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基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨
目的:探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性.方法:查阅国际上主要的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型诊断标准和现行技术,通过将基因芯片技术与目前用于HBV基因分型的技术方法进行对比,探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性.结果:HBV的基因分型,既可通过全基因序列比对,也可通过片段基因序列比对,片段基因序列比对是实际工作中HBV基因分型的主要方法,现有报道的技术主要为型特异引物(SSP)PCR扩增法和PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法.基因芯片技术具有高敏感、高通量和能够平行检测DNA类型等特点,技术类型属于PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法.尚未见有应用基因芯片技术进行HBV基因分型检测的报道.结论:借鉴现有的PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法,如微板核酸杂交-ELISA显色技术,理论上利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断的方法是完全可能的,并且具有高效、快速和廉价等特点.
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五种方法检测临床标本中结核分支杆菌的比较分析
迄今为止,对结核病的病原体快速诊断的方法仍很有限,国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR、PCR反向探针膜杂交法检测临床标本中的结核分支杆菌比较分析,报告如下。材料与方法 一、材料 标本来源:43例临床标本选自1999年1月至10月长治医学院附属和平医院传染科门诊及住院结核病患者。采集痰、脑脊液、胸腹水等标本于灭菌青霉素小瓶中送检。其中男20例,女23例。对照组16例为肝癌,肝硬化患者痰,腹水。
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500例慢性HBsAg携带者病毒复制状况调查
人血清HBsAg阳性,并不代表有HBV复制,慢性HBsAg携带者病毒复制状况如何,资料报道少见,我们以核酸标记探针、杂交法检测其血清HBV-DNA,以探讨HBsAg携带者血清病毒复制状况,现将结果报告如下.
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RT-PCR酶联杂交法定量测定人PBMC中的IL-1βmRNA
IL-1β是由淋巴细胞和非淋巴细胞分泌的一种细胞因子,除参与免疫调控、神经内分泌及抗肿瘤等多种生理过程外,并与发热、炎症以及某些疾病的病理变化有关,因而在临床及科研中,很多情况下需要了解IL-1β mRNA的表达水平[1].目前,主要采用点杂交、RT-PCR标准曲线法及实时荧光PCR等对IL-1β mRNA进行定量.这些方法,仍存在着某些不足,本研究利用特制的DNA结合板,设计了一种酶联夹心杂交方法,能简便、准确地对RT-PCR扩增后的人外周血单个核细胞(PBMC)中的IL-1β mRNA进行定量.
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乙型肝炎病毒基因定量聚合酶链反应的临床应用
乙型肝炎病毒(HBV)感染时,外周血中HBV DNA是反映病毒复制活动直接和可靠的标志,其含量直接代表患者病毒血症水平.近年来,随着聚合酶链反应(PCR)的不断发展,在HBV DNA定性检测基础上建立了定量检测方法,灵敏度和特异性不断提高,在研究病毒感染量与临床病情的关系,进一步评价HBV感染的自然史和HBV血清标志物的临床意义及鉴定抗病毒药物疗效等方面具有重要意义.我们采用PCR-微孔板酶联杂交法定量检测102例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,以探讨病毒复制水平与血清标志物表现模式之间的关系,以期为广大乙肝患者的诊治及预测临床转归提供参考.
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补肾解毒汤联合干扰素治疗慢性乙型肝炎25例分析
干扰素是目前公认有效的治疗乙型肝炎药物,但是荟萃分析表明,经干扰素治疗慢性乙型肝炎4~6个月后,HBVDNA(杂交法)及HBeAg的转阴率分别为37%及33%[1],其疗效仍不尽如人意.
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逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法半定量检测人白细胞介素-6 mRNA
白细胞介素-6(Ⅱ-6) mRNA的表达高低,与临床疾病有极为密切的关系.
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杂交法快速检测单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌(李氏菌)广泛存在于土壤、人和动物的粪便中,很容易污染食品,引起食物中毒,以致李氏菌病暴发.该菌用经典法检验周期长,需5~14 d才能出结果.我们建立了用PCR-Southern杂交技术快速检测食品中李氏菌的方法.该法简便快速、特异性好、灵敏度高,具有较高的实用和推广价值.一、材料与方法
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荧光原位杂交技术在产前诊断及遗传咨询中的应用
荧光原位杂交(FISH)是近年发展起来的一种分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的全新技术,其在基础生物学领域和临床研究中得到广泛应用.FISH作为一种非放射原性杂交法,它利用特殊的荧光素标记DNA探针,与DNA进行杂交,经免疫荧光显色,可检测细胞内DNA或RNA的存在与否,这既可显示染色体中期分裂相,又能显示未培养的间期核.
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β2肾上腺素受体遗传多态性与血清总IgE关系的研究
人类β2肾上腺素受体(β2AR)基因位于染色体5q31[1,2].目前已检测出该基因编码区存在着9个突变位点(遗传多态性)[3],其中4个可导致氨基酸序列改变,16位点的精氨酸(Arg)突变为甘氨酸(Gly),27位点的谷胺酰胺(Gln)突变为谷氨酸(Glu)的频率较高.国外学者已发现,Gln27型β2AR与血清总IgE增高相关[4 ].我们以聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交法(PCR-ASO)对59例哮喘患者的β2AR 16和27位点遗传多态性进行检测,并测定其血清总IgE,以探讨我国汉族哮喘人群β2AR遗传多态性与血清总IgE关系.
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探针杂交法快速检测耐甲氧西林葡萄球菌
葡萄球菌获得甲氧西林耐药性主要是由于产生了一种与β内酰胺类抗生素亲和力低的青霉素结合蛋白PBP2a,mecA基因是编码PBP2a的结构基因,可作为甲氧西林耐药的一个分子标志.编码耐热核酸酶的nuc基因是金黄色葡萄球菌(金葡菌,SA)的特异基因,通过检测nuc基因,可以诊断SA感染.
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培养法与多聚酶链反应杂交法检测结核分枝杆菌的临床应用
结核病是我国5大主要流行病之一,严重影响人类健康.据世界卫生组织(WHO)报道,西大洋地区每天有1000人死于结核病,其中仅中国就有700人.快速、准确地检测出结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,TB)对于患者的及时诊治至关重要.
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分期杂交法治疗复杂性主动脉夹层
临床上不少Stanford B型夹层(aortic dissection,AD)患者有多处破口,目前对远端破口如何处理尚无定论.我院收治1例其中1处破口位于腹腔干起始处附近,引起的夹层出现动脉瘤样改变,远端破口具有腔内修复的指征.
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HLA-DQBI等位基因与妊娠肝内胆汁淤积症的相关性研究
妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是常见的妊娠并发症,该病常致早产及死胎,围产儿死亡率远高于正常妊娠.本病病因至今未明,流行病学证实本病具有明显复发性及家族性[1].近来有资料表明妊娠后母胎免疫失调可能与本病密切相关[2].出于ICP遗传背景考虑及人白细胞抗原(human leucocyte antigen, HLA)及基因型与自身免疫性疾病的密切关联,本研究从免疫遗传学角度采用聚合酶链反应序列寡核苷酸(PCR-SSO)探针杂交法对江苏籍汉族ICP患者HLA-DQBI等位基因多态性进行了探讨.
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实验性脾虚大鼠胃肠电-机械活动协同调节相关的nNOS和VIP研究
借助Western Blot杂交法和免疫组化等先进的生物化学技术,重点观察了nNOS和VIP在脾虚大鼠胃窦和结肠组织内的变化,并对"四君子汤"改善胃肠功能的可能机制进行了初步探讨,以期为研究脾虚证的实质以及临床诊断和用药提供新的实验和理论依据.结果:脾虚大鼠nNOS含量升高(P<0.05),肌间丛nNOS阳性神经元数目也增多,经四君子汤治疗后回降.脾虚大鼠VIP含量减少(P<0.05),经四君子汤治疗后回升.
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流式磁珠反向SSOP杂交法误判HLA基因型的原因分析(附4例报告)
目前对人类白细胞抗原的基因分型技术有多种,包括序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCRSSP),多聚酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probe,PCRSSOP)杂交法,基因芯片法和DNA直接测序法(sequence-based typing,SBT).基于Luminex的流式磁珠反向SSOP杂交法具有快速、高准确率、高通量、重复性好等优点,已广泛应用于骨髓库的大样本分型工作[1,2].我们使用流式磁珠反向SSOP法(One Lambda,美国)和DNA测序法(Atria,美国)法同时对临床1000例高分辨分型样本分型时,发现4例样本的SSOP分型结果与DNA测序结果不符,用另一种HLA高分辨试剂(Protrans,德国)对这4例样本进行验证,证明是SSOP误判,为分析误判原因,对本4例样本用相同批号的SSOP试剂进行复试,分析结果,报告如下.
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HBeAg阴性的慢性乙型肝炎的病程与治疗
一般认为HBV感染后,血清HBeAg阳性提示病毒复制活跃,传染性强,而HBeAg转换为抗Hbe后则与之相反,但是实验研究发现:在抗Hbe阳性的患者中,若采用高灵敏的巢式PCR方法或PCR方法结合Southem印迹杂交法仍然可检出HBV-DNA70%~90%阳性结果[1,2],提示抗Hbe阳性的患者中存在HBV-DNA的复制.随着对乙型肝炎基因变异研究的深入,发现这是由于乙型肝炎病毒前C区变异导致的.
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因定量诊断技术评价及其临床应用
基因定量诊断技术已被广泛应用于临床,如判断病情和预后、药物疗效评价和预测等.基因定量诊断技术包括杂交法和PCR法两大类.杂交法以其准确度高,重复性好而得到认同;PCR高度敏感,但受技术影响因素较多,需引入内参照技术,才可保证结果的准确度,且应向自动化方向发展.
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β2肾上腺素受体遗传多态性与夜间哮喘的相关性研究
人类β2肾上腺素受体(β2AR)基因位于染色体5q31.目前已检测出该基因编码区存在着9个突变位点(遗传多态性),其中4 个可导致氨基酸序列的改变,从而使编码的第46、79、100、491位氨基酸分别发生Arg16→Gly、Gln27→Glu、Val34→Met、Thr164→Ile的改变[1].夜间哮喘是哮喘的一种特殊类型,其夜间症状及气道阻塞加重,对其发生机制尚不清楚.但已了解到夜间哮喘其夜间β2AR下调,而非夜间哮喘者患者和正常人无此下调[2].而在定位诱变和重组表达研究中已发现,β2AR16位点上的Arg突变为Gly具有增强激动剂所促发的受体下调作用[3].于是人们推测:Gly16与夜间哮喘的β2AR下调可能有关.为了探讨这一问题,本研究利用聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交法(PCR-ASO),从分子水平对夜间哮喘和非夜间哮喘的β2AR16和27位的遗传多态性进行分析,并探讨这一多态性与夜间哮喘的关系.
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054 用比较基因组杂交法对胚胎胎儿发育异常者进行滋养层细胞遗传学分析