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基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨
目的:探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性.方法:查阅国际上主要的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型诊断标准和现行技术,通过将基因芯片技术与目前用于HBV基因分型的技术方法进行对比,探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性.结果:HBV的基因分型,既可通过全基因序列比对,也可通过片段基因序列比对,片段基因序列比对是实际工作中HBV基因分型的主要方法,现有报道的技术主要为型特异引物(SSP)PCR扩增法和PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法.基因芯片技术具有高敏感、高通量和能够平行检测DNA类型等特点,技术类型属于PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法.尚未见有应用基因芯片技术进行HBV基因分型检测的报道.结论:借鉴现有的PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法,如微板核酸杂交-ELISA显色技术,理论上利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断的方法是完全可能的,并且具有高效、快速和廉价等特点.
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乙型肝炎病毒基因前C区热点变异及其意义
乙型肝炎病毒(HBV)基因组变异在病毒感染过程中扮演着非常重要的角色,曾经一度成为肝炎研究的一个热点,其中前C区热点变异是变异研究的重点.本文就HBV前C区基因的结构功能、热点变异发生的可能机理及与临床的关系等有关研究情况作一简述.
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乙肝“转阴”,转什么阴?
经常听到“让大、小三阳全部转阴”的话,可以肯定这是一句外行话,或者说是骗人的话.乙肝根本就不存在“大、小三阳全部转阴”.其实治疗乙肝就只有“三个阳”要转阴,哪三个?一是乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)转阴;二是乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)转阴;三是乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)转阴.搞清楚这三个“转阴”问题,你就会对乙肝的认识顿时开朗起来.
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗应用于母婴传播的免疫效果
作者对我国研制的哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果报道如下.
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗阻断母婴传播的进一步观察
"七五"和"八五"计划期间,我国对第一代乙型肝炎(乙肝)疫苗(血源疫苗)的新生儿免疫效果进行了近期和远期效果考核,均证明效果良好."九五"期间又对第二代乙肝疫苗(基因工程疫苗)效果进行考核,以后取代血源疫苗.本文报道对我国研制的在哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果.
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乙型肝炎病毒基因定量聚合酶链反应的临床应用
乙型肝炎病毒(HBV)感染时,外周血中HBV DNA是反映病毒复制活动直接和可靠的标志,其含量直接代表患者病毒血症水平.近年来,随着聚合酶链反应(PCR)的不断发展,在HBV DNA定性检测基础上建立了定量检测方法,灵敏度和特异性不断提高,在研究病毒感染量与临床病情的关系,进一步评价HBV感染的自然史和HBV血清标志物的临床意义及鉴定抗病毒药物疗效等方面具有重要意义.我们采用PCR-微孔板酶联杂交法定量检测102例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,以探讨病毒复制水平与血清标志物表现模式之间的关系,以期为广大乙肝患者的诊治及预测临床转归提供参考.
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HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者红细胞补体受体Ⅰ型分子基因点突变与HBV DNA含量的关系
目的 研究免疫应答和耐受HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者红细胞补体受体Ⅰ型分子(CR1)基因点突变与HBV DNA 含量变化的关系,探讨其临床意义.方法 选择肝脏功能正常、血清HBV DNA 大于106 IU/ml 的114 例HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者作为免疫耐受组研究对象,选择初次发生转氨酶高于正常值2 倍以上伴或不伴有肝细胞性黄疸的110 例HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者为免疫应答组研究对象.采用PCR 和Hind Ⅲ酶切技术对红细胞CR1 分子基因多态性进行分类.用细胞核酸释放剂(CNR)裂解细胞,释放HBV DNA,对白细胞HBV DNA 进行实时荧光PCR 检测.结果 免疫应答组HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者的红细胞CR1 基因点突变率明显低于免疫耐受组和正常人群(P <0.05).在免疫应答组中,CR1 基因发生点突变患者的血清和白细胞HBV DNA 含量均明显高于未发生点突变者(P <0.05); 在免疫耐受组中,红细胞CR1 基因发生点突变和无点突变的患者其血清和白细胞HBV DNA 差异均无统计学意义.结论 检测HBeAg 阳性慢性乙型肝炎患者红细胞CR1 基因点突变对了解乙型肝炎患者清除HBV 的能力、评估病情发展、判断预后具有一定的指导意义.
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基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因
目的:乙型肝炎病毒(HBV)基因组编码的HBxAg是一种很强的反式激活(transactivation)病毒蛋白,在正常肝细胞的恶性转化(transformation)以及肝细胞癌(HCC)的形成过程中具有十分重要的作用.为了阐明HBxAg的表达对于肝细胞基因表达谱的影响,我们应用基因芯片技术,对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析.方法:以含有全长乙型肝炎病毒基因的pCP10质粒作为模板,应用聚合酶链反应技术(PCR)扩增的HBxAg基因片段,常规分子生物学技术构建HBxAg的真核表达载体pcDNA3-HBxAg,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞,HBxAg蛋白的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2中提取总mRNA,逆转录为cDNA,并进行基因芯片技术分析.结果:经过限制性内切酶分析和序列测定,证实pcDNA3-HBxAg构建正确.HBxAg在HepG2细胞中的表达以Western blot杂交技术得到证实.对于HBxAg重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱,利用基因芯片技术进行分析.结果表明,16种基因的表达水平上调,58种基因的表达水平下调.这些基因包括细胞生长、细胞凋亡、信号转导等基因,相信这些类型的基因在HBxAg的恶性转化中具有十分重要的作用.结论:HBxAg是一种病毒反式激活蛋白,对于肝细胞基因表达谱有显著影响;基因芯片技术是分析病毒反式激活蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径.
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乙型肝炎病毒前S1抗原与血清HBV-DNA及HBVM的相关性分析
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原与血清HBV-DNA及HBVM的相关性分析,并探讨HBsAg与HBV-DNA之间的关系,HBsAg与前S1抗原之间的关系及HBV-DNA与前S1抗原之间的关系,为临床提供依据.方法 选取2012年9月-2013年7月医院接受诊治的乙型肝炎195例患者HBsAg均为阳性,其中HBV-DNA应用核酸扩增荧光定量检测,HBVM(包括前S1抗原、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBsAg、HBsAb)应用ELISA法检测,选取健康体检者96名作为对照组.结果 195例HBsAg阳性患者的血清标本中HBV-DNA的阳性率高为75.90%,其次为前S1抗原的阳性率51.28%、HBeAg的阳性率28.21%;前S1抗原与HBsAg、HBV-DNA与HBsAg结果差异均有统计学意义(P<0.05),且HBV-DNA与前S1抗原的阳性检出率均显著高于HBsAg; HBV-DNA与前S1抗原两种检测结果差异均有统计学意义(P<0.05),且HBV-DNA阳性率高于前S1抗原;96例健康者其检测结果表明前S1抗原亦均为阴性.结论 乙型肝炎病毒前S1抗原与血清HBV-DNA及HBeAg三者在反映病毒复制水平上具有一定的相关性,目前S1抗原与HBV-DNA具有较高的符合率,可以为HBV感染的监测提供更加全面的分析依据.
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慢性乙型肝炎病毒感染者与肝癌家族聚集性患者血清HBsAg和HBV-DNA检测的意义
目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者与肝癌家族聚集性(FH)患者体内血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与HBV基因(HBV-DNA)定量水平检测的意义.方法 选取2011年2月至2016年10月间南方医科大学深圳医院收治的55例慢性HBV感染患者为观察组,同时选取63例FH患者为对照组.比较两组患者HBsAg定量水平、HBV-DNA定量水平及肝功能指标.分析HBV-DNA与肝功能指标和HBsAg的相关性.结果 观察组患者HBsAg定量水平均值显著高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05),且乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)呈阴、阳性患者血清HBsAg定量水平在两组间的平均值比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).观察组患者的HBV-DNA、谷丙转氨酶(ALT)和白蛋白(Alb)水平均显著高于对照组患者,而总胆红素(TBil)水平低于对照组患者,两组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05).两组患者的HBV-DNA与HBsAg定量水平呈正相关性,差异有统计学意义(P<0.05),而与肝功能各项指标均无线性相关性,差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 FH患者的HBsAg水平明显较慢性HBV感染者低,且两者HBsAg定量值与HBV-DNA存在正相关关系.
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乙型肝炎病毒基因自然变异耐药性研究进展
目前,核苷(酸)类似物抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗的有效性、可行性、安全性已得到认可.但在治疗过程中所出现的耐药性已成为病毒学家和临床医师必须面对的问题[1].
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乙型肝炎病毒基因定量检测及临床应用
近年来乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)定量分析的临床价值,受到越来越多研究者的重视[1],尤其发现干扰素治疗疗效与HBV-DNA水平两者之间的密切关系,是用于指导抗病毒药物治疗效果有价值的指标[2].
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拉米夫定耐药患者变异类型检测及乙型肝炎病毒基因丙氨酸转氨酶水平分析
在抗病毒治疗历程中,拉米夫定是第一个被批准用于治疗慢性乙型肝炎的核苷类抗病毒药物[1],能有效抑制慢性乙型肝炎病毒的复制且没有严重不良反应。然而,随着用药时间的延长很容易出现病毒耐药。拉米夫定耐药导致病毒学突破,并可使肝功能及组织学恶化。然而拉米夫定的有效性、安全性及相对价格较低在临床的应用中仍较为广泛。本文就我院2009-2012年定期随访的103例慢性乙型肝炎患者的拉米夫定耐药变异情况进行回顾性分析,现报告如下。
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乙型肝炎病毒基因YMDD自然变异的检测及意义
近来,国内外有报道HBV基因存在YMDD自然变异,本研究对未经拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者YMDD热点变异L528M、M552I/V位点进行检测,并分析其与临床的关系.
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乙型肝炎病毒基因分型的研究进展
对乙型肝炎病毒的研究发现,病毒变异导致的不同基因型具有不同的临床意义.病毒基因型间的氨基酸差异可导致病毒复制水平的不同,会影响患者的抗病毒治疗效果以及耐药现象的产生,故及时检测患者感染的病毒基因型对指导临床工作、预测感染的结果尤为重要.乙型肝炎病毒基因分型技术已成为迫切需要进行研究和普及的重要内容.
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Taq Man荧光定量PCR检测HBV-DNA的假阴性原因分析
聚合酶链式反应(PCR)技术用于乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)的诊断,早期由于技术不成熟及实验室条件不合要求(尤其是污染)而可引起假阳性[1].随着鸟苷酶(Uracil-DNA glycosylase)防污染技术及荧光定量分析技术等的应用,PCR技术的假阳性已逐步减少,但新近又发现有较多的假阴性标本存在.本文探讨Taq Man荧光定量PCR检测HBV-DNA时可能引起假阴性的原因.
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儿童乙型肝炎病毒感染者血清中病毒基因与e系统的关系及预后
目的了解儿童乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中,乙型肝炎病毒基因(HBV DNA)与e系统的关系及病情发展趋势.方法采用聚合酶链反应方法(PCR),酶联免疫吸附检测法(ELISA).结果 73例乙型肝炎病毒携带者(ASC)中e系统阳性68例,HBV DNA阳性61例,29例乙型肝炎患儿中e抗原阳性28例,HBV DNA阳性28例,两组数据都远远高于成人感染组.结论儿童HBV感染中,ASC与肝炎患儿的HBV DNA与e系统阳性率有非常显著的差异.
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乙型肝炎病毒基因的整合及对宿主的影响
乙型肝炎病毒是导致慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌的主要病因[1-2].在原发性肝细胞癌(HCC)组织中HBV DNA的检出率可高达40%~50%,且以整合型为主,乙型肝炎病毒基因整合入肝细胞基因组被认为是肝细胞癌发生过程中的重要步骤.本文将对乙型肝炎病毒不同感染阶段的整合、整合的病毒分子、在宿主细胞基因组上的整合位点及整合机制分别进行阐述.
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非活动性携带者和肝细胞癌患者血清转换前后乙型肝炎病毒基因C型全序列比较
目的通过围产期传染慢性乙型肝炎病毒(HBV)的患者大部分在e抗原(HBeAg)血清转换后成为非活动性携带者(IC),然而,部分患者血清转氨酶水平持续异常,在抗-HBe阳性阶段发展成肝细胞癌(HCC).此研究的目的是调查HCC相关HBV变异.方法入选感染HBV基凶C型8名IC和8名HCC患者,血清转换前后进行HBV全序列检测.
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乙型肝炎前S1抗原与HBV-DNA检测相关性分析
目的:探讨乙型肝炎前S1抗原与病毒复制的相关性。方法:从临床乙型肝炎标本中筛选出乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性病例380例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎前S1抗原(HBV-preS1)、HBV标志物5项,HBV-DNA采用荧光定量聚合链反应(PCR)法。结果:380例HBsAg阳性标本中PreS1抗原阳性率为56.8%(216/380),HBV-DNA阳性率为61.l%(232/380),两组相比差异无统计学意义(P>0.05);134例HBeAg阳性标本中,PreS1抗原及HBV-DNA阳性率分别为91.8%(123/134)和98.5%(132/134),两组相比差异无统计学意义(P>0.05);HBeAg阴性另外三组标本中,PreS1抗原及HBV-DNA阳性率分别为40.6%(78/192)、33.3%(14/42)、8.3%(l/12)和42.7%(82/192)、38.0%(16/42)、8.3%(1/12),各组相比差异无统计学意义(P>0.05)。231例HBV-DNA阳性中, PreS1抗原阳性例数为216例,阳性率为93.5%,HBeAg阳性例数为132例,阳性率为57.1%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乙型肝炎前S1抗原与HBV-DNA高度相关,是乙型肝炎病毒在体内复制的可靠指标,同时在乙型肝炎诊断和治疗中具有重要的临床意义。