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c-Jun N-末端激酶在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)属于丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)家族成员,多种细胞外应激信号可使其磷酸化而活化,在细胞应激反应中起重要作用.我们通过研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)对人胃癌SGC-7901细胞中JNK MAPK表达的影响,探讨该途径在VES诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用.
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哮喘大鼠肺内JNK磷酸化水平的动态变化
气道重塑在哮喘病程中的重要性已被逐渐认识.丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径是参与哮喘发病机制的一条重要信号通路,我们前期研究发现,细胞外信号调节激酶(external signal regulatedkinase,ERK)磷酸化是哮喘气道炎症和重塑的重要因素[1],C-JUN氨基末端激酶(C-JUNN-terminal kinase,JNK)是MAPK家族的另一重要成员.
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ERK1/2在同型半胱氨酸诱导大鼠动脉平滑肌细胞增殖中的作用
近年来大量研究表明高同型半胱氨酸(homocystein,Hcy)血症是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的独立危险因素.Hcy致AS的机制之一就是诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖,但其作用机制目前尚不十分清楚.有报道表明其促细胞增殖效果可能与细胞增殖信号传导途径有关,本实验通过以不同浓度Hcy对体外培养大鼠动脉VSMCs进行刺激,探讨丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)途径在Hcy诱导VSMCs增殖中的作用.
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酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV NS3蛋白结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS3基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出NS3基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落18个,其中4个真核细胞翻译延伸因子2;2个免疫球蛋白λ轻链;1个肌动蛋白β;1个铁蛋白轻多肽;1个(丝裂原)活化蛋白激酶3;2个肌球蛋白因子1;1个白介素2受体β;1个富含精氨酸/丝氨酸剪切因子6;1个组织蛋白酶S;1个2'-5'寡腺甘酸合成酶类似物;1个缺失精子缺乏相关蛋白2;1个CNN2;1个新基因.结论:成功克隆出HCV NS3的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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足叶乙甙活化蛋白激酶B信号通路影响胃癌化疗效果的机制研究
我们以前的研究表明,某些化疗药可活化蛋白激酶B(PKB)信号通路,降低胃癌细胞对化疗的敏感性[1-2].然而,目前PKB通路在胃癌化疗过程中的作用及其作用机制还远未阐明.本研究采用化疗药足叶乙甙及PKB信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)作用于胃癌细胞系SGC7901和BGC823,观察它们对胃癌细胞的影响,以进一步探讨PKB信号通路对胃癌化疗效果的影响及其可能机制.
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转化生长因子β1和磷酸化细胞外信号调节激酶在胃癌中的表达
转化生长因子β1(TGF-β1)是一种具有多种生物活性的多肽,与肿瘤的发生及发展密切相关.细胞外信号调节激酶是丝裂素活化蛋白激酶家族的一个亚族,磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)是其活化形式.我们应用免疫组化技术检测TGF-β1和p-ERK蛋白在胃癌中的表达情况,旨在探讨它们与胃癌发生及发展的关系.
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衰竭心肌组织应激信号蛋白通路的变化与心功能的关系
近年研究发现,丝裂素活化蛋白激酶家系的亚家族成员C-Jun NH2-末端激酶(C-Jun NH2-terminal kinase, JNK),是心肌细胞中多种信号向核内传递的共同途径,其变化可能对心肌重塑有重要作用.我们通过手术取材,采用Western-blot方法测定瓣膜病所致心力衰竭(心衰)患者不同心功能组和正常人组心肌细胞JNK蛋白的表达,进一步探讨心肌细胞信号传导与心功能的关系.
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p38MAPK信号通路研究进展
丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)属于丝蛋白/苏氨酸激酶,是一类接受受体传递的信号并将其带入细胞核内的重要分子,具有参与基因表达调控、细胞增殖和死亡的重要机制,在多种受体信号传递途径中均具有关键性作用.p38MAPK信号通路为MAPK家族的重要成员,不仅在炎症、应激反应中具有重要作用,还参与细胞的存活、分化和凋亡等过程,被认为是细胞众多信号转导通路的中转站.本文就p38MAPK生物学特性及其激活机制的新研究进展做一综述.
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腺苷受体2A有望成为研发抗炎症、抗损伤药物的新突破点
腺苷能够通过干预参与免疫/炎症应答过程的各种细胞而调控先天及后天免疫系统,其受体包含A1、A2A、A2B、A3 4种类型,其中A2A受体对于细胞外腺苷发挥抗炎效应而言至关重要.A2A受体与其他Gs蛋白耦联受体相似,都通过活化腺苷环化酶、合成细胞内环磷酸腺苷(cAMP)及活化蛋白激酶A产生效应[1].
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丝裂素活化蛋白激酶激酶在前列腺上皮内瘤组织中的表达及意义
丝裂素活化蛋白激酶激酶(MEK)是丝裂素活化蛋白激酶(ERK)信号传递途径中主要成员之一,直接影响ERK的活性,对细胞增殖起重要作用.我们采用免疫组化方法研究了MEK在前列腺上皮内瘤(PIN)中的表达.
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p38丝裂原素活化蛋白激酶在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及意义
尽管大量的研究揭示了各种细胞因子、炎性介质等在慢性鼻-鼻窦炎发病机制中的作用,然而,进一步的研究却表明阻断或封闭某些炎性介质或细胞因子并不能达到抑制炎症反应的目的.近年的研究发现,在哮喘、慢性阻塞性肺病和变应性鼻炎中,丝裂原素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)的活化与各种细胞因子、炎性介质的释放有关[1,2].慢性鼻-鼻窦炎的黏膜病理生理学改变与哮喘、变应性鼻炎同属呼吸道黏膜炎症反应、且密切相关[3].我们推测,慢性鼻-鼻窦炎发病机制中可能亦存在经MAPK信号转导通路信号的干预和调控.本研究应用免疫组化方法检测MAPK信号转导通路家族成员p38MAPK在慢性鼻-鼻窦炎钩突黏膜上皮中的表达.报告如下.
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脂解新关键酶——ATGL研究进展
长期以来激素敏感性脂肪酶(HSL)被认为是脂肪水解唯一的关键酶,近20年来相继对该酶底物的选择性以及调控机制开展了广泛的研究.脂肪水解受到很多激素的调节,如胰高血糖素、肾上腺素等,这些激素在机体能量不足时与膜上受体结合,引起级联反应后导致细胞内第二信使cAMP浓度增加,活化蛋白激酶A (PKA),HSL在围脂蛋白(perilipin)的协同作用下,催化甘油三酯分解[1].但这一观点在HSL基因敲除鼠出现后受到了质疑,Haemmerle等将小鼠HSL基因敲除后发现,小鼠脂肪组织、肌肉和附睾有甘油二酯累积而不是甘油三酯[2],因此提示我们还存在另外一种酶将甘油三酯分解成甘油二酯.
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一磷酸腺苷活化蛋白激酶与运动相关性骨骼能量代谢研究进展
骨骼肌在运动和收缩时的一个显著特征就是能量消耗大幅上升,ATP消耗激增.为保持骨骼肌的能荷,有氧和无氧代谢再合成ATP的量都会上升.为补充ATP的消耗,肌糖原、血糖、血浆游离脂肪酸、肌内储存的三酰甘油都可能被水解以提供能量[1].骨骼肌再合成ATP的能力与能源物质的供应量、肌细胞内酶的活性及能源物质的氧化速率紧密相关.
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同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制
同型半胱氨酸(HCY)是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸.大量流行病学资料和临床观察表明,HCY与动脉粥样硬化形成密切相关.然而,至今关于HCY引起动脉粥样硬化的机制尚不清楚.血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是动脉粥样硬化的重要病理特征之一.我们在培养的大鼠VSMC上研究发现,HCY呈剂量依赖性刺激VSMC 增殖和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性增加(P<0.01),二者之间呈显著正相关(r=0.98,P<0.01);HCY的促增殖效应可被MAPK特异性抑制剂PQ098059完全抑制(P<0.01).
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内皮素及肾上腺髓质素对血管平滑肌细胞增生的影响及细胞内信息传递的机制研究
本研究在培养的兔胸主动脉血管平滑肌细胞上,观察了丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)在内皮素促血管平滑肌细胞增生中的作用.发现内皮素-1呈时间和浓度依赖性地促进细胞摄取3H-TdR和激活MAPK,此作用可被蛋白激酶C抑制剂Staurosporine、H-7和内皮素A受体拮抗剂BQ123所抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂Herbimycin A所抑制,用PKC激动剂PMA预处理血管平滑肌细胞,使其PKC活性下调,可显著减弱内皮素-1对MAPK的激活能力.提示:MAPK参与内皮素-1所致的血管平滑肌细胞增生;内皮素-1促细胞增生与激活MAPK的作用是由内皮素A受体和PKC介导的.
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脓毒症时JAK/STAT通路的活化及意义
JAK激酶(Janus kinase)/信号转导和转录激活子(signal transducer and activator of tr anscription,STAT)通路是细胞因子信号转导的重要通路之一.细胞因子等细胞外刺激因素 ,与细胞表面的受体结合,使结合于受体亚基上的JAK相互靠近,并相继磷酸化而被激活.J AK还可使受体酪氨酸残基磷酸化,使受体与含有SH2区的STAT结合.作用于受体分子上的STA T由于JAK催化而磷酸化,磷酸化的STAT与受体的亲和力下降而脱离受体,穿过细胞核膜进入核内,结合于特定的基因启动子序列,增强mRNA表达.目前已发现的JAK激酶有4个,STAT家族成员有6个.与其它已发现的信号通路相比,该通路所涉及的激酶较少,环节简单,且普遍存在于各型细胞内,在细胞生理和病理反应中发挥着重要调控作用.已证实,脓毒症时细胞因子明显增多,众多免疫细胞内STAT活化明显,并与细胞凋亡、急性肺损伤、脓毒性休克等相关.现发现不同的细胞因子活化的STAT不同,在脓毒症的发生、发展和转归中可能具有重要作用.JAK/STAT是脓毒症时细胞内各种信号转导系统中的主要通路之一,与其它信号途径如Ras-丝裂素活化蛋白激酶家族(mitogen-activated protein k inase,MAPK)、核因子ka ppa B (NF-κB),存在着交汇作用,相互影响.现将近年来有关脓毒症中JAK/S TAT通路的研究进展作一概述.
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p38丝裂素活化蛋白激酶抑制剂Dilmapimod(度马莫得)用于防治严重创伤合并急性呼吸窘迫综合征患者的安全性:一项Ⅱ期剂量递增试验结果分析
?目前尚无对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)预防和治疗的药物方案。早期炎症失调很可能会对ARDS的发展和预后产生重要的影响。p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)是多种炎性介质参与的急性器官功能障碍的关键调节因子,是一类新兴细胞因子抑制类抗炎药物作用的靶点。一些临床前研究结果显示,p38MAPK抑制剂能够减轻胰腺炎和烧伤后引起的肺损伤。为此,美国的研究人员进行了一项Ⅱa期多中心随机双盲安慰剂对照平行试验,以评估一种新型p38MAPK抑制剂Dilmapimod?(度马莫得)用于损伤程度评分>16分、存在ARDS发生风险患者(排除颅脑外伤患者)的疗效。研究人员将受试者随机分为4个独立的队列,分别静脉输注不同剂量的Dilmapimod?4?h或24?h(连续3?d)或给予安慰剂治疗。结果显示:该研究共纳入77例患者,尽管危重患者中出现不良事件的情况较为普遍,但总体来说患者对Dilmapimod的耐受性良好,均未出现临床相关的安全性问题。药代动力学模型显示,给予高剂量Dilmapimod(10?mg)并连续输注超过24?h的给药方案可以达到佳的血药浓度,且C-反应蛋白、白细胞介素(IL-6、IL-8)和可溶性肿瘤坏死因子受体1(sTNFR1)的差异在高剂量组与安慰剂组间大。虽然该研究并未特别针对ARDS进行评价,但ARDS的发生率较低(2.6%,2/77)。研究人员据此得出结论:新型p38MAPK抑制剂Dilmapimod的耐受性良好,值得进行更大规模的临床试验以进一步评估其在ARDS和其他器官损伤中的预防作用。
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ERK信号通路与肺纤维化中细胞因子相互关系的研究
丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者,包括ERK、JNK、P38及ERK5亚族.MAPK家族在调控细胞生长、发育、分裂及细胞间功能的同步性等多种生理功能中起着重要作用.细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路是迄今研究为透彻的一条MAPK信号转导通路,它的激活同许多细胞因子密切相关.
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p38MAPK在MS/EAE少突胶质细胞系中的作用
多发性硬化( multiple sclerosis ,MS)是一种中枢神经系统脱髓鞘性疾病,近年的研究已经证实遗传、环境、免疫等因素改变引起的免疫细胞比例失衡、机体的氧化应激等在MS发病中起到重要作用。髓鞘是有髓神经纤维外包绕的一层膜,它在中枢神经系统主要是由少突胶质细胞的片状突起包绕神经元轴突而形成的螺旋形多长膜性结构。病理染色及免疫组化染色可发现多发性硬化患者的病灶处大量的神经纤维脱髓鞘。Bhat 等[1]报道指出 p38作为丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPKs)家族中的一员,对细胞内外的多种信号发生反应,因而对细胞的适应、增殖、分化、存活等起重要的调节作用,但其在少突胶质细胞中的作用仍不完全明确。本文回顾了p38在不同条件下对少突胶质细胞系的作用,以期为进一步的实验室研究和临床治提供思路。
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SB203580对大鼠高氧肺损伤后P38丝裂素活化蛋白激酶白细胞介素-8转化生长因子-β1丙二醛含量变化的影响
肺是氧化应激性损伤的重要靶器官。在高氧情况下,机体氧化/抗氧化系统易出现失衡,过多的氧自由基不仅可以直接或间接损伤肺组织细胞,而且可以通过细胞因子及炎症介质引起肺损伤,继而出现肺间质增生和纤维化,对新生儿而言,尚可引起支气管肺发育不良。目前,高氧肺损伤的发病机制尚不完全清楚。大鼠长时间暴露于高氧环境后,P38丝裂素活化蛋白激酶(P38 mitogenactivated protein kinase,P38 MAPK)得以激活并介导急性肺损伤, P38 MAPK特异性抑制剂SB203580对这种损伤有明显的保护作用[1]。本实验以P38 MAPK特异性抑制剂 SB203580处理新生大鼠高氧肺损伤模型,观察其对肺组织P38 MAPK、白细胞介素(IL)-8和转化生长因子(TGF)-β1和丙二醛(MDA)含量变化的影响,以探讨SB203580防治新生大鼠高氧肺损伤的作用与机制。