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结核性脑膜炎实验室检查方法的评价
为了评价结核性脑膜炎(结脑)的实验室检查方法,对20例结脑和28例非结脑患儿的脑脊液分别进行了PCR、抗结核抗体、涂片找结核杆菌及腺苷脱氨酶活性测定.测定结果在结脑组和非结脑组均存在明显差别(P＜0.01),对结脑诊断的敏感性和特异性分别是85%和89.3%、55%和85.7%,5%和100%,85%和82.1%,其中以PCR检查的敏感性和特异性高,提示PCR是快速诊断结脑的可靠方法.
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胚胎着床前遗传学诊断概况
本综述系统介绍了着床前遗传学诊断(PGD)的研究现状,包括常用方法,如多聚酶链反应、荧光原位杂交及其派生技术;适用范围,如选择极体细胞、早期胚胎细胞、囊胚期细胞;临床应用,如临床筛检遗传异常胚胎来指导试管婴儿工作、研究生殖细胞和早期胚胎的发育过程;以及相关的几个问题,如性别选择、移植胚胎数的选择和诊断的准确性.
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2-02 镉接触的易感性标志物的研究
目的建立测定外周血淋巴细胞(PBL)中MT基因表达的方法,在职业和环境接触镉的人群中检测其变化,初步探讨作为镉接触的生物标志物的可行性.方法与结果用密度梯度离心法分离淋巴细胞,抽提核酸后进行差示逆转录多聚酶链反应(dRT-PCR),优化反应条件.本法可检测低至1×10-6μg总RNA中的MT基因表达.RT-PCR操作内和操作间的结果差异无显著性,具应有的稳定性.体外接触镉可迅速诱导PBL的MT基因表达,具有良好的剂量反应关系.表明PBL是分析MT基因表达的合适组织,并初步提示PBL中MT基因表达作为镉接触的生物标志物的可能性.职业接触人群的研究发现,电解车间工人的基础和诱导的MT表达水平显著高于其他两组(P＜0.05),但MT诱导能力在接触组和对照之间差异无显著性.随尿镉、血镉和镉摄入量水平上升,MT基础表达和诱导表达都增高.MT诱导能力在各种分组法中组间差异均未见显著性.MT基础表达水平反映血镉水平的敏感度和特异度都较反映尿镉要好.MT基础和诱导表达与血镉水平显著相关,同时与尿镉也显著相关.环境接触镉的人群研究发现,血镉水平升高,MT基础和诱导表达水平均显著增高.尿镉升高,MT基础表达和诱导表达水平虽有增高,但差异无显著性.高摄入量组MT基础表达和诱导表达水平高于低摄入量组,其中高摄入量组的诱导MT表达水平显著高于低摄入组.MT诱导能力水平差异均未见显著.相关分析可见MT基础表达与血镉、尿镉的对数显著相关,MT诱导表达与血镉、尿镉和镉摄入量的对数显著相关.结论提示外周血淋巴细胞金属硫蛋白基因表达作为镉接触的易感性标志物的可能性.
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孕酮对反复自然流产小鼠白介素8表达的调节作用
目的:探讨孕酮对自然流产小鼠母胎界面白介素(IL)-8的调节作用.方法:建立经典的自然流产小鼠模型(CBA/J×DBA/2交配组合),分为两组,孕酮组注射黄体酮,模型组同步注射等量的生理盐水.另设正常妊娠组小鼠(正常组)对照,每组10只小鼠.用免疫组织化学染色法和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各组小鼠蜕膜及绒毛组织中IL-8蛋白和mRNA的相对表达情况.结果:孕酮组血清孕酮(84.91±10.05ng/ml)水平明显高于模型组(41.83±9.77ng/ml),而IL-8(615.23±213.62pg/ml)水平明显低于模型组(1653.14±321.25pg/ml),差异均有统计学意义(P＜0.01);孕酮组血清孕酮、IL-8水平分别与正常组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学染色和RT-PCR在绒毛组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA(0.067±0.028,61.28±4.13)相对含量均明显低于模型组(0.135±0.012,85.72±2.63),差异均有统计学意义(P＜0.01),与正常组(0.059±0.021,58.33±2.87)比较均无统计学意义(P＞0.05);在蜕膜组织中,孕酮组IL-8蛋白和mRNA的相对含量低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05),与正常组比较均无统计学意义(P＞0.05).结论:孕酮可下调自然流产小鼠母胎界面IL-8的表达.
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实时定量RT-PCR检测大肠癌病人外周血CK20mRNA、CEA mRNA的研究
目的研究大肠癌病人外周血CK20mRNA、CEA mRNA的表达,并探讨其临床意义.方法采用实时定量RT-PCR方法,检测大肠癌病人术前外周血CK20mRNA、CEA mRNA,并与临床分期进行相关分析.结果 47例大肠癌病人外周血中CK20mRNA的阳性率为36.17%,CEA mRNA的阳性率为40.43%.统计结果显示CK20mRNA、CEA mRNA的拷贝数与Dukes分期无相关性(P分别为0.532及0.964).结论单次采血定量CK20mRNA、CEAmRNA尚不能作为术前临床分期的一个参考指标,不同病人术前的CK20mRNA、CEAmRNA值不具备可比性.
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舞蹈病一家系临床分析及基因诊断
目的从分子水平探讨Huntington舞蹈病(HD)的致病突变,为该家系的基因诊断和遗传咨询提供科学依据.方法对该病进行家系调查,应用巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳技术检测患者、HD症前高风险成员、正常人(CAG)n片段的长度,进行基因诊断.结果该家系符合常染色体显性遗传病特征,患者DNA电泳显示2条扩增区带,正常人显示1条扩增区带.结论舞蹈病为常染色体性遗传病,患者相关基因分端(CAG)n重复序列存在异常扩增.
关键词： Huntington舞蹈病 基因 多聚酶链反应 -
河北省汉族人群CYP450 2C9和VKORC1基因多态性与华法林剂量相关性研究
目的 了解河北省汉族人群CYP450 2C9和VKORC1的基因多态性分布与其他不同民族之间的差异,探讨CYP450 2C9~*3+1075C/A和VKORC1-1639A/G基因多态性与华法林剂量的关系.方法 随机选取门诊体检的健康人487名,检测CYP450 2C9~*3+1075C/A和VKORC1-1639A/G基因型及其分布频率,并与国外多个民族的CYP450 2C9~*3+1075C/A和VKORC1-1639A/G的基因多态性进行比较.选取服用华法林稳定剂量的患者101例,检测其基闪型并结合其个体差异和华法林的稳定剂量进行分析.结果 487名正常人CYP450 2C9*3+1075C/A基因型中,AA型为449名(92.2%),AC型36名(7.4%),CC型2名(0.4%);VKORC1-1639A/G基因型中AA型为415名(85.2%),GA型72名(14.8%),未发现GG型(0.0%).采用多元逐步回归得出有关华法林稳定剂量的方程:In(D)=0.346+0.017(体重)-0.376(CYP450 2C9~*3+1075C/A)+0.148(VKORC1-1639A/G)-0.002(年龄)(r=0.827,P=0.02).结论 汉族人群CYP450 2C9和VKORC1存在明显的基因多态性.CYP450 2C9~*3+1075C/A和VKORC1-1639A/G的基因型和患者个体之间的体重、年龄差异是影响华法林稳定剂量的因素.
关键词： 华法林 基因多态性 多聚酶链反应 限制性片段长度多态性 -
500名孕妇乙型肝炎病毒阳性母婴传播的研究
近10年来,具有高度敏感性和特异性的多聚酶链反应(PCR)技术已成为理想的检测乙型肝炎病毒(HBV)的新方法,广泛应用于临床研究.母婴传播是HBV感染的重要途径,为此,我们应用定量PCR技术检测500名HBsAg阳性孕妇产后初乳和新生儿脐血中的HBV DNA,进行母婴传播的研究.
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补肾益精方药对老年大鼠染色体端粒DNA重复序列长度的影响
目的:观察补肾益精方药对老年大鼠细胞染色体端粒DNA重复序列长度的影响,探讨其延缓衰老的机理.方法:以经方左归饮及自拟方益肾宝为补肾益精方药给予老年大鼠.以本实验室建立的PCR法测定老年大鼠肝、肾、睾丸及白细胞染色体端粒DNA重复序列的相对长度.用紫外分光光度计测端粒DNA扩增产物,以光密度值表示端粒DNA重复序列相对长度.结果:左归饮和益肾宝两组大鼠除睾丸组织外,肝、肾和白细胞端粒DNA扩增产物光密度值均大于老年对照组,统计学处理具有显著性差异.结论:左归饮和益肾宝补肾益精方药可使体细胞染色体端粒DNA重复序列减缓缩短,这可能就是补肾益精方药延缓机体衰老的作用机制之一.
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生物医学检测的PCR技术及其应用
聚合酶链反应或多聚酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)检测技术,又称体外基因扩增技术,早由美国Cetus公司的Kary Mullis及其同事于1985年发现并研究成功.它是通过聚合酶促寡核苷酸引物的延长,反复循环,使目的DNA成指数扩增,是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,也是体外酶促合成特异DNA片段的新方法.经过PCR过程,可在数小时内使几个拷贝的DNA序列扩增107-109倍.它已广泛应用于基因分离、基因克隆、核酸序列分析和测序,应用于研究基因表达和调控、基因多态性分析以及探讨基因与疾病等生物医学体外检测的各个领域.
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PCR试验加样过程中无DNA原则控制污染的探讨
目的探究在PCR操作过程中如何预防污染的一些基本操作方法.方法首先制定了PCR操作过程中的无DNA原则,对实验室的划分,操作总原则,Eppendorf管开、关,有螺旋的离心管开、关,装有反应体系Eppendorf管的放置,标记反应管的操作,移液器的使用方法等进行规范化,大限度地避免DNA污染反应体系.然后通过扩增新鲜扁桃体组织中珠蛋白基因及模拟手套被质粒污染的情况下扩增质粒基因,验证该无DNA操作过程对避免污染的有效性.结果按本实验的规范方法进行操作,所有阴性对照均未出现假阳性.结论采用这种无DNA原则进行PCR操作,是控制反应体系污染的一种有效方法.
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IgH基因重排PCR分析在淋巴组织细针穿刺中的辅助诊断价值
目的 探讨Ign基因重排检测在细针穿刺诊断淋巴组织病变中的价值.方法 收集淋巴组织细针穿刺病例159例,应用半巢式PCR检测IgH基因重排.将基因重排检测结果与细胞学诊断及组织学随访结果进行比较.结果 穿刺标本中,IgH基因重排检测B-NHL阳性率为72.22%,RH阳性率仅为3.92%.本法敏感性为72.22%,特异性达到96.08%.结论 IgH基因重排检测对辅助淋巴组织细针穿刺标本的良、恶性判断具有一定价值,并且单克隆性结果更有意义.但在淋巴瘤和转移性非淋巴细胞恶性肿瘤的鉴别上不建议应用.
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肝脾T细胞淋巴瘤的脾、肝及骨髓病理形态学观察
肝脾T细胞淋巴瘤(hepatosplenic T cell lymphoma,HSTL)比较少见,只占外周T细胞淋巴瘤的5%,因其具有独特的形态学、免疫表型及临床特征,1994年REAL分类将其作为暂定亚型[1],WHO(2001)分类将其确认为一种独立疾病[2].HSTL病理形态上特征性表现为肝、脾、骨髓的窦内侵犯,因此容易漏诊.本文对1例HSTL的肝、脾、骨髓侵犯的病理学特点进行分析.
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分子生物学技术在诊断细胞学中的应用
自人类开始重组DNA实验25年后的今天,分子生物学技术已经成为一种定量的分子诊断(molecular diagnostics)手段,并在不断影响着传统的诊断技术.一般认为,常用的分子生物学技术包括核酸杂交分析和各种基因扩增方法,但不包括免疫细胞化学法.目前临床常用的技术有Southem印迹杂交、多聚酶链反应(PCR)及其扩增产物的电泳分析、原位杂交和荧光原位杂交(FISH)等;其他较新的分子生物学技术,如生物芯片和核酸扩增的原位检测,亦将很快用于细胞学的研究和诊断[1,2].传统的肿瘤细胞学诊断方法是根据经验来判断是否为恶性细胞,缺乏客观指标;而分子生物学技术具有高度的特异性和敏感性,是细胞学诊断的重要手段.
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表皮葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子的相关性研究
目的研究表皮葡萄球菌(表葡)生物膜形成与ica操纵子存在之间的相关性并比较3种检测表皮葡萄球菌生物膜形成的方法. 方法通过PCR法扩增icaA基因以检测ica操纵子的存在.用半定量粘附实验、扫描电子显微镜法和光学显微镜法检测自临床分离到的19株表葡的粘附能力. 结果在19株表葡中,通过PCR法测得7株为icaA阳性,通过半定量粘附实验测得5株icaA(+)菌株为粘附株;大多数菌株在含糖培养基中所测得的吸光度(A)值大于不含糖培养基中所测得的A值. 结论 ica操纵子的存在与表葡生物膜形成在统计学上显著相关(P＜0.025).培养基中补充葡萄糖有利于大多数表葡的粘附.半定量粘附实验和光镜检测法适用于细菌粘附的初步测定和筛选,而扫描电镜检测法有更高的灵敏度以区分粘附菌株和非粘附菌株.
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乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究
近年来的研究提出HBV感染者体内存在有准种的假说,我们以前C/C基因为研究靶区域,应用多聚酶链反应(PCR)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶序列,随机选择克隆测序,比较其结果,证明了HBV准种的存在,并发现多种基因突变形式.
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利用基因扫描技术分析类风湿关节炎T细胞受体的表达
目的通过研究T细胞Vβ的表达探讨类风湿关节炎的发病机制,为新的治疗手段提供一定的理论基础. 方法应用半定量的逆转录多聚酶链反应及基因扫描技术分析类风湿关节炎、骨关节炎、截肢病人滑膜及外周血中T细胞受体Vβ基因的表达情况以及T细胞的克隆性,并选择呈现单克隆或寡克隆的部分Vβ基因进一步克隆与测序. 结果滑膜组织与外周血T细胞表达绝大多数Vβ基因.类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因的表达呈现更明显的不均衡状态,Vβ6、Vβ 17与Vβ 22为优势亚群,其中以Vβ 17的高水平表达为突出.大多数阳性表达的Vβ基因均呈多克隆性. 结论类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因表达无限制性,但是存在明显的不均衡性,某些特定Vβ基因的选择性表达支持类风湿关节炎为抗原或超抗原驱动的免疫过程.
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肾综合征出血热患者血清汉坦病毒基因的PCR-ELISA方法建立
目的建立检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清标本中HV基因的PCR-ELISA方法.方法设计并合成互补于HV S基因片段的标记引物,对108例HFRS患者血清进行巢式RT-PCR扩增,并用酶免方法分析扩增产物.结果 108例患者不同病日采集的血清标本的巢式RT-PCR平均检出率仅为62.0%,而PCR-ELISA平均检出率为81.5%.结论 PCR-ELISA用于早期HFRS患者的HV基因检测是一种理想的检测方法.
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载脂蛋白E基因型分型方法
目的建立载脂蛋白E基因型分型聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法.方法用特异的探针对氨基酸112和158多形基因区基因组的DNA扩增,产物用HhaⅠ酶消化,其片段在4%琼脂糖凝胶分离.结果经消化的载脂蛋白E片段在琼脂糖上,ε2/ε2为91、83、38 bp,ε3/ε3为91、48、38 bp,ε4/ε4为72、48、38 bp,ε2/ε3为91、83、48、38 bp,ε2/ε4为91、83、72、48、38 bp,ε3/ε4为91、72、48、38 bp.300名献血员其载脂蛋白E基因分布频率分别为ε2/ε2 0%,ε3/ε3 74%,ε4/ε4 0%,ε2/ε3 16%,ε2/ε4 2%,ε3/ε4 8%.结论以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法进行载脂蛋白E基因型分型,具有清晰、简便、快速等优点.
关键词： 载脂蛋白E 基因型 多聚酶链反应 限制性片段长度多态性 -
RFLP法检测PBMCs和血浆中HCV基因型的相关性与慢性化的关系
目的 检测HCV感染者血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)中HCV基因型的相关性,同时研究不同型的HCV与丙型肝炎复发及慢性化的关系.方法 应用特异性限制性片段长度多态分析(RFLP)-酶切分型法进行基因分型.结果 82例血浆HCV RNA阳性的病例中1b(Ⅱ)型为37例(45.1%),2a(Ⅲ)型为34例(41.5%),1b/2a(Ⅱ/Ⅲ)型为11例(13.4%).PBMCs中HCV RNA阳性的为54例(65.85%),其中1b型为38例,2a型为12例,1b/2a型为4例.结论 HCV感染人体后,不但在血浆中可以检测到HCV RNA,而且也可以在PBMCs中检测到HCV RNA.同时HCV 1b型比2a型更易感染PBMCs,HCV 1b型感染者易出现慢性持续性感染,以至于发展为肝硬化.
