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99Tcm标记抗PSMA单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布
目的 研究99Tcm-抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体(J591)对前列腺癌细胞体外结合性能、在荷人前列腺癌裸鼠体内生物分布.方法 用改进的Schwarz方法进行99Tcm标记,经Sephadex G-50柱分离纯化；用纸层析法和三氯醋酸法测定标记率与放化纯；用流式细胞术测定抗体与肿瘤细胞在体外的结合性能；PSMA阳性的C4-2前列腺癌裸鼠为实验组,PSMA阴性的PC3前列腺癌裸鼠为对照组,裸鼠静脉注射7.5 MBq(25μg/只)99Tcm-J591,分别于2、6、12及24h测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(％ ID/g)及T/NT比值.结果 表明99Tcm - J591标记率为(78.9±6.2)％,放化纯＞90％.J591与99Tcm - J591在体外能结合PSMA阳性的C4-2细胞,与PSMA阴性的PC3细胞不结合,显示出J591具有良好的特异性.生物分布实验显示:实验组裸鼠肿瘤部位出现99Tcm浓聚,对照组则没有.肿瘤组织百分注射剂量率(％ ID/g)在12h达高峰,为(15.91±5.16)％ID/g,与对照组(3.22±1.33)％ID/g相比差异有统计学意义(P＜0.05),其余组织和器官的百分注射剂量率在两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 J591具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位性能,可望用于前列腺癌的导向诊断及导向治疗.
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前列腺特异性膜抗原为靶标治疗激素难治性前列腺癌的研究进展
激素难治性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer,HRPC)是近年来前列癌预后差的主要原因,而前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)因在HRPC高特异性表达,而在其它良性病变组织如炎性病变和正常脏器组织等低水平表达或不表达而备受关注,成为HRPC靶向治疗的主要靶标,现将以PSMA为靶标的免疫治疗、基因治疗和内放射靶向治疗方面的研究和进展进行综述.
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前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测
目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.
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携载PSMA单抗靶向前列腺癌的纳米级脂质微泡的制备及体外寻靶能力
目的 制备携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡,并观察其体外寻靶能力.方法 利用静电吸附法制备携载PSMA单抗靶向前列腺癌的脂质纳米级微泡,检测其一般特性；免疫荧光法检测抗体与纳米级微泡的结合情况；用细胞免疫荧光分析鉴定PSMA的表达及其在细胞膜上的定位；普通光镜下观察靶向微泡对前列腺癌细胞的寻靶能力,同时以胃癌细胞作对照.结果 携载PSMA单抗的靶向纳米级微泡分布均匀,平均粒径为(623.70±66.05)nm,免疫荧光法显示微泡表面可见绿色荧光,细胞免疫荧光检测前列腺癌细胞膜高表达PSMA,体外寻靶实验显示该靶向微泡可与人前列腺癌LNCAP及C4-2细胞牢固结合,而与胃癌MKN45细胞不结合.结论 本实验成功制备的携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡具有较强的体外寻靶能力,能特异性地与前列腺癌细胞结合.
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前列腺特异性膜抗原的研究进展(文献综述)
前列腺特异性膜抗原(PSMA)比前列腺特异性抗原(PSA)和前列腺酸性磷酸酶(PAP)更具有优越性.通过对前列腺组织的免疫组化实验发现:PSMA的含量与前列腺腺上皮细胞的恶变程度相关,且PSMA在前列腺组织中具有较高的特异性,可用于早期诊断前列腺癌及其转移癌.近,PSMA更作为免疫因子的一部分,参与前列腺癌的免疫治疗.
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前列腺癌噬菌体抗体库的构建及抗特异性膜抗原抗体的筛选
目的 建立国人前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库,筛选、鉴定抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)的人源Fab抗体可变区的编码基因,为前列腺癌的诊断与基因治疗研究开辟新途径.方法 20例前列腺癌患者外周血分离淋巴细胞,提取其总RNA,经RT-PCR及半套式扩增得到免疫球蛋白全部轻链和重链Fd段基因,克隆进载体pComb3,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库.采用噬菌体表面展示技术,以PSMA原核表达重组子pET30a(+)-PSMA诱导表达并纯化后的PSMA为固相抗原,从噬菌体Fab抗体库中经过"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的PSMA人源Fab可变区抗体基因片段的阳性克隆,并进行免疫检测及序列测定.结果 成功构建前列腺癌噬菌体抗体Fab片段库,其轻链及重链Fd段与载体DNA的重组率分别为87%、79%,库容为2.32×107,滴度为8.7×1013 pfu/ml.筛选得到Fab抗体克隆的Fd段基因核苷酸序列为696 bp,编码由232个氨基酸残基组成的多肽,与人免疫球蛋白γ链恒定区的同源性为98%;轻链κ基因核苷酸序列为630 bp,编码由210个氨基酸残基组成的多肽,与κ链恒定区同源性为93%.结论 成功构建了前列腺癌噬菌体抗体库,并获得了PSMA人Fab抗体可变区编码基因克隆,该克隆抗体基因具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有与PSMA反应的免疫学活性和特异性.
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前列腺特异性膜抗原表达的临床意义
目的探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及与肿瘤病理分级之间的关系.方法采用免疫组化ABC法,用PSMA单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行染色.其中PCa 70例,前列腺上皮肉瘤21例,良性前列腺增生20例,其他肿瘤组织标本30例.结果PSMA在97%前列腺癌、100%前列腺上皮内瘤、80%BPH组织中呈不同程度的阳性表达,且在PCa组织中呈明显高表达,非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性.组织PSMA表达与PCa组织学分级之间存在负相关性.结论 PSMA具有良好的组织器官特异性,能够判断PCa预后,在PCa的免疫治疗方面具有应用前景.
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人前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆、原核表达、鉴定和抗原初步纯化
目的克隆中国人前列腺特异性膜抗原(PSMA)cDNA全长,构建PSMA原核表达重组子.诱导PSMA原核表达,并对表达产物进行初步纯化.方法从前列腺癌患者组织中提取总RNA,利用PSMA cDNA中的EcoR Ⅰ位点,将PSMA分为两段分别作RT-PCR,分别连接到pET-30a中,从而得到完整PSMA cDNA的原核表达重组子pET-30a-PSMA,并进行酶切鉴定与序列测定.确定序列正确后,利用IPTG诱导重组子表达,采用Ni-NTA Agarose螯合层析柱对表达产物初步纯化,SDSPAGE和Western-Blotting对表达产物和纯化产物进行鉴定.结果成功克隆到序列完全正确的人源PSMA cDNA,诱导表达并初步纯化出PSMA蛋白,该蛋白具有较好的抗原性和特异性.结论此项研究为PSMA功能的研究及前列腺癌噬菌体抗体库的筛选提供了实验依据.
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68Ga-PSMA-617PET/CT与多参数MRI对初诊前列腺癌诊断价值的比较
目的 比较68Ga-PSMA-617 PET/CT与多参数MRI检查对初诊前列腺癌原发灶的诊断效能,分析68Ga-PSMA-617 PET/CT检查前列腺癌大标准镊取值(SUVmax)与临床参数的相关性.方法 回顾性分析2017年6月至2018年4月我院104例同期接受68Ga-PSMA-617 PET/CT和多参数MRI检查的初诊疑似前列腺癌患者的临床资料.年龄(70.4±8.9)岁(42 ～89)岁.血清总PSA值为4.10 ～5 228.00 ng/ml,中位值为18.44(8.71,48.01) ng/ml.患者均接受经直肠前列腺穿刺活检术,根据病理结果分析68Ga-PSMA-617 PET/CT和多参数MRI诊断前列腺癌的敏感性、特异性,以SUVmax值绘制ROC曲线,分析前列腺癌SUVmax值与PSA值、Gleason评分等临床参数的关系.结果 104例中病理诊断前列腺癌68例,良性前列腺增生36例.68Ga-PSMA-617 PET/CT检查诊断前列腺癌的敏感性为95.59％ (65/68),特异性为88.89％ (32/36);多参数MRI检查的敏感性为91.18％ (62/68),特异性为63.89％(23/36).两种检查的特异性差异有统计学意义(P =0.012).绘制68Ga-PSMA-617 PET/CT检查的ROC曲线,曲线下面积为0.954.104例中,36例良性前列腺增生组织SUVmax中位值为3.20(2.83,3.70),68例前列腺癌组织SUVmax中位值为12.21 (7.48,17.46),二者差异有统计学意义(P＜0.01).68例前列腺癌中,不同Gleason评分(P＜0.01)、国际泌尿病理协会(ISUP)分级分组(P＜0.01)及危险因素等级(P=0.021)的前列腺癌组织SUVmax值的差异均有统计学意义,且SUVmax值与Gleason评分、ISUP分级分组呈正相关性(r1=0.742,P＜0.01;r2=0.754,P＜0.01).结论 68Ga-PSMA-617 PET/CT检查较多参数MRI对于前列腺癌有更高的诊断效能,SUVmax值越高,提示肿瘤的分级及危险因素等级越高.68Ga-PSMA-617 PET/CT检查对肿瘤的定位诊断、恶性程度分析以及预后判断均有重要的参考价值.
关键词： 前列腺肿瘤 前列腺特异性膜抗原 核磁共振成像 正电子发射断层显像术 同位素标记 -
前列腺癌患者外周血中前列腺特异性膜抗原mRNA的表达
采用巢式RT-PCR方法检测33例前列腺癌(PCa)患者外周血中前列腺特异性膜抗原(PSM) mRNA的表达,报告如下.材料与方法 43例患者分2组:(1)PCa组:33例,其中B期9例,C期20例,D期4例,均经前列腺穿刺病理证实.21例接受过黄体生成素释放激素类似物(LHRH)治疗.(2)良性前列腺增生(BPH)组:10例,经TURP术后病理证实.取患者静脉血5 ml,Ficoll分离白细胞,提取RNA,逆转录cDNA,巢式PCR扩增,扩增产物用凝胶电泳观察,测序鉴定PCR结果.统计学方法采用χ2检验,χ2=35.85.
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68Ga-PSMA-617PET/CT与99Tcm-MDP骨扫描诊断前列腺癌骨转移的比较
目的 比较68 Ga-PSMA-617PET/CT与99Tcm-MDP骨扫描诊断前列腺癌患者骨转移的差异.方法 回顾性分析2017年6月至2018年2月我院73例接受68Ga-PSMA-617 PET/CT检查和99 Tcm-MDP骨扫描检查的初诊前列腺癌患者的临床资料.年龄40～88岁,平均69.1岁;PSA值5.62～1 260.00 ng/ml,平均144.59 ng/ml;Gleason评分6～ 10分,平均8分.根据检查结果将患者分为有骨转移和无骨转移两组,分别统计两种方法诊断的骨转移阳性例数和阴性例数,计算敏感性、特异性.绘制受试者工作特征曲线,并计算曲线下面积(AUG),比较两种方法的诊断效率.对骨转移患者采用配对样本Wilcoxon秩和检验比较68Ga-PSMA-617 PET/CT与99Tcm-MDP骨扫描检测转移灶数量的差异.结果 73例中临床诊断骨转移32例,无骨转移41例.68 Ga-PSMA-617PET/CT检查发现骨转移32例,99Tcm-MDP骨扫描诊断骨转移31例.两者的敏感性分别为100.0％ (32/32,95％ CI89.1％～ 100.0％)和90.6％(29/32,95％ CI 75.0％～98.0％),特异性分别为100.0％ (41/41,95％ CI91.4％～100.0％)和95.1％ (39/41,95％ CI 83.5％ ～ 99.4％),AUC值分别为1.000(95％ CI0.951～1.000)和0.929 (95％ CI0.844～0.976),两者AUC值差异有统计学意义(P =0.034).68Ga-PSMA-617PET/CT和99Tcm-MDP骨扫检出骨转移灶数量为1、2、3、4、5、＞5个的例数分别为5、2、4、3、1、17例和6、4、3、4、0、12例,差异有统计学意义(Z=-2.949,P=0.003).结论 68Ga-PSMA-617 PET/CT较99Tcm-MDP骨扫描能更准确地发现更多的转移灶,是前列腺癌患者影像检查评估方法的重要补充,可在前列腺癌的分子显像和治疗中发挥重要的作用.
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前列腺特异膜抗原对前列腺疾病的临床诊断意义
目的 评价血清中前列腺特异膜抗原(PSMA)浓度对前列腺疾病的辅助诊断意义.方法 采用Western印迹分析检测患者血清中PSMA的浓度,前列腺特异抗原(PSA)检测采用通用的免疫化学发光法检测.分析二者在不同分组中的浓度差异及相关性.结果 前列腺癌患者的血清中PSMA浓度显著高于正常人群,良性前列腺增生和前列腺炎的患者则低于正常人群,而PSA浓度无论是前列腺癌还是前列腺良性病变均高于正常人.结论 前列腺特异膜抗原浓度可以作为区分前列腺癌和良性前列腺增生的辅助诊断标志物.
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前列腺特异性膜抗原在前列腺癌患者外周血和组织中的表达及意义
目的 探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA) 在前列腺癌患者(PCa)外周血和组织中的表达及其与肿瘤病理分级和临床分期之间的关系.方法采用RT-PCR 方法检测前列腺特异性膜抗原(PSMA) 在前列腺癌和良性增生患者外周血清中的表达;采用免疫组化法观察PSMA在前列腺不同病变组织中的表达.前列腺癌28 例, 前列腺上皮内瘤(PIN)7例,良性前列腺增生(BPH)30例.结果血清学检测显示PSMA mRNA在前列腺癌和良性病变组(包括PIN和BPH)患者外周血中阳性率分别为67.9%和8.1%,两者差异具有显著性(P<0.01).在局限性癌、局部进展性癌和远处转移癌患者外周血肿瘤细胞中,PSMA mRNA的阳性率分别为58.3%、66.7%和85.7%,随前列腺癌临床分期的进展而逐渐递增(P<0.05).在高分化、中分化和低分化前列腺癌中,PSMA mRNA的阳性率分别为87.5%、62.5%和50%,肿瘤分化越差,其阳性率越低(P<0.05).组织学检测显示PSMA 在PCa、PIN 、BPH三种不同前列腺病变组织中的阳性率分别为60.7%、28.6%和20.0%(P<0.05),在高、中、低分化前列腺癌组织中PSMA的阳性率分别为100.0%、50.0%和25.0%,与肿瘤Gleason 评分之间呈负相关(P<0.05).在局限性癌、局部进展性癌和远处转移癌患者肿瘤组织中,PSMA的阳性率分别为58.3%(7/12)、77.8%(7/9)和42.9%(3/7) (P0.05).结论 PSMA在前列腺癌组织中明显高表达,并且表达量与前列腺癌临床分期和分化程度(组织学分级)密切相关;检测PSMA可能对前列腺癌诊断、治疗方案的选择及预后评估具有重要价值.
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前列腺特异性膜抗原和前列腺特异性抗原表达强度与前列腺癌Gleason评分之间的相关性研究
目的研究前列腺特异性膜抗原(PSMA)和前列腺特异性抗原(PSA)的表达强度与前列腺癌Gleason评分之间的相关性.方法制备抗PSMA膜外段表位的单克隆抗体,应用免疫组织化学方法检测前列腺癌中PSMA的表达,统计分析其与Gleason评分之间的相关性,并和PSA与Gleason评分之间的相关性进行对比.结果制备出8株分泌抗PSMA膜外段表位的单抗的杂交瘤细胞株.免疫组化结果表明,PSMA 的表达强度与前列腺癌的Gleason评分之间存在相关性.在分化差的前列腺癌中,PSMA水平高于分化中等和分化良好的前列腺癌(P<0.01),而PSA在前列腺癌中的表达无明显差异(P>0.05).结论 PSMA表达水平在分化差的前列腺癌中明显升高,与Gleason评分存在相关性,可以作为前列腺癌的Gleason分级的标记物,提示PSMA可以作为对激素疗法效果不敏感的低分化前列腺癌抗体介导的免疫治疗靶点.
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前列腺特异性抗原人类激肽释放酶2和前列腺特异的膜抗原在前列腺癌患者外周血表达的临床意义
目的探讨检测前列腺癌微转移的灵敏和特异性指标.方法从51例前列腺癌、33例前列腺增生(BPH)患者及32名正常人的外周血中分离单个核细胞,用巢式RT-PCR方法检测其中前列腺上皮细胞前列腺特异性抗原(PSA)、人类激肽释放酶2(hK2)和前列腺特异的膜抗原(PSMA)的表达.结果 PSA、hK2和PSMA在前列腺癌患者外周血中检出的阳性率分别为52.9%、43.1%和64.7%;正常人和BPH患者假阳性率分别为6.2%、7.7%和4.6%,3项指标差异均有显著性(P<0.01).各临床分期(局限癌、侵袭性癌和转移癌)间,PSA和hK2的阳性检出率差异无显著性;PSMA在各期前列腺癌中阳性检出率均较PSA和hK2高,且随临床分期进展,其阳性检出率亦增加(P<0.05).结论 PSMA对前列腺癌诊断、治疗方案的选择及预后评估较PSA和hK2有更大的价值.
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Tf-PEG-PEI载细胞特异性干扰质粒靶向沉默前列腺癌核干因子的体外实验研究
目的 探讨非病毒基因转移载体转铁蛋白-聚乙二醇-聚乙烯亚胺(Tf-PEG-PEI)载前列腺特异性膜抗原增强子/启动子(PSMAe/p)为驱动序列的干扰质粒的细胞特异性沉默效果.方法 应用聚乙二醇(PEG)修饰聚乙烯亚胺(PEI),偶联转铁蛋白(Tf)合成靶向载体Tf-PEG-PEI.以Tf-PEG-PEI为载体将细胞特异性干扰质粒pPSMAe/p-shNS-ploy (A)转入前列腺癌LNCap和PC-3细胞中,观察细胞形态变化,检测核干因子(NS)基因和蛋白水平、细胞增殖情况以及细胞周期的变化.结果 成功修饰靶向载体Tf-PEG-PEI,细胞转染后,表达前列腺特异性膜抗原的LNCap细胞中NS表达水平显著降低,细胞膜边缘突起增多,更趋向于分化,细胞增殖速度减慢.在LNCaP细胞中,干扰组S期细胞的百分率[(14.17±0.32)％]明显低于载体组[(19.65±0.64)％]和对照组[(20.61±0.80)％,均P＜0.01)];干扰组G1期细胞的百分率[(74.69±1.01)％]高于载体组[(71.06±0.38)％]和对照组[(70.17±0.32)％,均P＜0.01].而在各组PC-3细胞中,干扰组、载体组和对照组处于S期的百分率分别为(28.86±1.13)％、(29.47±0.47)％和(29.86±0.36)％,差异无统计学意义(P＞0.05);处于G1期的百分率分别为(63.34 ±0.81)％、(62.56±0.62)％和(61.71±1.07)％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 非病毒载体Tf-PEG-PEI具有高效基因转移的能力,PSMAe/p驱动shRNA靶向干扰NS基因具有细胞特异性,使用细胞特异性启动子是实现前列腺癌靶向基因治疗的有效策略.
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前列腺特异性膜抗原介导的抗肿瘤药物研究
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一,在美国前列腺癌的发病率在男性肿瘤中排名第一,死亡率排名第二.前列腺特异性膜抗原是存在于前列腺上皮细胞膜的一种Ⅱ型跨膜糖蛋白,它在前列腺癌中高度表达,尤其是转移前列腺癌及激素抵抗前列腺癌,在前列腺癌的诊断和靶向治疗中显示出良好的应用前景.此外,前列腺特异性膜抗原还具有叶酸水解酶和N-乙酰基-α-连接二肽酶Ⅰ活性,能够催化α或y键连接的谷氨酸从肽或小分子物质上水解出来.本文重点对以前列腺特异性膜抗原为靶标的配体-药物偶联物和前列腺特异性膜抗原激活前药的新研究进展进行综述.
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靶向抗前列腺癌药物的研究新进展
前列腺癌在男性癌症死亡率中仅次于肺癌,占第二位.前列腺癌细胞特异性地分泌大量的前列腺特异性抗原(PSA)、人腺激肽释放酶2(hK2)和前列腺特异性膜抗原(PSMA),设计合成被PSA,hK2和PSMA水解活化的前药,可以针对前列腺癌进行靶向治疗.前药的结构是PSA,hK2和PSMA特异性寡肽和抗肿瘤药物的偶连物,作用原理是前药在血浆中没有活性,在瘤组织中多肽链被PSA、hK2或PSMA水解释放抗肿瘤药物,杀伤癌细胞.前药既降低了抗肿瘤药物的毒副作用,又提高了治疗指数.现从结构、血浆稳定性、靶向性、细胞试验、动物实验等方面系统地总结了前药的研究进展.
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前列腺特异性膜抗原的临床应用与研究进展
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白,具有较高的组织特异性和膜结合性.在正常和恶性的前列腺上皮细胞以及多种非前列腺恶性实体肿瘤的新生毛细血管内皮细胞都有表达,而在前列腺外的其他正常组织表达极低,在前列腺癌,特别是非激素依赖型前列腺癌及其转移灶中表达增高.近年以其为靶向的诊断、治疗等临床应用研究进展迅速.
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90例结直肠癌中前列腺特异性膜抗原的表达研究
目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者中前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)的表达及临床病理影响因素.方法:选取90例CRC患者的组织切片,应用免疫组织化学检测癌组织和癌旁正常组织的PSMA、血管标志蛋白CD31的表达水平,并对PSMA的表达水平与CRC临床病理因素的关系进行分析.结果:PSMA在正常结直肠组织中免疫组织化学染色为阴性,在CRC组织中有较高比例免疫组织化学染色.但染色阳性部位不在肿瘤细胞,而是在肿瘤新生血管内皮细胞,总染色率为76.7％.PSMA染色评分在不同年龄及组织学类型中具有显著性差异,高年龄组(≥60岁)及普通型腺癌组的PSMA染色评分更高(P<0.05).结论:PSMA在90例CRC患者中高比例表达,表达部位为肿瘤新生血管内皮细胞,与部分临床病理因素有关,可能成为CRC诊断及治疗的特异性标志物.
