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结核分枝杆菌核酸检测试剂生产质量控制与临床研究概述
Mtb核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而检测特定Mtb核酸序列或筛查特定Mtb基因的检测技术,常用检测技术有:PCR、连接酶链反应(ligase chain reaction,LCR)、转录依赖的扩增反应(transcription mediated amplification,TMA)等.笔者主要针对Mtb核酸扩增法检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制及临床研究的技术要求进行概述,为Mtb核酸扩增法检测试剂的研制提供参考.
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连接酶链反应检测男性尿标本中沙眼衣原体
[目的]应用连接酶链反应技术检测男性尿标本中的沙眼衣原体,初步评价其敏感性和特异性.[方法]采集受检者晨起或较长时间(2h以上)不排尿后的首段尿(FVU)标本1131份,利用连接酶链反应技术(LCR)对尿液标本进行沙眼衣原体检测,针对临界值灰区以上的标本进行PCR检测.对LCR和PCR结果相异的标本,用另一LCR试剂进行复检.参照"扩大的金标准"来确定检测结果.[结果]ICR的敏感性和特异性分别为97.5%和98.4%.[结论]LCR作为一种探针检测技术,是一种既敏感又特异的诊断方法,可避免取尿道标本给患者带来的痛苦,可作为筛检男性沙眼衣原体感染的一种非损伤性方法.
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连接酶链反应检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌的可重复性问题研究
[目的]应用连接酶链反应技术(LCR)检测男性尿标本中的淋病奈瑟菌和沙眼衣原体,发现并阻止污染和可重复性问题的发生.[方法]采集受检者晨起或较长时间(2h以上)不排尿后的首段尿(FVU)标本1130份,利用LCR对此尿液标本进行淋病奈瑟菌和沙眼衣原体检测,针对S/CO在0.8以上的标本72h内进行复检,如果重复实验的S/CO≥1.0则认为阳性,S/CO《1.0,则为阴性.[结果]在1130例标本中,淋病奈瑟菌的S/CO在0.8以上的标本有13份,重复实验10份为阳性,其中3份S/CO在0.8~2.0的标本,复检为阴性.沙眼衣原体阳性60份,重复实验45份为阳性,18份S/CO在0.8~2.0的标本,15份复检为阴性.[结论]采用LCR检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体时,如S/CO在0.8~2.0应进行重新检测,可阻止污染和可重复性问题的发生.
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连接酶链反应检测沙眼衣原体诊断泌尿生殖系感染
目的:研究应用连接酶链反应方法(LCR)检测沙眼衣原体(CT)在诊断泌尿生殖道感染中的临床意义.方法:应用LCR对4024份患者的尿标本进行CT的检测,其中有417份尿道拭子或宫颈拭子同时进行培养法和LCR的检测,并对两种方法的检测结果进行了比较分析.结果:LCR法检测4024份尿标本,CT阳性率为17.50%(704/4024),417份拭子标本LCR检测阳性率为20.62%(86/417),培养法检测阳性率为8.39%(35/417).LCR法与培养法之间差异有极显著性(P<0.005).结论:LCR法与培养法比较具有敏感、快速和特异的特点,用于检测拭子标本和尿标本在检测CT诊断泌尿生殖道感染中有着重要的意义.
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荧光探针定量聚合酶链反应检测结核分支杆菌比较研究
关于结核病的实验室诊断,近年来报道了一些新的快速诊断方法:如荧光探针定量聚合酶链反应,连接酶链反应,基因探针扩增检测结核分支杆菌复合物等新技术方法,提高了结核分支杆菌(MTB)的检出率.
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液态芯片与PCR-LDR技术对K-ras基因分型初探
目的 采用基于液态芯片的K-ras基因分型检测方法分析非小细胞肺癌(NSCLC)组织样本中的K-ras基因突变水平,指导非小细胞肺癌患者个体化靶向治疗和预后评估.方法 实验诊断技术研究方法.对液态芯片的K-ras基因分型检测方法进行灵敏度和重复性的评估.选取2011年11月至2012年2月上海市胸科医院的100例非小细胞肺癌患者新鲜组织样本,提取基因组DNA,通过采用PCR-连接酶检测反应(LDR)结合液态芯片技术,对待测样品K-ras基因2号外显子上12、13密码子上8个突变位点进行分析,并通过测序验证结果.结果 液相芯片技术检测灵敏度为10% ~20%,高于传统测序法的1%.平均CV值<1%,表现出很好的重复性.从100例NSCLC患者组织样本中共检出5例突变,其中3例为Gly12 Val突变,2例为Glyl2Asp突变.结论 基于液态芯片与PCR-LDR技术的K-ras基因分型检测方法检测通量高、灵敏度高、重复性好,是NSCLC患者个体化治疗及预后判断的K-ras基因突变分析的合理方法.
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Gap-LCR-ELISA法与PCR-反向杂交法对沙眼衣原体的检测的对比研究
沙眼是由沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)感染引起的一种感染性眼病,是全球因感染而致盲的主要病因,集中在非洲和亚洲[1].本研究对167份标本用质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附测定(Gap-LCR-ELISA)法及PCR-反向杂交法进行检测,并与传统的培养法比较,结果报道如下.
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连接酶链反应检测泌尿生殖道淋病奈瑟菌感染
在性传播疾病(STD)中,淋病奈瑟菌(NG)的感染较常见.文献报道连接酶链反应(LCR)对NG的诊断有高度的敏感性和特异性.我们通过对STD门诊尿道炎/宫颈炎患者276份拭子标本进行LCR检测和细菌培养,评价LCR诊断男性尿道、女性宫颈NG感染的意义.一、材料与方法1.标本来源:STD门诊尿道/宫颈炎患者276例,有轻重不等的尿道炎/宫颈炎症状和体征,就诊前两周内未使用任何抗生素.拭子插入尿道或宫颈内捻转并停留10 s,取出后立即接种T-M培养基,然后将拭子置入LCx STD拭子标本收集及运送试管内(美国Abbott公司产品).2.细菌培养: 拭子接种后,置5% CO2温箱,37℃培养48~72
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尿液质粒Gap-LCR-ELISA法检测重庆地区围产期孕妇沙眼衣原体感染
目的将尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)用于检测重庆地区孕妇以了解围产期沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)的感染现状. 方法以512名孕妇首段尿(first void urine,FVU)及配对宫颈上皮细胞为研究对象,按照扩大金标准,比较质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染的方法学指标.结果(1)孕妇的CT感染呈现很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区围产期孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出.(2)Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的灵敏度分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈上皮细胞和FVU两种标本的灵敏度分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异度均为100%.结论质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围产期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度灵敏特异的、适于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法.
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应用缺口-连接酶链反应检测新生儿沙眼衣原体感染
目的建立缺口-连接酶链反应(gap ligase chain reaction, G-LCR)诊断新生儿沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)感染.方法根据沙眼衣原体主要外膜蛋白基因设计两对探针,应用LCR技术扩增衣原体标准株DNA,并用于检测328例新生儿肺炎鼻咽拭子标本中的沙眼衣原体,在敏感性、特异性方面与传统的细胞培养法进行比较.结果 G-LCR可检测出两个衣原体原体;可扩增5种沙眼衣原体标准株 DNA,不扩增鹦鹉热衣原体及其他细菌DNA,显示出很高的特异性.328例鼻咽拭子标本中,G-LCR扩增检出67例阳性,培养检出60例.经结果不一致分析后,共检出69例阳性,阳性率为21%.以扩大标准为金标准判断,G-LCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为98.6%、100%、100%和99.6%,而培养则分别为86.9%、100%、100%和96.6%.结论 G-LCR检测新生儿沙眼衣原体感染具有较高的敏感性和特异性.G-LCR是一种有应用前景的核酸扩增方法.
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连接酶链反应(LCR)技术检测男性尿标本的淋病奈瑟菌
目的应用连接酶链反应(LCR)技术检测男性尿标本中的淋病奈瑟菌,初步评价其敏感性和特异性.方法采集受检者晨起或较长时间(2小时以上)不排尿后的首段尿(FVU)标本1 131例,利用LCR检测此尿液标本中的淋球菌,针对Cut-off值在灰区以上的标本进行聚合酶链反应(PCR)检测.对LCR和PCR结果相异的标本,用另一LCR试剂复检,参照"扩大的金标准"来确定检测结果.结果LCR的敏感性和特异性分别为100%和99.9%.结论LCR作为一种探针检测技术,是一种既敏感又特异的诊断方法,可避免取尿道标本给患者带来的痛苦,可作为筛检男性淋病奈瑟菌感染的一种非损伤性方法.
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连接酶链反应检测尿液中的淋病奈瑟球菌
目的评价连接酶链反应(LCR)技术对尿液中淋病奈瑟球菌诊断的意义.方法对在性传播疾病(STD)门诊就诊的276例尿道/宫颈炎患者进行分泌物细菌培养及尿液淋病奈瑟球菌LCR检测,对两项结果不符合的标本进行聚合酶链反应(PCR)检测,确定细菌培养、LCR法检测尿液中淋病奈瑟球菌的敏感性、特异性.结果 276例患者中,24例LCR检测阳性(8.7%),21例培养阳性(7.6%),5例两项结果不符合者进行PCR检测.LCR的敏感性及特异性分别为92.3%、100.0%.结论 LCR分析法检测尿液中的淋病奈瑟球菌具有较高的敏感性及特异性.
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淋球菌感染与其他性传播性疾病感染关系的研究
目的 探讨高危妇女中淋病的发生率及与生殖道其他感染的关系.方法 应用T-M培养基、连接酶链反应(LCR)、TPHA、RPR、阴液革兰染色涂片等对966例高危妇女进行淋病、衣原体、梅毒、HIV、尖锐湿疣、念珠、滴虫和细菌性阴道炎检查.结果 966例自愿者中检出淋病172例,发生率17.80%.合并阴道其他感染87.79%,合并衣原体感染41.27%,合并梅毒11.62%,合并尖锐湿疣7.5%,合并HIV1.74%,总合并感染率高达95.94%,仅为单一的淋病患者4.06%.结论 淋病患者合并其他生殖感染及性病发生率高,特别是合并阴道感染发生率高,因此对反复阴道感染或治疗效果欠佳的阴道炎应注意合并淋球菌感染,对发现淋病的患者应同时进行其他生殖感染及性病的检查,以免漏诊,提高诊断率.
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连接酶链反应及其应用
连接酶链反应(Ligase Chain Reation,LCR)是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR技术的新方法.LCR既可扩增,又可鉴定DNA异常,与PCR技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查.
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沙眼衣原体与男性不育关系探讨
沙眼衣原体(CT)所致泌尿生殖道感染在世界范围内呈上升趋势.由于CT感染多发生于青年并且引起急性附睾炎,因此其对男性不育的作用引起了人们的关注[1].为了解CT感染与男性不育的关系,我们用连接酶链反应(LCR)法检测男性不育患者尿液中CT,报道如下.
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连接酶链反应(LCR)与聚合酶链反应(PCR)检测解脲支原体的比较
目的:LCR 与PCR 在检测解脲支原体(UU)泌尿生殖感染中的临床意义与差别,方法:用LCR 法与PCR 法对232 份临床病历进行检测UU,其中201 份来源于男性尿道拭子和女性宫颈拭子,对两种检测方法的检测结果进行了分析.结果:LCR 检测法检测232 份标本,UU 阳性率为29%(69/232),PCR 法检测232 份标本,阳性率为23%(55/232).LCR 与PCR 检测有明显差异(P〈0.05〉,结论:LCR 用于临床男性尿道拭子和女性宫颈拭子在诊断泌尿生殖感染中有极其重要意义.
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上海某区外来务工者中性传播疾病感染情况的调查分析
目的对上海某区外来务工者中各种性传播疾病感染情况进行调查.方法以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体,甲苯胺红不加热血清试验/被动颗粒凝集试验(TRUST/TP.PA)检测血清抗梅毒螺旋体抗体,连接酶链反应(LCR)技术进行尿液淋球菌、沙眼衣原体的检测.结果在1 128名被检者中,共检测血清标本1 041份,尿液标本1 128份.检出抗HIV抗体可疑阳性1例,(0.1%,1/1 041);抗梅毒抗体阳性10例(0.96%,10/1 041);检出淋球菌阳性8例(0.71%,8/1 128);沙眼衣原体阳性38例(3.37%,38/1 128).结论在这部分人群中,梅毒、淋病和非淋球菌性尿道炎的感染率均高于全国以及全市流行病传报的平均水平.应加强对外来务工者各类性传播疾病的监测管理工作.
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连接酶链反应和细胞培养检测男性尿液中沙眼衣原体
目的评价连接酶链反应(LCR)检测男性尿液标本中沙眼衣原体(Ct)的敏感性和特异性.方法取852例患者尿道拭子作Ct培养;同时取患者较长时间(2 h以上)不排尿后的首次尿(FVU)标本,用质粒LCR检测Ct.对培养法和质粒LCR检测结果相异的标本,用另一针对Ct主要外膜蛋白基因的引物进行LCR确证,参照"扩大的金标准"确定检测结果.结果质粒LCR敏感性和特异性分别为98.6%和99.4%,而培养法分别为77.4%和99.5%,前者敏感性高于后者(P<0.001).有、无尿道症状的患者间LCR敏感性和特异性无显著性差异.结论 LCR是一种既敏感又特异的Ct感染诊断方法.
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026 使用混合标本连接酶链反应筛查生殖器沙眼衣原体感染的协作研究
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女性宫颈淋球菌3种检测方法比较
淋病是由淋球菌引起的泌尿生殖道的化脓性感染,女性淋球菌感染常仅表现为宫颈脓性分泌物或无症状,因此,选择一种特异、敏感的检测方法对诊断女性淋球菌感染有着重要的意义.本文采用淋球菌培养、聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)3种检测方法检测宫颈淋球菌,并比较3种方法检测淋球菌的特异性及敏感性.