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376 用毛细管电泳分析吴茱萸中的昔奈福林
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分子生物学技术在诊断细胞学中的应用
自人类开始重组DNA实验25年后的今天,分子生物学技术已经成为一种定量的分子诊断(molecular diagnostics)手段,并在不断影响着传统的诊断技术.一般认为,常用的分子生物学技术包括核酸杂交分析和各种基因扩增方法,但不包括免疫细胞化学法.目前临床常用的技术有Southem印迹杂交、多聚酶链反应(PCR)及其扩增产物的电泳分析、原位杂交和荧光原位杂交(FISH)等;其他较新的分子生物学技术,如生物芯片和核酸扩增的原位检测,亦将很快用于细胞学的研究和诊断[1,2].传统的肿瘤细胞学诊断方法是根据经验来判断是否为恶性细胞,缺乏客观指标;而分子生物学技术具有高度的特异性和敏感性,是细胞学诊断的重要手段.
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对蚤类口分泌液过敏原的生化分析及测定
目前,随着卫生条件的改善,蚤类叮咬人的现象已被有效地控制和阻断,疾病防制工作也已取得显著成绩,但是在我国某些卫生条件较差的边疆和农村地区,蚤类叮咬人的现象还比较普遍,并导致相关疾病传播,严重危害人类健康.为研究蚤口叮咬人后过敏原的成分及理化性质,以采取有效的防制措施,我们先后对人工收集的蚤口分泌液进行了超滤浓缩、蛋白定量、光谱分析及3种PAGE电泳分析.
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β地中海贫血伴纵隔髓外造血组织增生一例
患者,女,31岁,因全身乏力2个月,胸痛1个月入院.24年前曾因β地中海贫血行脾切除术.体格检查:全身皮肤黏膜苍白,呈重度贫血貌,全身浅表淋巴结未触及,心前区可闻及Ⅲ°SM杂音;腹软,肝肋下未触及,双下肢无水肿.实验室检查:红细胞:1.24×1012/L,血红蛋白:34 g/L,白细胞:21.5×109/L,血小板:676×109/L,网织红细胞计数:0.45;外周血涂片分类:中晚幼红细胞16/100个白细胞.血红蛋白电泳分析见图1,HbF测定为31.4%.骨髓检查:有核细胞增生活跃,早幼粒细胞0.01,中幼粒0.02,晚幼粒0.04,杆状粒0.10,分叶粒0.07;原始红细胞0.08,早幼红细胞0.16,中幼红细胞0.20,晚幼红0.22,可见双核,三核幼红细胞,花瓣幼红细胞,可见豪周氏小体.骨髓铁染色:细胞外铁(+ +),内铁43%,考虑溶血性贫血. CT示纵隔多发性肿块(图2,3).
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聚合酶链反应-单链构象的多态性技术鉴定解脲脲原体生物群和基因型鉴定中的应用
本研究通过对解脲脲原体(UU)的14个标准血清型的聚合酶链反应-单链构象的多态性(PCR-SSCP)电泳分析,直接鉴定UU生物群和基因型.
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新生鼠缺氧缺血性脑损伤组织一氧化氮合酶基因表达及作用
新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是围产期新生儿脑损伤的主要原因。病理性刺激下一氧化氮(NO)过度生成并具有神经毒性作用[1]。本研究观察原生型一氧化氮合酶(cNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA在新生鼠HIE模型的表达,以阐明HIE脑损伤时NOS变化规律和作用。 材料和方法 1.对象:纯种新生SD鼠42只,随机分成对照组、H1h和H4h组;按Rice法建立HIE模型并鉴定。 2.试剂:变性液、Taq酶、AMV逆转录酶及各种引物:cNOS 5'GCCGGATCCTCCAGGAGGGTGTCCACCGCATG 3'; 5' CCGGAATTCGAATACCAGCCTGATCCATGGAA 3'。 该引物扩增的cDNA产物长度为614bp。该对引物扩增产物长为576bp。 β-actin 5' GGATCCAGCCTCAAAGAGCTTAC 3' ;iNOS 5' GTGTTCCACCAGGAGATGTTG 3'; 5' CTCCTGCCCACTGAGTTC-GTC 3'; 5' GAATTCCCAAGAGCCTTGAGCAATGGA 3'。该引物扩增产物长为280bp 3.方法:一步法抽提RNA,鉴定后行RT-PCR,产物电泳分析,照片光密度扫描,校正计算NOS含量,结果行方差分析。
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以高效能的蛋白质体学方式进行口腔鳞状上皮癌的标记蛋白质辩识及确认
口腔癌在亚洲地区属于高发生率的癌症疾病,而口腔鳞状上皮癌又是其中主要的癌症类型.临床上针对此癌症之治疗还是以手术为主.对于口腔鳞状上皮癌发生机制的研究有助于临床上新疗法的开发.以蛋白质二度空间电泳分析方式找出癌细胞的异常表现蛋白质,并以之作为标的进行细胞实验,以确认该异常蛋白质的表现与口腔鳞状上皮癌发生之相关性.据此结果进行SiRNA干扰实验,进而进行裸鼠动物实验以确认此方法对口腔鳞状上皮癌的治疗效果.结果显示,此治疗方式在动物实验上有明确疗效.
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国内基因扩增技术的进展
国内近两年开始正式受理国内PCR试剂盒的申报工作,新药评审专家对试剂盒的技术规范达成共识,就是申报的PCR试剂盒必须采用探针杂交技术和防污染技术,禁止使用产物的电泳分析技术,使试剂盒技术水平达到国际水准.现就这两种技术的发展介绍如下.
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肺结核患者血清蛋白电泳图谱与体液免疫水平相关性的探讨
近年来结核病的发病有上升趋势,我国每年新增160万例.结核病患者血清蛋白电泳谱的特征及其与体液免疫水平相关性的报道国内极少.为此,本研究采用法国SEBIA公司高效全自动毛细管电泳仪进行血清蛋白电泳分析,调查其体液免疫水平.
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三种鼠蛲虫虫体蛋白的盘电泳分析
目的:实验分析寄生于鼠类的三种蛲虫虫体蛋白的异同,探索此三种线虫生化分类的可行性.方法:用圆盘电泳方法对隐藏管状线虫、鼠管状线虫、四翼无刺线虫的虫体蛋白进行分析.结果:三种蛲虫的蛋白组分互有不同,重复实验结果稳定,具有虫种特异性.结论:虫体蛋白盘电泳分析可用于鼠蛲虫分类鉴定.
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缺氧诱导因子1(HIF-1)在肝脏疾病中的意义
缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor,HIF-1)是在特定缺氧条件下广泛存在于人类和哺乳动物的一种缺氧应答调控因子.在缺氧条件下,它能激活很多缺氧反应性基因.它是在研究缺氧诱导的红细胞生成素(erythropoietin,EPO)基因表达时发现的一种DNA结合蛋白.1988年,Goldberg等发现缺氧对细胞E-PO mRNA的表达有影响[1].1992年,Semenza等发现,对经低氧处理后Hep3B和HepG2细胞株的细胞核提取物进行电泳分析时发现,它能与EPO基因的3′增强子可以特异性结合,使EPO的mRNA量增加,且其核提取物具有能够促进EPO基因转录的作用,应用蛋白合成抑制剂能阻断缺氧的诱导作用,故提出缺氧可以诱导细胞产生新的HIF-1蛋白,该蛋白能够调节相应的一些缺氧反应性基因的表达[2].
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23例多发性骨髓瘤误诊分析
多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,临床表现为骨髓瘤细胞对组织器官的浸润及血浆蛋白异常引起的一系列症状.多数起病缓慢、缺乏特异性,往往容易误(漏)诊.我院于1997年~2003年共收治多发性骨髓瘤患者35例(全部病历经骨髓穿刺、免疫电泳分析检查确诊),初诊时误诊率23/35(65.7%),初步分析如下.
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氨基酸低层析和低电泳分析的新改进
用茚三酮做显色剂的低层析和低电泳是进行氨基酸混合物分离分析的常用方法.传统的操作是将展层(或电泳)和显色截然分为两步进行.不但手续较繁,且又污染环境,对此,曾有人将氨基酸的低层析和低纤维薄板层析做了一点改进,用正丁醇--甲酸 --水做展开剂 ,另外用0.4M茚三酮正丁醇溶液做显色储备液,临用时将两者按一定理量混均匀,进行层析,层析后取出纸条烘干即显斑点,从而使用展层和显色合并为一步完成,但此法的实验结果,烘干后纸条所显示斑点的色泽和强度不太令人满意.
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一维和二维电泳分析斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原
人不是斯氏狸殖吸虫的适宜宿主,幼虫寄生后可引起多种肺外型感染,病原学检查困难[1],临床诊断主要依靠免疫学检查,除检测方法外,诊断用抗原的特异性是影响检测效果的关键因素.故分析和检测并殖吸虫的特异抗原组分,在并殖吸虫病的免疫诊断和抗原的分离纯化方面均具有重要意义.本文采用一维、二维电泳和免疫印迹技术分析斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原,试图鉴别特异的、高免疫原性斯氏狸殖吸虫蛋白和多肽,为开发特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供参考资料.
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成人自动化血清蛋白电泳参考值的建立
目前,全自动电泳仪和半自动电泳仪已普遍进入临床实验室,手工法血清蛋白电泳因其误差大,重复性差,逐渐被淘汰.随着自动化电泳仪的广泛使用,已有必要建立相应国内人群血清蛋白电泳参考值.本实验通过对114名自愿献血人员进行检测,计算出本地区成人血清蛋白电泳参考值,现作报道.
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血清蛋白电泳测定的标准化问题初探
电泳技术现已广泛应用于临床,血清蛋白电泳分析对多种疾病具有诊断意义。电泳分析由于手工比重较大,技术人员的经验和手法、电泳温度及时间、缓冲液离子度的改变、电泳薄膜的脱色及透明等诸多因素直接影响分析结果的准确性和重复性。本文就血清蛋白电泳的乙酸纤维素薄膜法……
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全自动电泳技术的临床应用
全自动电泳仪是目前较先进的进行电泳分析技术的精密仪器,该仪器是用琼酯糖凝胶板作载体,把血清蛋白分区带,此方法使用方便,更适合临床应用.我科采用SH-2020全自动电泳系列,对我院病人作血清蛋白电泳分离,分离出的区带结果,对临床诊断具有一定价值.
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广东首例双白蛋白血症报告
1材料与方法1.1样本:女性,46岁,北京人,于1994年7月体检,空腹采血作血清醋酸纤维素薄膜蛋白电泳分析.
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不同纯化方法提纯囊虫抗原效果对比
目的:寻找适合实验室和大量纯化囊虫抗原的佳载体和方法.方法:应用(1)AlfGa10作为载体,常规洗涤、装柱、包被、过柱、洗涤、脱洗、透洗.(2)33%过硫酸氨纯化、透洗.(3)特异抗体致敏医用磁粉球,置含有0.85%Nacl容器内,37℃lh、洗涤、脱洗、透洗.取三种不同方式纯化的抗原,测其含量;电泳分析其纯度;检测已知囊虫和其他寄生虫病患者,了解其特异性和敏感性.结果:用AlfGa10载体纯化囊虫抗原,单次纯化量为117mg,后两种方法无限量;用AlfGa10和医用磁粉球纯化的囊虫抗原,电泳结果显示出两条清晰的蛋白带,而过硫酸氨纯化的囊虫抗原电泳结果显示出多条不清晰的蛋白带,三种不同抗原ELISA方法检测囊虫患者血清,检出低抗原量均在0.1-0.2ug/ml,用AlfGa10和医用磁粉球纯化的囊虫抗原检测囊虫和其他寄生虫患者血清,无假阳性结果,而用过硫酸氨纯化的囊虫抗原的检测结果,假阳性率较高,包虫患者假阳性率达83%.结论:应用医用磁粉球纯化蛋白,方法简便,纯度高,易于批量纯化,是一种理想的载体.
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腹水-血清蛋白电泳比值的临床意义
用腹水蛋白定性和定量来鉴别腹水的性质在临床上应用较多,但并不可靠.有报道,腹水-血清蛋白电泳分析对腹水的鉴别诊断有一定的意义,本文通过对腹水-血清蛋白电泳比值的观察,评价其对腹水鉴别的意义.