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男性淋病患者合并生殖支原体感染的研究
生殖支原体(Mg)由于培养时间长,影响因素多,因此,培养成功率不高.Mg与人类疾病关系的研究进展,主要得益于DNA杂交和PCR基因扩增技术的问世.
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中国LAMP?研究会第四届大会暨中国LAMP?产业联盟大会在成都圆满落幕
2013年11月1日中国L A M P ?研究会第四届大会在成都顺利召开,来自两岸三地及日本的200多位专家和学者出席了本次大会,会上对该项技术的研制开发及应用前景展开讨论。
LAMP?技术作为一种快速基因扩增技术,能应用于医疗、卫生、食品及环境等多个领域的检测,在本届大会中来自医学、检疫系统的专家做了精彩的报告。LAMP?技术不仅应用范围广,抗干扰性也较强,能在国际宇宙空间中和西藏的高海拔地区进行应用,所以说LAMP?方法是一种特别适用于现场检测、床头检测和基层单位的快速检测方法。LAMP技术在医疗诊断领域取得举目成果,肺炎支原体、乳腺癌前哨淋巴结术中快速活检方法和H7N9禽流感病毒等的L A M P法快速诊断方法已建立。LAMP?方法具有快速、灵敏度高、准确性高的特点,在检疫系统得到了很好的推广,应用LAMP?方法检测转基因食品、疫病和动植物病害,为出入境中“快检、快放”提供了可能。LAMP?技术在创新研究方面也取得了一些进展,将LAMP?方法与探针相结合,发明了核酸恒温扩增反应中防止核酸污染的方法,并已申请专利。 -
生物医学检测的PCR技术及其应用
聚合酶链反应或多聚酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)检测技术,又称体外基因扩增技术,早由美国Cetus公司的Kary Mullis及其同事于1985年发现并研究成功.它是通过聚合酶促寡核苷酸引物的延长,反复循环,使目的DNA成指数扩增,是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,也是体外酶促合成特异DNA片段的新方法.经过PCR过程,可在数小时内使几个拷贝的DNA序列扩增107-109倍.它已广泛应用于基因分离、基因克隆、核酸序列分析和测序,应用于研究基因表达和调控、基因多态性分析以及探讨基因与疾病等生物医学体外检测的各个领域.
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恒温扩增试纸条法检测解脲支原体方法的构建及临床应用
生殖道解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)感染是人类生殖道疾病常见、多发的病原体之一,解脲支原体感染可引起男性泌尿道感染,女性生殖道炎症、盆腔炎等,严重者可引起男女不孕不育[J].早期诊断对解脲支原体感染的治疗有着深远意义.目前实验室检测多以培养和荧光定量PCR为主,而培养需要48 h,同时对标本的采集、运输有较高的要求,不适合于快速诊断.荧光定量PCR技术可以在2h内报告结果,可是需要昂贵的定量PCR仪和标准的实验室才能完成,同时定量PCR仪操作为批量式操作,不能达到随到随检测的目的.本文采用了基因扩增技术和免疫层析技术相结合建立一种新型的检测解脲支原体的方法.现介绍如下.
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PCR试剂盒保存方法的探讨
聚合酶链反应( polymerase chain reaction,PCR)又称体外基因扩增技术.1985 年美国PE公司人类基因研究室Muliss等人发明了该项技术,极大地推动了生命科学各个领域的发展并因此获得诺贝尔奖.近年来,PCR技术在临床应用越来越广泛,它已使临床检测水平跃上一个新台阶.但在临床检测过程中,发现PCR结果有时不太稳定,这与许多因素有关,如PCR试剂盒的保存条件、PCR操作环境、样品处理的手段等等.本文对乙型肝炎PCP试剂盒的保存条件问题做了一些研究.
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进一步控制经输血传播的病毒感染
输血所致病毒感染一直是国内外输血界所关注的。近10年来,各国对献血者乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)、丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)进行了免疫筛查,使经输血传播的病毒感染率有了显著下降。但因病毒基因型的变异、检测试剂的敏感性以及新病毒的发现,经输血传播病毒感染依然存在。因此,与输血相关的病毒感染的危险性及基因扩增技术(GAT)筛查献血者的价值已成为医学领域中一个研究热点[1]。
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病毒载量实时扩增检测技术的研究进展
近年来,运用基因扩增技术对病毒进行定性或定量检测已取得了巨大进步,尤其是定量检测技术的发展,使得临床能够更加有效地监测患者治疗效果、是否有耐药性发生等病情,并可依据病毒荷载量的变化合理地解释病情的变化[1-3].
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各类病毒的PCR检测
1 检测人类T-细胞淋巴瘤/白血病病毒 应用体外基因扩增技术棗PCR大大地增进了人类癌基因逆转录病毒的检测,因此PCR技术作为人类T-淋巴瘤/白血病病毒(HTLV-1.II)的临床诊断和流行病学研究的手段,广泛地应用于淋巴细胞增生性疾病和神经系统疾病的病人和携带者的检测.由于该技术具有相当高的敏感性,可以准确地鉴别出已发生感染的无症状携带者,因此还可能促进分子流行病学的建立.引物的探针系统包括普遍性和特异性两种.普遍性引物和探针系统用于扩增和检测HTLV-1和HTLN-II,而特异性引物和探针系统用于区别这两种病毒.对于流行病学筛选,常规应用普遍性引物探针系统进行初筛,对于阳性的DNA再进一步进行特异性分析.
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原位反转录PCR技术及其应用的研究进展
多聚酶链式反应(ploymease chains reaction,PCR)是80年代以来广泛应用的体外液相基因扩增技术,具有高度特异性和敏感性,能对正常和许多疾病的靶序列进行分子水平的分析.但PCR需要对细胞或组织加以破碎以分离核酸,因此不能将扩增的结果直接在组织中定位,即难以确定靶序列所在的细胞和组织类型,这是PCR技术的一个明显的局限性.
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HBV DNA定量与乙肝血清标志物之间关系探讨
酶免吸附试验(ELISA法)检测乙型肝炎免疫标志物(HBVM)简便、快速、价廉,是临床诊断、治疗乙型肝炎的主要依据.随着基因扩增技术的发展,人们发现,用聚合酶链反应(PCR)测定血液HBV DNA含量则更直接,更可靠.
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实时扩增技术在临床病毒学研究中的应用:优势与制约
众所周知,基因扩增技术包括聚合酶链反应(po1ymerase chain reaction,PCR)和核酸序列依赖的扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA).PCR技术可以RNA或DNA为模板,以RNA为模板时先进行逆转录反应;而NASBA技术则是专一的以RNA为模板的基因扩增技术,其扩增过程需3种酶的参与,其分别是鸟髓母细胞增多症病毒逆转录酶(avian myeloblastosis virus reverse transcriptase,AMV-RT)、核糖核酸酶H和T7RNA聚合酶.
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连接酶链反应检测沙眼衣原体的实验研究
由于沙眼衣原体(CT)感染临床表现不典型,常易漏诊,因此早期正确诊断十分重要.连接酶链反应(ligase chain reaction,LCR)是继聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)之后发展起来的一项具有良好应用前景的基因扩增技术.我们采用LCR扩增CT DNA,并用电泳检测扩增产物,取得了良好结果,现将结果报道如下.
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影响PCR技术检测HBV DNA结果的因素分析
PCR技术(聚合酶链反应)检测HBV DNA,具有简便、快速、特异性强、灵敏度高等优点,自问世以来就得到临床的广泛重视.本文就其结果的影响因素进行分析如下.1 假阳性结果 1.1 PCR实验室设计未达到要求所致由于PCR是一种特异强、灵敏性高的体外基因扩增技术,只要有靶DNA片段污染,就会造成假阳性,这是开展PCE技术的一大困难,且不易克服.笔者认为应有四间PCR实验室:一间配制试剂、一间处理标本、一间扩增,一间检测扩增产物.这样就避免室间污染,增加结果的可信度.
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多聚酶链反应诊断女性淋菌性宫颈炎110例
女性淋菌性宫颈炎是常见的性传播疾病之一,近年来,其发病率呈上升趋势.多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是近几年发展起来的快速体外基因扩增技术,其准确性是常规涂片检查所不能比拟的,本组采用PCR技术检测110例女性淋菌性宫颈炎,其阳性检测率100%,现报道如下.
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聚合酶链反应在男性急性淋菌性尿道炎诊断及治疗中的应用
PCR是一种体外基因扩增技术.具有灵敏、快速、简便、特异性和敏感性高等特点.现将我院收治134例男性急性淋菌性尿道炎患者治疗前后传统涂片染色检查和PCR法检测的结果进行比较,报告如下.
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临床基因扩增实验室的建立
一、临床基因扩增实验室的现状基因扩增技术作为现代分子生物学检测的先进手段之一,为多种疾病提供了核酸的诊断依据,但部分地区呈现开展基因扩增检验过热现象,造成检验结果和临床意义十分混乱;为加强对临床基因扩增检验的管理,1998年卫生部医政司发文,停止临床出PCR检验报告.
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PCR检测病毒核酸在血制品生产中的应用
目的建立适用于血制品企业的PCR检测原料血浆的方法.方法以HBV,HCV和HIV PCR荧光定量检测试剂和WHO标准品对CAP样品、BBI样品和公司混合血浆进行测定,追踪调查部分阳性血浆献浆者.结果 PCR检测结果与CAP和BBI公布结果基本相符.在原料血浆中用PCR方法检出35份阳性血浆.结论 PCR检测技术能应用于血制品企业.
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PCR法筛查混合血浆中病毒的可行性
目前,血液及血液制品的安全性主要依靠严格的献血者选择(献血前询问及使用敏感的抗体 /抗原试剂对献血者血液进行输血相关病毒的筛查)和使用有效的去除/灭活病毒程序对血液制品进行处理.高敏感性和特异性的HBV、HCV和HIV第2代和第3代ELISA检测试剂的使用大大降低了输血及血液制品带来的病毒感染[1~4],但是,输血导致的病毒感染仍时有发生[1,4],这主要是因为有诊断窗口期的存在--窗口期之内,已经遭受病毒感染的献血者体内尚未产生足够的、可以检测到的抗体复合物[1,3~5],ELISA试剂的检测结果显示为阴性. 如果使用高度敏感的核酸扩增(PCR)技术直接检测病毒的核酸,就可以大幅度地缩短阳转前的窗口期,减少病毒传播的可能性.Schreiber等证明,使用PCR检测技术可以使HCV、HBV和HIV的窗口期分别缩短到59d,29d和11d[1].同时美国的研究者们也证明,多次献浆者经PCR检测后,其传播3种病毒(HCV、HBV和HIV)的危害性分别降低72%,4 2%和50%. 在过去的10年中,PCR技术迅速发展起来,并且在许多项目的诊断和应用方面商业化,将它应用于减少输血病毒感染是采供血机构的目标.然而,这项技术尚未能在采供血机构中广泛应用是基于一些技术上和经济上的原因:① PCR技术的实现,需要一些在分子生物学技术和设备方面接受过特别训练的人员;②为了防止样本扩增时出现交叉污染,试剂准备、样本处理、病毒扩增和检测均需要在单独隔离的房间里进行,对实验室的空间和洁净程度要求较高;
关键词: 基因扩增技术 PCR 输血相关病毒混合血浆 -
基因扩增技术分析前质量控制的相关环节
基因扩增技术(polymerase chain reaction 简称 PCR)是近年来分子生物学水平的一种新的疾病检测手段,具有灵敏、特异、微量、简便、快速等优点,操作中影响因素颇多,质量控制难以掌控,尤其是分析前质量控制涉及环节较多,是目前实验室质量控制中薄弱也是需要重视的环节。控制好这些环节,对提高 PCR 检验的准确度、可信度,提高分子生物学诊治水平,提高检验人员的业务水平,减少医患纠纷以及对 PCR 实验室的技术准入、验收都是非常重要的,也是非常必要的。笔者从 PCR 检验申请单正确填写,患者的准备,标本的采集、处理、运送、储存、不合格标本的拒收,实验室技术人员的要求,仪器设备的校准、维护,试剂、耗材的质检,标准化操作程序(SOP)的编写和执行、实验室安全等分析前的相关环节对PCR 检验质量的影响予以阐述,供同行参考。
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PCR技术的研究进展与临床应用
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术,1985年美国PE公司人类遗传研究室Mullis等人发明了该项技术,Saiki等首先应用于镰状红细胞贫血的产前诊断[1],但由于操作方法繁琐未能全面推广应用.直到1988年耐热DNA聚合酶(Taq酶)的发现和应用[2],使PCR技术变得极为简单,才被迅速应用于分子生物学、生物工程、医学、法医学领域,也使人类疾病的基因诊断进入了临床实用阶段.历经十余年,PCR技术已由当初只能对样品中的DNA和RNA定性分析发展到能够进行定量分析.本文对PCR技术的研究进展与临床应用作一综述.