赖性增强.渥曼青霉素作用后K562细胞DNA链断裂,呈现"彗星"拖尾现象,其尾长与拖尾率显著高于对照组(P<0.01).渥曼青霉素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制磷酸化Akt以及NF-κB表达,但对总Akt蛋白没有明显影响.结论: 渥曼青霉素以时间和剂量依赖方式明显抑制K562细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与其下调磷酸化PI3K/Akt信号通路以及NF-κB蛋白表达有关.
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过度自噬介导心肌肥厚心功能不全
目的 研究自噬在心肌肥厚心功能不全中的作用. 方法 采用前期构建的心肌肥厚心功能失代偿的热休克蛋白27转基因鼠(heat shock protein transgenic mice,Hsp27 Tg)模型(4周龄、雌性),随机分为(1)自噬抑制(WM)组:自噬抑制剂渥曼青霉素(wortmannin,WM)溶于DMSO溶剂,以1 mg/kg腹腔注射;(2)溶剂组:等体积的DMSO溶剂腹腔注射,连续3～7周龄.选取年龄、性别匹配的野生型对照鼠(wild type,WT)作为WT组.于注射WM前、后,测定心脏质量/体质量比值(heart weight/body weight,HW/BW),以二维超声心动图测定心功能,以免疫印迹方法测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和p62水平以评价自噬水平. 结果 (1)与WT组相比,4周龄Hsp27 Tg鼠HW/BW显著增加,而心脏射血分数(ejection fraction,EF％)和短轴缩短率(fraction shortening,FS％)均显著下降(P＜0.01);(2)与WT组相比,4周龄Hsp27 Tg鼠心肌组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,而p62水平下降(P＜0.01);(3)与溶剂组比较,注射3周后的WM组Hsp27 Tg鼠心肌组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平下降,而p62水平升高(P＜0.0l);(4)与溶剂组比较,WM注射3周Hsp27 Tg鼠的心脏EF％、FS％均显著增加(P＜0.01). 结论 WM通过抑制自噬水平改善Hsp27高表达诱导的病理性心肌肥厚心功能不全,提示过度自噬介导了心肌肥厚心功能不全的进展,为进一步探究心肌肥厚失代偿阶段的发病机制提供理论基础.
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颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素保护作用的研究
目的 探索颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素的保护作用,为临床治疗脑外伤提供实验依据.方法 将120只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组[假手术组(A组)、颅脑创伤组(B组)、渥曼青霉素治疗组(C组)],每组40只.B、C组使用PinPointTM精密颅脑创伤撞击器、直径4mm的打击头制作中度创伤性脑损伤模型,其中C组于建模前10min侧脑室注入渥曼青霉素(0.5μg/kg),B组注入含有二甲基亚砜(DMSO)的PBS(25μl/kg);A组暴露硬脑膜但不撞击,建模前注入含有DMSO的PBS(25μl/kg).采用Western blot检测自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,p62)表达水平,应用大鼠行为学评分观察大鼠颅脑创伤后神经功能的变化,采用干湿法检测脑组织含水量.结果 与A组相比,B组和C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平增加,p62表达水平减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与B组相比,C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平减少,p62表达水平增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05);伤后72、168h脑组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(均P＜0.05).颅脑创伤后48、72h,C组大鼠行为学评分均高于B组(均P＜0.05).颅脑创伤后72h,B组和C组脑组织含水量均较A组明显增加(均P＜0.05),但C组较B组明显减少(P＜0.05).结论 渥曼青霉素能明显抑制颅脑创伤后过度的自噬反应,减轻脑水肿,改善大鼠神经功能.
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抑制磷脂酰肌醇-3激酶通路减弱乙醇后处理的心肌保护作用
目的:探讨抑制磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)途径是否减弱乙醇后处理的心肌保护作用.方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌注方法,局部结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血/再灌注模型.测定心室动力学指标和再灌注期间冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量.结果:与单纯缺血/再灌注相比,乙醇后处理明显促进了左心室发展压、左心室内压大上升和下降速率、左心室做功量的恢复,降低再灌注期冠状动脉流出液中LDH的释放(P<0.01);PI3K抑制剂渥曼青霉素减弱了乙醇后处理的作用,抑制了心室动力学指标的恢复(P<0.05～P<0.01),LDH释放增多(P<0.01).结论:抑制PI3K通路减弱了乙醇后处理的心肌保护作用.
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渥曼青霉素对胃癌细胞PARP蛋白表达的影响
目的 研究磷脂酰激酶3通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的影响.方法 应用DNA琼脂糖凝胶电泳检测胃癌细胞BGC-823凋亡,以蛋白印迹法检测PARP蛋白及活化片断表达情况.结果 足叶乙甙(etoposide)及阿霉素(doxorubicin)能诱导胃癌细胞凋亡及BGC-823 PARP裂解的发生,wortmannin可以增强其作用.结论 磷脂酰激酶3通路抑制剂渥曼青霉素可以增强胃癌细胞凋亡的发生.
关键词： 渥曼青霉素 足叶乙甙 阿霉素 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 胃癌 -
渥曼青霉素对大鼠缺血再灌注心肌细胞自噬和凋亡的影响
目的 观察渥曼青霉素(WT)对大鼠缺血再灌注心肌细胞自噬与凋亡的影响.方法 将36只雄性SD大鼠随机分为3组,即假手术组(Sham组,n=12)、心肌缺血再灌注损伤模型组(I/R组,n=12)、I/R+渥曼青霉素处理组(WT组,n=12).采用穿线结扎左冠状动脉前降支30 min制备I/R模型,WT组于缺血30 min后鼠尾静脉注射WT(15 μg/kg).再灌注120 min后采集股动脉血样,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)活性;取心脏标本,采用氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)检测每组大鼠相对心肌梗死面积百分比;取缺血心肌标本,采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,计算细胞凋亡指数(AI),苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理学变化,Western blot法检测各组心肌细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)及凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达.结果 与I/R组比较,WT组血清LDH[(2 356.14±328.46)比(3674.96±409.47) U/L]和CK[(2412.71±334.84)比(3 825.42±433.03) U/L]活性、心肌梗死面积百分比[(39.19±8.34)％比(56.70±9.92)％]及细胞AI[(18.72±3.17)％比(36.58±7.55)％]明显降低(P＜0.01).WT组心肌细胞损伤较I/R组轻.与I/R组比较,WT组LC3-Ⅱ(0.45 ±0.18比0.71 ±0.21)、Caspase-3(0.52 ±0.23比0.52±0.23)蛋白相对表达量明显降低(P＜0.01).结论 WT干预通过降低心肌细胞自噬活性和细胞凋亡水平,减轻大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤.
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渥曼青霉素对胰腺癌细胞增殖和生存的影响
渥曼青霉素(Wortmannin)是一种霉菌代谢产物,是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂.本研究旨在通过Wortmannin抑制PI3K/Akt信号通路,观察胰腺癌细胞株增殖能力和凋亡抗性改变,阐明PI3K/Akt途径在胰腺癌细胞增殖和生存中的重要性,探寻治疗胰腺癌的新途径.
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渥曼青霉素对化疗药物诱导BGC823细胞凋亡的影响
目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对足叶乙甙和阿霉素诱导的人胃癌细胞BGC823凋亡的影响.方法:常规培养人胃癌细胞BGC823,将细胞分为6组:①空白对照组(不加任何药物);②渥曼青霉素组(终浓度为40 nmol/L);③足叶乙甙组(终浓度为20 μmol/L);④渥曼青霉素(终浓度为40 nmol/L)+足叶乙甙组(终浓度为20 μmol/ L);⑤阿霉素组(终浓度为0.3 μmol/ L);⑥渥曼青霉素(终浓度为40 nmol/ L) + 阿霉素组(终浓度为0.3 μmol/ L).分别以上述药物干预24 h后,提取各组细胞的蛋白,以NaI法提取各组细胞的DNA.采用DNA琼脂糖凝胶电泳分析各组的细胞凋亡现象,用Western blot检测各组细胞中Caspase-3蛋白的活化表达.结果:DNA琼脂糖凝胶电泳示空白对照组细胞见较弱的DNA梯状谱(DNA Ladder),其他5组细胞均出现明显的DNA梯状谱;阿霉素与足叶乙甙干预后,胃癌细胞BGC823的Caspase-3活性较空白对照组增强,加用渥曼青霉素处理后,Caspase-3活性进一步增强.结论:PI3K抑制剂渥曼青霉素可增强化学治疗药物足叶乙甙和阿霉素对胃癌细胞的凋亡诱导作用,提高其化疗疗效.为寻求新的高效胃癌化疗方案提供理论依据.
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渥曼青霉素对人胃癌细胞的作用及机制
目的 探讨渥曼青霉素(wortmannin)对人胃癌细胞的作用及机制.方法 采用10,30,60 nmol/L的 AKT抑制剂wortmannin,以不同时间对胃癌细胞SGC7901进行干预;并设对照组运用MTT法检测细胞的增殖抑制情况;用Western blot检测NF-κB核蛋白表达水平;RT-PCR检测NF-κB基因的转录水平.结果 3种浓度的wortmannin都对胃癌SGC7901细胞的生长均具有抑制作用,其抑制效应呈明显剂量和时间依赖性(P＜0.01或P＜0.05);而对照组未见明显变化(P＞0.05).随着wortmannin作用时间的延长,NF-κBmRNA及核蛋白的表达水平均显著低于对照组(P＜0.05).结论 wortmannin可抑制胃癌SGC7901细胞的生长;可能通过胃癌中存在的AKT/NF-κB信号通路调节NF-κB的表达而发挥作用.
