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与麻风病相关的人体易感基因多态性及研究进展
麻风病是由细胞内寄生的麻风分支杆菌引起的慢性传染病.现认为,除了环境因素之外,麻风病的发病和临床结局主要取决于机体免疫反应能力及个体的遗传易感性.国内外已经对病菌本身和宿主免疫反应等方面开展了较多的研究,但对宿主遗传易感性方面的研究刚开始.早已观察到下列现象与宿主的遗传易感性有密切的关系.如:大多数感染麻风菌的人并非患病;麻风患者亲属的发病率高;同一地区,不同种族人群的患病率不等;家庭分离被证实, 即子代患病并非是随机的;在患病子代中,麻风两级(LL、TT)分布也并非是随机的;患者不可能因环境因素从一极转变为另一极,如从TT-LL或LL-TT等.在印度对患有麻风病的35对孪生子调查,发现在23对同卵双生子中,多数患者患同型别的麻风(17/19);而在12对异卵双生子中,患麻风病少,仅两对,而且型别各异[1].这提示麻风病具有遗传易感性.换言之,这种差异可能在较大程度上,由宿主遗传因素决定的,但相关的机理至今不完全清楚.近年来,麻风病免疫遗传学已从组织相容性抗原( HLA)与疾病相关性研究,发展至多学科的、采用全基因扫瞄及基因多态性分析[2-4].
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生物医学检测的PCR技术及其应用
聚合酶链反应或多聚酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)检测技术,又称体外基因扩增技术,早由美国Cetus公司的Kary Mullis及其同事于1985年发现并研究成功.它是通过聚合酶促寡核苷酸引物的延长,反复循环,使目的DNA成指数扩增,是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,也是体外酶促合成特异DNA片段的新方法.经过PCR过程,可在数小时内使几个拷贝的DNA序列扩增107-109倍.它已广泛应用于基因分离、基因克隆、核酸序列分析和测序,应用于研究基因表达和调控、基因多态性分析以及探讨基因与疾病等生物医学体外检测的各个领域.
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60例e抗原阳性慢性乙肝患者恩替卡韦抗HBV治疗后KIR基因多态性分析
杀伤细胞免疫球蛋白样受体( KIR)属于免疫球蛋白样受体超家族的成员。恩替卡韦( entecavir, ETV)是临床上应用广泛的抗乙型肝炎病毒( HBV)药物。为探讨KIR基因多态性与HBV感染慢性化及慢性乙肝患者对ETV抗HBV治疗应答差异相关性,我们对60例实验组及60例健康志愿者进行KIR基因分型检测。
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基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用
凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococcus, CNS)是定居在人体皮肤和黏膜表面的正常菌群.随着大量介入性医疗技术的发展和广谱抗生素的应用,CNS已成为儿科医院感染性疾病常见的致病原,尤其是抵抗力低下的新生儿败血症的常见病原.因此,建立快速及可靠的菌种鉴定方法,对于早期预测每一种临床细菌菌株的潜在致病性或抗生素的敏感性是非常必要的.
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慢性荨麻疹的西医治疗进展
慢性荨麻疹(CU)是指每天或几乎每天均有发生的风团或瘙痒,病程大于6周.发病率0.1%~3%.将慢性荨麻疹分为伴有明显诱发因素的荨麻疹,自身免疫性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹三类[1].80%~90%的慢性荨麻疹常规检查手段找不到过敏原或其他病因,而定义为慢性特发性荨麻疹(CIU).引起CIU的免疫机制有自身抗体学说,如有抗Fce-RIa自身抗体、甲状腺自身抗体、抗幽门螺杆菌抗体等.应用全基因组关联研究和单核苷酸多态性技术对自身免疫性荨麻疹患者进行HLA-DRB1基因多态性分析,结果表明HLA-DRB1 04表达频率较正常人明显增高,提示CIU发病还与遗传背景有关.近年凝血机制在CIU的作用得到关注,提示CIU患者可能存在外源性凝血机制的激活[2].
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睡眠呼吸暂停综合征患者组织纤溶酶原激活物抑制物1 4G/5G基因多态性分析
睡眠呼吸暂停综合征(SAS)是一种睡眠呼吸障碍,因睡眠过程中反复呼吸浅慢或暂停,导致睡眠时出现低氧和高碳酸血症,与多种心血管系统疾病关系密切[1,2]。我们借助分子生物学技术,研究SAS患者组织纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)活性、含量与PAI-1 4G/5G基因多态性及mRNA表达的关系,以期为SAS与其他心血管系统疾病之间的相互关系提供分子水平的依据。 材料与方法 (1) 临床资料:依据睡眠呼吸监测的结果,将实验对象分为两组,正常对照组30例,其中男20例,女10例,平均年龄(56±11)岁; SAS组30例,其中男20例,女10例,平均年龄(57±9)岁。(2) 用发色底物法测定PAI-1活性,用ELISA法测定PAI-1含量。(3) DNA的提取采用盐析法[1]。RNA的提取采用TRIzol一步法(根据TRIzol试剂说明书)。(4) PAI-1 4G/5G基因多态性分析:加入上游引物(CACAGAGAGAGTCTGGACAC-GT)及下游引物(AGACC-AAGAGTCCTCTGTTGG)各15 pmol,经95℃预变性2 min,95℃变性60 s,58℃复性60 s,72℃延伸45 s,共进行35个循环,后72℃延伸2 min。Bsl I 对扩增产物进行酶切。紫外灯下观察结果并拍照。(5) PAI-1 mRNA表达水平的测定:加入下游引物(GAGAACTTGGG-CAGAACCAG)25 pmol,进行逆转录,取5 μl逆转录反应产物,加入上游引物(CCACTTCTTCAGGCT-GTTCC)25 pmol及β-ectin(上游引物CCTCTAT-GCCA ACACAGTGC及下游引物GTAC-TCCTGCTTGCTG-ATCC)各25 pmol,经95℃预变性90 s,95℃变性30s,56℃复性60 s,72℃延伸60 s,共进行35个循环,后72℃延伸10 min。(6) 经4.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果并拍照,得到的负片进行光密度扫描、定量。(7) 采用SPSS软件包对结果进行统计学分析。
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hBD-1、TNFα、mEH基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究
吸烟是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要环境危险因素.而目前惟一确定的COPD基因危险因素是α1-抗胰蛋白酶缺乏,其他可能的易感基因有TNFα基因、mEH基因、人类β-防御素(hBD)-1基因、血红素氧合酶-1基因等.本研究对与COPD发病可能有关的TNFα基因、hBD-1基因、mEH基因进行基因多态性分析,探讨其与COPD的相关性,为COPD的防治提供理论依据.
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江西萍乡地区一起伤寒流行的病原遗传学多态性研究
2003年7~8月,江西萍乡某村发生一起伤寒疫情,发热病人55人,其中经临床诊断伤寒43人,流行病学调查发现,患者均饮用同一口露天井水,而未饮该井水的其他村民未发病.本研究对这期间分离的菌株进行了脉冲场凝胶电泳[1](简称PFGE)基因多态性分析,并进行了侵袭相关基因(spaO)测序比较,以获得病原学证据,分析此次流行中分离菌株的相关性.现将结果报告如下.
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膳食与基因组:营养学研究的新前沿
近年来,基因组学的研究获得了很大进展.其中一个重要标志就是于2000年6月宣告完成的人类基因组测序工作.与此同时,一系列应用于大规模基因测序、基因表达检测、以及基因多态性分析等的基因组新技术不断涌现.这些引人瞩目的成就正引发着包括营养学在内的几乎所有生物学科的革命性改革.大量研究,特别是孪生研究(twin study)及家族研究(family study),早已证实遗传因素、环境因素、以及生活方式等共同影响着常见疾病如心血管疾病、糖尿病、肿瘤、骨质疏松、老年性痴呆及肥胖等发生的遗传基因可以直接影响机体对某种疾病的易患性,或者可间接地通过影响机体对其它环境因素的反应来作用于疾病发生过程.膳食是影响人体健康重要的环境因素之一.膳食因素与常见疾病的关系一直是营养学研究的主要内容.然而,人们对膳食因素与基因因素的相互作用及其对机体健康的影响知之甚少.随着人们对人类及其它生物体基因组的了解不断深入,这种状况正在开始改变.近年来,基因组技术在营养学研究中应用的例子在迅速增加,基因多态性(polymorphisms)对膳食因素与疾病关系的影响也受到愈来愈多的营养学家所关注.可以说,把浩瀚的基因组信息应用于营养学中正成为这门学科的一个巨大的挑战和新的增长点.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌RAPD分型研究
随机扩增DNA的多态性分型技术是继质粒分析、脉冲场凝胶电泳等分子生物学分型方法之后,近年来发展起来的又一基因分型技术,建立后的短短几年,它已在医院感染的病原菌分子流行病学调查、病原菌的基因多态性分析中发挥了巨大的作用[1].为此,我们对本院临床分离的MRSA进行RAPD基因分型研究,以探讨其在流行病学的意义.
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生物芯片技术在微生物学中的应用研究进展
生物芯片技术是20世纪后期发展起来的新技术,在生命科学的各个领域逐渐得到广泛应用.本文就该技术在微生物学领域,特别是在病原微生物检验、病原微生物的基因组和基因变异性及基因多态性分析、病原微生物的致病机制、病原微生物感染后宿主机体基因表达的变化等方面的应用进行总结.
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乙型肝炎病毒感染与人类白细胞抗原-DRB1等位基因的相关性研究
不同个体感染乙型肝炎病毒(HBV)后会出现不同的疾病过程,普遍认为这与HBV本身无关,而与个体的免疫反应状况有关,而后者主要取决于人类主要组织相容性复合体(MHC).人类白细胞抗原(HLA)是MHC的基因产物,其中HLA-DRB1多态性为复杂,在机体免疫应答和免疫调节过程中发挥重要作用.我们利用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术进行HLA-DRB1基因多态性分析,从基因水平探讨免疫、遗传因素在乙型肝炎发生机制中的作用.
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慢性乙型肝炎患者白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性分析
乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界上主要的慢性病毒性疾病之一,大部分感染者均能清除病毒,仅仅5%~10%的感染者发展为慢性肝炎.
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中国山东地区汉族人群血小板特异性抗原-15基因多态性分析
血小板表面具有复杂的血型抗原,一类为ABO血型抗原和HLA血型抗原;另一类为血小板特异性抗原(Human Platelet Antigen,HPA),表现血小板独特的遗传多态性[1].HPA-15是1990年Kelton等[2]报道的一个新血小板抗原系统,它首先被发现于不相合的输血患者,随后又在新生儿同种免疫血小板减少症患者中发现[3],2003年命名为血小板特异性抗原-15[4].
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Tim-1蛋白在SLE患者血清中的表达及其基因多态性分析
目的:检测不同基因型间T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(Tim-1)在系统性红斑狼疮患者和健康对照组血清中的表达浓度及其基因第4外显子插入/缺失多态性,分析其与系统性红斑狼疮的临床意义.方法:采用ELISA方法测定Tim-1蛋白在血清中的浓度;PCR反应检测Tim-1的第4外显子插入与缺失多态性,计算不同基因型的表达频率.结果:系统性红斑狼疮患者和健康对照组血清中Tim-1蛋白的浓度分别是:(268.063±256.752)和(60.327±89.323)pg/ml,两组之间的差异有统计学意义;SLE患者Tim-1的第4外显子缺失/插入杂合子与缺失/缺失纯合子的Tim-1蛋白的浓度分别为(187.630±244.688)pg/ml和(311.356士272.119),健康对照组Tim-1的第4外显子缺失/缺失纯合子与缺失/插入杂合子的Tim-1蛋白的浓度分别为(72.285±107.827)和(43.358±41.669)pg/ml,两组之间无显著性差异.对照组的Tim-1的第4外显子缺失/缺失纯合子,缺失/插入杂合子,插入/插入纯合子基因型频率分别是0.632,0.318,0.071;系统性红斑狼疮患者相应的基因型频率是0.656,0.324,0.030.两组之间无显著性差异.结论:Tim-1蛋白在系统性红斑狼疮患者血清中的表达浓度升高,与系统性红斑狼疮的发生呈正相关性,但第4外显子插入与缺失的基因多态性与系统性红斑狼疮无相关性,该突变与Tim-1蛋白在血清中的表达无相关性.
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大鼠线粒体ATPase8基因的多态性与表达的研究
目的: 探讨正常与休克大鼠线粒体ATPase8基因的多态性及基因表达的变化,为休克的防治提供理论基础.方法:用透射电镜观察大鼠小肠线粒体形态学变化 .用PCR扩增与PUCm-T质粒重组、转入JM109大肠杆菌、Pst 1酶切、提取.用PCR扩增、纯化后测序,进行正常与休克组大鼠线粒体突变分析.用RT-PCR检测正常与休克组大鼠mRNA表达的变化.结果:电镜观察证明在正常组未见大鼠小肠细胞线粒体的异常改变,休克组可见线粒体肿胀,嵴减少,髓样结构出现.线粒体ATPase-8基因多态性分析发现:参照"Rattus norvegicus,Wistar r at” mtDNA分析,正常大鼠小肠上皮细胞mtDNA第7868位碱基A突变为G(A7868G,)占2/6;C7871T ,6/6;7767-7768之间插入G, 1/6.失血性休克5 h 大鼠小肠上皮细胞线粒体突变分析:C7 871T,2/3;T7772C, 占2/3;T7863C, 占1/3.7772位氨基酸不变,仍为苯丙氨酸;编码的第7863位氨基酸由苏氨酸变成丙氨酸.RT-PCR显示休克5 h 大鼠小肠上皮细胞mtDNA ATPase -8基因 mRNA表达比正常大鼠显著减弱(P<0.01).讨论:近年文献报导,肠道是休克的重要靶器官,休克时肠道线粒体呼吸功能明显下降,但其分子机制尚需探讨.本研究发现休克时大鼠小肠上皮细胞线粒体肿胀、嵴消失,提示休克时线粒体损伤是肠道细胞损伤的关键.AT Pase6-8基因是F1F0-ATPase 复合物的编码基因,本文检测了6 个转化菌落的肠道线粒体正常DNA ATPase-8的突变点及突变率,证明本Wistar大鼠和Rattus norvegicus,Wistar rat 存在差异,7871位C变为T,7868位存在中性突变,本结果为探讨缺血缺氧时ATPase-8基因的改变提供了基础.本文报告了失血性休克缺血缺氧大鼠肠上皮细胞线粒体基因及基因表达的改变,证明失血性休克5 h大鼠肠上皮细胞线粒体ATPase 8基因的多点突变,及由此突变引起的氨基酸的改变.此改变必然导致蛋白质结构的变化,使ATPase-8功能降低.研究还发现,休克时大鼠小肠上皮细胞线粒体ATPase-8基因的mRNA 表达显著下降.提示休克时AT P下降、ATP酶活性下降与ATPase-8基因改变和基因表达显著减少有关.结论:正常大鼠肠上皮细胞线粒体ATPase 8基因存在多态性,休克时小肠上皮细胞线粒体ATPase-8基因改变及表达水平的下降是导致ATPase 酶的质和量发生改变以及能量合成下降的重要原因.
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高血压肾损害患者β2肾上腺素能受体基因多态性分析
本研究中,我们探讨肾组织β2肾上腺素能受体(B2AR)基因(-1023G/A,rs2053044;+252G/A,rs1042717)多态性与高血压病(EH)并发肾功能受损(RI)的关系.
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泛素羧基末端水解酶L1基因S18Y多态性与脑淀粉样血管病的关系
目的 探讨中国汉族人群泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)基因的S18Y多态性在脑淀粉样血管病(CAA)发病机制中的作用.方法 利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法 检测40例经病理学证实的CAA患者和40例健康人UCH-L1基因S18Y多态性分布后,进行病例-对照相关分析.结果 S18Y多态性YY基因型频率在CAA组(22.5%)和健康对照组(12.5%)差异无统计学意义(χ2=1.385,P=0.205);SY基因型频率在CAA组(47.5%)和对照组(25.0%)差异有统计学意义(χ2=4.381,P=0.033);Y等位基因频率在CAA组(46.2%)和对照组(25.0%)差异有统计学意义(χ2=7.876,P=0.005); SY基因型频率、Y等位基因频率与CAA呈正相关(OR=1.900,95%CI:1.036~4.595;OR=1.850,95%CI:1.143~2.140).结论 中国汉族人群L1(UCH-L1)基因的S18Y多态性的杂合子SY可能是CAA的遗传易感性基因型,Y等位基因携带者也对CAA有较高的遗传易感性.
关键词: 脑淀粉样血管病 泛素羧基末端水解酶L1基因 基因多态性分析 -
多基因联合变异与高血压
原发性高血压的遗传学基础十分复杂。尽管多种基因的变异在一些研究中显示出与高血压相关,但在另外的研究人群中常常得不出相同的结果。作者通过检测多个基因同时变异的作用,观察其对高血压的影响。 方法:观察对象为加纳入,按血压分组:收缩压(SBP)≥160mmHg(1mmHg=0.1333 kPa)及/或舒张压(DBP)≥95mmHg或既往诊断为高血压者为高血压组,共126例;SBP和DBP分别≤139mmHg和90mmHg且既往未诊断为高血压者为正常血压组,共51例,介于上述血压之间者不作基因分析。两组年龄匹配。应用标准的PCR或PCR/RFLP方法进行基因多态性分析。作者检测了4个候选部位等位基因的相互作用对高血压的影响,其中三个部位属于肾素-血管紧张素系统:血管紧张素原(AGT)、血管紧张紊转换酶(ACE)和I型血管紧张素I受体(AT1R),且既往至少有一项研究显示其与高血压有关,第四个部位是既往尚未描述过的,即FJ。共分析了这些部位中的7个多态性位点,观察其与两组病人的关系。
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中国汉族人群COPD吸烟史患者HHIP基因多态性与肺癌的相关性研究
目的 探讨中国汉族人群COPD吸烟史患者HHIP基因多态性与发生肺癌风险的相关性.方法 以672例COPD患者作为研究对象,依据病情分为试验组(COPD合并肺癌患者,n=265)和观察组(单纯COPD患者,n=207),采用连接酶检测反应法对患者HHIP基因的多态性位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420进行多态性分析.对连锁不平衡性分析及SNP点基因型与肺癌风险进行Logistic回归分析.结果 HHIP基因位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420经Hardy,Weinberg平衡检验,均符合H.W平衡定律(P>0.05),具有群体代表性.以是否合并肺癌为因变量,各研究位点基因型多态性为自变量,行Logistic回归分析(年龄、性别、吸烟状况进行校正),结果显示,HHIP基因位点rs1489758、rs1489759、rs10519717、rs13131837、rs1492820、rs7689420与COPD患者是否并发肺癌无统计学关系(P>0.05).结论 本研究未发现HHIP基因的6个多态性位点与中国汉族COPD患者的肺癌发病风险有明确相关性.