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HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因与HBV感染预后相关性研究
近年来HLA等位基因与HBV相关性研究,相继有所报道[1],但因被研究人群种族、检测方法、实验设计方面的差异,研究结论也有所不同,因而HLA与乙型肝炎的相关性,目前尚无定论.我们随机选取HBV感染后不同临床类型患者,采用序列特异性引物-多聚酶链式反应(SSP-PCR)方法,进行了HLA-Ⅰ,Ⅱ类基因与HBV感染预后相关性研究,现将结果报道如下.
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云南汉族系统性红斑狼疮与HLA-B等位基因相关性的研究
人白细胞抗原(HLA)系统是人类为复杂的免疫遗传系统,与许多免疫疾病的发生直接或者间接相关.系统性红斑狼疮(SLE)与HLA的相关性研究一直受到国内外的关注,目前,国内研究SLE与HLA关联的报道多见于DQ、DR和TNF等基因[1-3].我们应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对云南汉族SLE与HLA-B基因的相关性进行了研究.
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HLA-DRB1等位基因与红皮病的易感性研究
红皮病是一种严重的皮肤疾病,其病因复杂,死亡率较高.但是同样疾病在相同条件下的发病率却不同.我们用聚合酶链反应/序列特异性引物技术(PCR/SSP)方法分析红皮病患者HLA-DRB1等位基因频率,为治疗及预防该疾病寻找科学依据.
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成人原发性肾病综合征HLA-DR基因频率
原发性肾病综合征(nephrotic syndrom, NS)是肾小球疾病的一种主要临床表现,其症状为高度水肿、大量蛋白尿、高脂血症和低蛋白血症.其发病机理尚不清楚.为了探讨人类白细胞抗原(HLA),尤其是DR抗原与本病的免疫遗传机制有否关联,以往的学者多采用血清学技术或特异性寡核苷酸探针杂交及聚合酶链反应(PCR-SSO)技术检测NS患者的HLA-DR基因频率.本研究利用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,检测成人原发NS患者的HLA-DR基因频率,试图发现与本病关系密切的HLA-DR等位基因,从免疫遗传学方面研究本病的发病机理.
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小儿肾病综合征与HLA Ⅰ、Ⅱ类基因相关性的研究
小儿原发性肾病综合征(PNS)病因尚未明确,多数学者认为与免疫、遗传有关.人白细胞抗原(HLA)是人类主要遗传免疫标志之一,HLA与小儿PNS的关系各国报道不一,主要集中于A、B、DR、DQ位点.我们采用聚合酶链反应一序列特异性引物技术(PCR-SSP)检测山西汉族激素敏感型肾病综合征(SSNS)患儿HLA-A、B、DRB1位点等位基因的表达.
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广西地区汉族系统性红斑狼疮与HLA-DRB1等位基因相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)是典型的自身免疫性疾病,由于因人种、民族、地理环境等因素不同,HLA抗原分布可出现较大的差异,其与SLE相关的抗原型与基因型亦存在较大差异.我们应用聚合酶链式反应-序列特异性引物 (PCR-SSP) 技术,对广西汉族SLE的HLA-DRB1基因进行分型研究.
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中国南方汉族人群HLA-Cw座位基因多态性分析
目的分析中国南方汉族人群HLA-Cw座位基因多态性. 方法采用ARMS/PCR技术对60名随机选择的南方汉族健康个体作HLA-Cw基因分型. 结果共检出12种HLA-Cw等位基因或等位基因组(allele group),其中HLA-Cw*07、*01、*03为该人群常见HLA-Cw基因,频率之和为 0.6932;证实该群体中HLA-Cw*08频率为0.1056,检出率明显高于血清学分型;检出HLA-Cw*1202、*1203、*14、*15等4种经典血清学分型不能鉴定的HLA-Cw基因,频率之和为0.0673. 结论提供了中国南方汉族人群HLA-Cw座位基因频率正常值,证实ARMS/PCR作HLA-Cw分型具有准确、快捷的优点.
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序列特异性寡核苷酸探针基因分型在造血干细胞与肾脏移植中的应用
异基因造血干细胞或实体器官移植成功率与人类白细胞抗原(HLA)配型密切相关,因此探讨准确的分型方法对指导临床移植十分重要.本研究应用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)杂交技术对造血干细胞移植、肾移植的供、受者进行HLA分型,并与聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型、血清学分型进行比较.
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幽门螺杆菌感染儿童HLA-DQAl的免疫遗传学特征
目的:了解昆明汉族儿童中幽门螺杆菌(H pylori)感染率及其HLA-DQAl免疫遗传学特征.方法:用胶体金标免疫渗滤法检测153名6-14岁的学生血H pylori-IgG抗体.并用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对以血清学试验及13C尿素呼气试验确诊的34例H pylori感染儿童及37例无H pylori感染儿童进行HLA-DQAl基因分型.结果:昆明儿童H pylori感染率为34.5%,其HLA-DQAl*0103等位基因频率明显高于无H pylori感染儿童(29.41% vs9.46%,P=0.002,Pc=0.028,OR=3.988,95%CI:1.562-10.180);而H pylori感染儿童HLA-DQAl*0302等位基因频率低于无H pylori感染儿童(19.12% vs33.78%,P=0.049,OR=0.463,95%CI:0.214-1.003),但经等位基因多项比较校正,差异消失(Pc=0.686).结论:昆明汉族儿童H pylori感染率较高.他们在HLADQAl位点上与无H pylori感染儿童存在免疫遗传学差异,HLA-DQAl*0103基因可能是H pylori感染的易感基因;而DQAl*0302基因则是否具有免疫抵抗作用,需要进一步研究.
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HLA-Ⅱ类基因与慢性乙型肝炎重型化的相关性
目的:探讨HLA-DRBl、-DQAl和-DQBl等位基因多态性与慢性乙型肝炎重型化之间的关系.方法:采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术对52例慢性乙型肝炎和32例性慢性重症乙型肝炎的HLA-DRBl、-DQAl和-DQBl等位基因多态性进行了分析.结果:HLA-DRBl*l 001在慢性重症乙型肝炎组的等位基因频率明显高于慢性乙型肝炎组(14.1%vs1.9%,x2=19.2 997,Pc=0.0281,RR=9.78).HLA-DQAl和HLA-DQBl等位基因频率在慢性重症乙型肝炎组和慢性乙型肝炎组间差异无显著性.结论:HLA-DRBl*l 001与慢性乙型肝炎的重型化有关,可能是一个对判断病情和预后有价值的实验指标.
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羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活基因1的克隆化研究
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)羧基末端截短型表面抗原中蛋白(MHBst)的反式激活作用,利用差异显示技术,筛选克隆MHBst蛋白的反式激活作用的靶基因,发现新型基因,为阐明MHBst对于肝细胞表达基因谱的影响,探索新的研究方向.方法:利用多聚酶链反应技术(PCR)扩增MHBst的编码基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-MHBst,转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,与仅转染空白载体pcDNA3.1的HepG2细胞进行差异显示,利用抑制性消减杂交技术(SSH)克隆鉴定MHBst的反式激活作用的靶基因,通过生物信息学技术,确定新基因的序列,设计序列特异性引物,利用HepG2细胞来源的mRNA进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,克隆新基因,并对于新基因的序列以及编码基因产物序列进行分析.利用生物信息学技术确定TTP1基因是新基因.结果:构建表达载体pcDNA3.1-MHBst,经过序列分析和酶切鉴定正确.转染HepG2细胞系,利用SSH技术获得差异表达的基因片段.经对于美国生物工程信息学中心(NCBI)建立的核苷酸序列的数据库(GenBank)检索,证实这是一个新型基因片段.通过对于同源基因序列的比对,根据Kozak规则和终止密码子下游的多聚腺苷酸信号序列,确定新基因的序列,将这种MHBst反式激活的新基因命名为TTP1,并在GenBank中注册登录.结论:克隆并鉴定了乙型肝炎病毒羧基末端截短型表面抗原中蛋白反式激活作用的新型靶基因TTP1,为今后研究MHBst的反式激活作用,开辟了新的研究方向和可能.
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HLA-DQA1基因与广西地区壮族2型糖尿病的关联性
HLA基因型是迄今为止所知复杂的遗传多态系统,1型糖尿病(T1DM)与HLA的关联研究已比较明确,而2型糖尿病(T2DM)与HLA的关联则观点不一.本研究应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,研究广西地区壮族T2DM与HLA-Ⅱ类抗原(DQA1)的关联性,旨在探讨T2DM的病因是否有民族、地域的差异,比较与T1DM的发病机制有何异同,并探讨其临床意义.
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人类白细胞抗原DRB1基因与肺结核的相关性研究
目的探讨HLA-DRB1基因多态性与肺结核(PTB)的遗传关联性及其与临床表现的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,对74例PTB患者及90名正常人的HLA-DRB1等位基因进行分型。结果与对照组相比,PTB病例组的DRB1*15等位基因频率显著增高 (34.3% 比17.0%,Pc<0.05,RR=2.91),HLA-DRB1*12基因频率高 (15.4%比7.5%),但统计学上无显著性差异(Pc>0.05);而DRB1*11基因频率显著低于对照组(1.4% 比9.9%,Pc<0.05,RR=0.12)。HLA-DRB1*15阳性患者中复治病例数和耐药病例数均显著高于HLA-DRB1*15阴性组(P<0.05)。结论 HLA-DRB1*15可能是PTB的易感基因,DRB1*11可能为保护基因,HLA-DRB1*15基因与PTB临床特征有一定相关性。
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γ-干扰素基因多态性与肺结核易感性的研究
γ-干扰素是参与结核病发病的一个细胞因子,在结核病的发病机制中起着重要作用.在γ-干扰素第1个内含子CA重复序列的5'末端有个T/A单核苷酸多态性(+874 T/A多态性),与微卫星等位基因2的出现和缺乏相关[1].我们利用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对肺结核病患者及对照人群γ-干扰素+874 T/A多态性进行检测,以探讨该基因多态性与肺结核易感性的关系.
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流式磁珠反向SSOP杂交法误判HLA基因型的原因分析(附4例报告)
目前对人类白细胞抗原的基因分型技术有多种,包括序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCRSSP),多聚酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probe,PCRSSOP)杂交法,基因芯片法和DNA直接测序法(sequence-based typing,SBT).基于Luminex的流式磁珠反向SSOP杂交法具有快速、高准确率、高通量、重复性好等优点,已广泛应用于骨髓库的大样本分型工作[1,2].我们使用流式磁珠反向SSOP法(One Lambda,美国)和DNA测序法(Atria,美国)法同时对临床1000例高分辨分型样本分型时,发现4例样本的SSOP分型结果与DNA测序结果不符,用另一种HLA高分辨试剂(Protrans,德国)对这4例样本进行验证,证明是SSOP误判,为分析误判原因,对本4例样本用相同批号的SSOP试剂进行复试,分析结果,报告如下.
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HLA-DR15等位基因在骨髓增生异常综合征临床发生及预后中的意义
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组起源于骨髓造血干/祖细胞的恶性克隆增殖性疾病,目前MDS的发病机制仍未完全清楚,研究结果显示T淋巴细胞-HLA-细胞因子免疫途径可能参与MDS一些亚型的发病[1-2].文献报道MDS患者外周血HLA-DR15表达较正常对照组增高,且表达HLADR15的难治性贫血(RA)患者对于免疫抑制剂如抗胸腺细胞球蛋白等治疗效果显著优于不表达者[3-6],提示HLADR15可能是免疫导致的骨髓衰竭的一个特异的易感因素.我们通过聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测MDS患者HLA-DR15等位基因的表达情况,并结合相关因素进行分析,旨在进一步探讨作为MHC-Ⅱ类分子的HLADR15在MDS病理生理学方面的意义.
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流式细胞术检测强直性脊柱炎患者白细胞HLA-B27抗原的表达及意义
HLA-B27的检测对于强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的诊断及其发病机制的研究具有重要意义,目前国内较为普及的检测HLA-B27的方法主要包括微量淋巴细胞毒法和多聚酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法.利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体结合细胞表面的B27抗原,然后采用流式细胞术检测HLA-B27的表达,近年国外已有报道[1,2].
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汉族人类白细胞抗原基因多态性调查
造血干细胞移植是治疗白血病、某些肿瘤、免疫系统疾病的有效方法.中国造血干细胞捐献者资料库(以下简称资料库)的建立,旨在缓解数百万计的病人等待移植救治的状况.本中心承担了河南省干细胞捐献者的人类白细胞抗原(HLA)分型检测工作,并按照"中国造血干细胞捐献者资料库,组织配型实验室规程"(以下简称规程)的要求,建立了符合规程要求的分子生物学实验室.采用PCR-SSP(序列特异性引物-聚合酶链反应)方法对已采集的近2 000份干细胞捐献者血样,进行HLA-A、B、DRB1基因分型.现将1 626份汉族人干细胞供者的分型结果总结报告如下.
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北方汉族人MBL EXON Ⅰ 52位基因频率调查
甘露糖结合凝集素(Mannan Binding Lectin,MBL)是一种由肝脏合成和分泌的急性时相蛋白,是Ca2+依赖性凝集素中胶凝素成员之一,可与甘露糖残基结合,参与细胞表面识别,广泛存在于人的肝脏和血液中,是天然免疫的重要组成部分,MBL基因多态性影响MBL水平,MBl的功能及基因结构和感染性疾病的关系近年来倍受关注[1,2].以往的群体研究已发现MBL存在3种结构基因的变异型D,B,C.其突变位点均位于外显子1,分别为52(CGT→TGT),54(GGC→GAC)及57(GGA→GAA)位密码子,并导致氨基酸的改变,影响了亚单位的空间结构和寡聚体的形成,从而形成无功能的蛋白.这样的蛋白大约95%被降解,所以具有变异型MBL的个体,其血清MBL水平低下,导致调理功能缺陷[3,4].本研究采用已建立MBL EXON Ⅰ 52位密码子突变检测的方法,即序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)[5],用该方法测定健康汉族人MBL基因EXON Ⅰ 52位密码子点突变的情况,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机制和MBL分子的结构-功能关系及MBL在临床中的治疗应用奠定基础.
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云南昆明彝族和汉族儿童HLA-DQB1等位基因的多态性研究
研究不同人群HLA的多态性,对于探讨相关疾病的致病机制及器官移植配型都有着重要的理论和应用意义[1,2].本文采用了聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)技术对云南昆明地区70名彝族和72名汉族健康儿童进行了HLA-DQB1基因分型,旨在探讨昆明彝族和汉族人群HLA-Ⅱ类基因频率分布特征,从而提供一些遗传学方面的数据.