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乌鲁木齐市230名体检儿童中输血传播病毒感染的检测
为了解儿童中输血传播病毒(TTV)的感染情况,我们采用巢式PCR技术对新疆自治区乌鲁木齐市230名体检儿童进行了TTV-DNA检测.
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北京郊区161例急性散发性病毒性肝炎患者病原学和流行病学调查
为探讨北京郊区急性散发性病毒性肝炎的分型构成及危险因素,2000年选择房山区第一、二人民医院和大兴县人民医院诊断为急性病毒性肝炎的161例患者进行血清流行病学调查.于诊断后2日内取血,常规分离血清,-20℃封存,同时进行流行病学调查.ELISA法检测抗-HAV IgM、HBsAg、抗-HBc IgM、抗-HCV及抗-HEV IgG.ELISA法未能分型者用巢式聚合酶链反应检测HBV DNA和HCVRNA [1,2].
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不同人群单纯疱疹病毒感染状况分析
单纯疱疹病毒(HSV)是双链DNA病毒,典型HSV可分为HSV-1型和HSV-2型[1].HSV-1与大多数非生殖器感染有关,HSV-2几乎都是性接触感染[2].本研究应用巢式PCR方法,检测各人群中HSV的感染情况.
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原位杂交和巢式PCR辅诊成人传染性单核细胞增多症
传染性单核细胞增多症由Epstein-Barr(EB)病毒感染所致.在欧美,该病多发生于青壮年;在我国则多见于儿童,鲜见于成人,且成人症状常不典型[1,2].近,我们采用原位杂交、巢式PCR和免疫组化法,辅助确诊1例成人传染性单核细胞增多症,现报告如下.
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TT病毒的基因变异分析与基因分型
我们对80例非甲~非庚型肝炎患者、血清ALT升高以及长期维持性血透患者(部分患者有输血史)进行检测,对二十余例 TTV分离株进行测序研究,结果如下: 提取患者血清DNA,巢式PCR扩增TTV。参照Okamoto等报道的N22分离株 TTV基因序列设计套式引物:n 5'-ACA GAC AGA GGA GAA GGC AAC- 3'(1892 ~ 1913),T2 5' - GGA TAC CTA TTAGCT C TC AT- 3'(2187 - 2207), T3 5' -GGC AAC ATG TTA TGG ATA GAC- 3'(1914- 1935) ,T4 5' - CCT C GC ATT TTACCA T TT CCA - 3'(2165 - 2186)。
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沙眼衣原体检测及分型的方法学比较研究
对COBAS AMPLICOR系统、多重PCR和巢式PCR扩增沙眼衣原体(CT)质粒和/或外膜蛋白(omp1)VD2基因,并以反向线点杂交技术(Reverse line blot hybridization assay,RLB)进行CT血清学分型对CT检测方法进行了比较.
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HBV感染的外周血单个核细胞在母婴传播中的载体作用
目的:探讨HBV感染的外周血单个核细胞(PBMC)在母婴传播中的载体作用.方法:选择血清HBV DNA(-)、PBMC HBV DNA(+)孕妇分娩新生儿25例作为实验组,乙肝标志物均为阴性孕妇分娩新生儿10例作为对照.采用巢式PCR检测2组新生儿血清及PBMC HBV DNA;ELISA检测血清HBsAg;SP法检测PBMC中HBsAg.结果:实验组血清HBsAg均阴性,HBV DNA(+)4例;PBMC HBsAg(+)6例,HBV DNA(+)6例,其中有2例血清和PBMCHBV DNA均为阳性,4例仅PBMCHBV DNA(+),2例仅血清HBV DNA(+).对照组血清及PBMCHBV DNA和HBsAg均阴性.结论:HBV感染的外周血单个核细胞可作为母婴传播的载体.
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聚合酶链反应检测SEN病毒D型和H型方法的建立及初步应用
目的:建立检测SEN病毒(SENV)D和H基因型的聚合酶链反应(PCR)方法,并将其应用到流行调查.方法:从GeneBank下载SENV序列,在SENV开放读码框Ⅰ的高度保守序列内自行设计外引物,参考文献报道合成SENV D型和H型的型特异性引物作为内引物,建立检测SENV D型和H型的巢式PCR方法,并对深圳地区192名健康体检人群、48例急性甲肝患者、1 76例慢性乙肝患者、98例慢性丙肝患者和38例非甲-戊型肝炎患者的血清进行检测.部分阳性PCR产物进行克隆和DNA序列分析.结果:巢式PCR方法的敏感性及特异性均好.SENV D和/或H型在健康成人、急性甲肝、慢性乙肝、慢性丙肝和非甲-戊型肝炎患者中的总感染率分别为30.7%、37.5%、64.8%、57.1%和44.7%.SENV D和/或H型在健康人群中的感染率低于慢性乙肝患者和慢性丙肝患者(P<0.001).非甲-戊型肝炎及急性甲肝患者中的感染率略高于健康人群,但无显著性差异(P>0.05).结论:巢式PCR方法可用于检测SENV感染.深圳地区健康人群和急、慢性肝炎患者中存在SENV感染.SENV可能与HBV和HCV有相似的传播途径,其致病性有待进一步研究阐明.
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多引物对巢式PCR法检测HBV基因型的流行病学分析
目的:掌握我国北方地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况,为了解其流行病学及临床意义提供基础.方法:首先采用巢式PCR法对801份血清进行HBV DNA检测,其中包括154份健康人血清、594份HBV感染的各类肝病患者及53例抗HCV阳性血清标本.再采用HBV A-F六个主要基因型特异性多引物对巢式PCR法对HBV DNA进行基因型检测及分析.结果:在801例血清标本中有464例(57.9%)检测到HBVDNA,其中154名健康人血清阳性率为8.4%(13/154),594例不同临床表现的乙肝患者血清HBV DNA总检出率为74.4%(442/594),二者相比差异显著(P<0.01);抗HCV阳性血清中检出HBV DNA占17%(9/53).464例HBV DNA阳性标本中,HBV基因型检出率分别是:A型为5.2%(24/464),B型为7.1%(33/464),C型为77.2%(358/464),D型2.4%(11/464),未检出E和F型,但尚有14例(3%)同时检出B型和C型,有24例未检出型别.急性肝炎、慢性生肝炎、肝硬化、原发肝癌各不同临床表现组间基因型分布无统计学差异.结论:结果看出,我国北方地区感染的HBV基因型存在A、B、C、D四个型别,其中C型为主(77.2%),各临床表现组基因型分布也均以C型为主,组间无统计学差异.
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临床诊断为"非甲~戊型肝炎"患者血清乙型肝炎病毒 DNA测定
为了解目前临床诊断为"非甲~戊型肝炎"病人中HBV感染所占的比例,本研究应用巢式PCR法(nPCR),对北京地坛医院60例临床诊断为"非甲~戊型肝炎"患者进行了HBV DNA测定.现将结果报告如下.
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前列腺癌患者外周血中前列腺特异性膜抗原mRNA的表达
采用巢式RT-PCR方法检测33例前列腺癌(PCa)患者外周血中前列腺特异性膜抗原(PSM) mRNA的表达,报告如下.材料与方法 43例患者分2组:(1)PCa组:33例,其中B期9例,C期20例,D期4例,均经前列腺穿刺病理证实.21例接受过黄体生成素释放激素类似物(LHRH)治疗.(2)良性前列腺增生(BPH)组:10例,经TURP术后病理证实.取患者静脉血5 ml,Ficoll分离白细胞,提取RNA,逆转录cDNA,巢式PCR扩增,扩增产物用凝胶电泳观察,测序鉴定PCR结果.统计学方法采用χ2检验,χ2=35.85.
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结肠癌组织中XAGE-1基因的表达及其临床意义
XAGE-1是一种在多种肿瘤组织中表达的癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CT抗原)[1],为了了解该抗原在结肠癌中的表达,我们采用巢式PCR方法检测了XAGE-1的4种不同剪接体基因在结肠癌组织中的表达情况,并分析XAGE-1b基因表达与结肠癌患者临床特点的关系,为结肠癌的肿瘤免疫治疗提供理论依据。
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大肠癌患者外周血及引流静脉血中癌胚抗原mRNA的表达
我们采用了巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察大肠癌患者外周血及引流静脉血中癌胚抗原(CEA) mRNA表达与临床病理特征之间的关系,结果如下.
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乳腺癌前哨淋巴结定位及其微转移检测的研究
许多研究表明,约9%~30%淋巴结存在常规病理检查无法检测到的微转移灶[1].本研究采用术中美蓝注射定位前哨淋巴结(sentinel lymph node, SLN),并用巢式RT-PCR法检测淋巴结中mammaglobin mRNA的表达,探讨这两种技术联合使用在乳腺癌淋巴结微转移诊断、预后判断及术式选择中的临床应用价值.
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巢式髓腔内输注脐血治疗重症再障的护理
重症再生障碍性贫血(SAA)为多种原因引起的骨髓造血功能致全血细胞极度减少的一组临床综合症,确诊后病死率高达80~90%,多数患者死于严重的感染、出血.造血干细胞移植和免疫抑制剂的应用是目前治疗SAA的两种主要方法.我院自1996年开始在常规治疗的情况下,选择佳时期实施巢式髓腔内输注新鲜脐血治疗SAA 46例,取得了满意疗效,通过脐血输注前后的观察和护理,减少了并发症的发生,现报告如下:
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HBeAg阴性的慢性乙型肝炎的病程与治疗
一般认为HBV感染后,血清HBeAg阳性提示病毒复制活跃,传染性强,而HBeAg转换为抗Hbe后则与之相反,但是实验研究发现:在抗Hbe阳性的患者中,若采用高灵敏的巢式PCR方法或PCR方法结合Southem印迹杂交法仍然可检出HBV-DNA70%~90%阳性结果[1,2],提示抗Hbe阳性的患者中存在HBV-DNA的复制.随着对乙型肝炎基因变异研究的深入,发现这是由于乙型肝炎病毒前C区变异导致的.
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HHV8病毒和多发性骨髓瘤发病的关系
发性骨髓瘤(MM)发病原因一直不很清楚.1997年Rettig等[1]和Said等[2]用聚合酶链反应(PCR)和原位杂交(ISH)的方法,在MM患者长期培养的树突状细胞(DC)及骨髓活检标本中检出了HHV8病毒 DNA片段,尔后各家报道的结果很不一致.我们用以筑巢式PCR为主的方法检测MM患者骨髓活检、骨髓穿刺和周围血标本,了解HHV8病毒的存在情况,观察HHV8病毒感染与MM临床表现之间的关系.材料和方法1 病例和细胞系选择35例临床确诊的MM患者,并以我院1999年2~6月收治的5例其他血液病患者[2例骨髓增生
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006 应用巢式PCR检测孕妇血浆及尿液中Y染色体特异DNA
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巢式RT-PCR定性检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFP mRNA表达
原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,每年有20余万患者死于此病.血清AFP在大多数肝癌患者均有不同程度的升高,AFP是一种胚胎性蛋白质(72Kd的1球蛋白),其生物学功能目前尚不明确.在胚胎期,胎儿的肝脏,卵黄囊及胃肠道系统均可合成AFP.AFP在胎儿出生12周后迅速降至正常范围以内(20μg/L,放免法测定).肝癌细胞再次合成AFP可能是由于某些致病因素引起AFP基因转录增加或翻译修饰水平的提高所致.本研究拟应用巢式RT-PCR定性检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFP mRNA的表达情况.现报告如下.
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血液透析患者输血传播病毒感染状况及护理对策
为了解新疆地区血液透析(HD)患者TTV感染状况,我们应用巢式PCR方法检测了20例HD患者血清TTV DNA,现结合检测结果和临床实践讨论护理对策.