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EZH2基因对卵巢癌的研究现状
EZH2(enhancer of zeste homo log 2)是果蝇zeste基因增强子的人类同源物,属于PcG( Polycomb Group)基因家族的重要成员之一,是一个非常重要的核转录调控因子[1].EZH2基因是近几年新发现的一种转录阻遏抑制因子,它具有促进多种肿瘤转移的活性.EZH2作为后选癌基因,在许多肿瘤组织和细胞中呈现高表达,对肿瘤的发生和进展起着重要作用[2].
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激活低氧诱导因子-1的转导通路
低氧诱导因子-1(HIF-1)与心血管缺血、肺高压和癌症等有密切关系,是在低氧的肝细胞癌细胞株hep3B细胞的核提取物中发现的,是一种结合于促红细胞生成素(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列的特异蛋白.据报道,许多类型的细胞都可被低氧诱导而产生效应,其中HIF-1起主要作用,提示细胞中普遍存在一个低氧转导机制.一些转录因子,如活化蛋白-1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)、HIF-1[1]都与低氧应激反应有关.哺乳动物细胞对缺氧的适应性反应主要是表达HIF-1,这一过程与某些蛋白基因如醛缩酶A、烯醇化酶α、乳酸脱氢酶LDH、丙酮酸激酶和葡萄糖转移酶-1(GLUT-1)的表达有密切关系[2].
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增强子
增强子(enhancer)是使基因转录速率显著提高的一类顺式作用元件.各种增强子相互间在结构上同源性较少,但具有一些短的和简并的共有序列.增强子具有以下特性:(1)增强子能(通过启动子)提高同一条DNA链上靶基因转录的速率;(2)增强子对同源或异源基因同样有效;(3)增强子的位置可在基因5′上游、基因内或其3′下游序列中;(4)增强子在DNA双链中没有5′与3′固定的方向性;(5)增强子可远离转录起始点,通常在1~4 kb(个别情况下可远离转录起始位点达30 kb)起作用;(6)增强子一般具有组织或细胞特异性;(7)增强子的活性与其在DNA双螺旋结构中的空间方向性有关.
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冠心病痰瘀证候与载脂蛋白E第一内含子增强子基因多态性关系的研究
目的:探讨冠心病(CHD)不同的痰瘀证候与载脂蛋白E基因第一内含子增强子(ApoE IE1)多态性的关系.方法:选择符合条件的CHD中医痰证、瘀证、痰瘀互阻证和非痰非瘀证(其他证型)患者200例,另选100例健康对照,常规检测所有样品的血脂水平.提取全血DNA,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测apoE IE1的基因型.采用SAS软件进行相关性分析.结果:各基因型间血脂水平的差异未达到显著性意义,但C/C,C/G,G/G基因型患者的总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平顺序有依次升高的趋势.CHD患者中的G/G基因型显著多于健康对照,并在痰证和痰瘀互阻证中的分布多于瘀证和非痰非瘀证.G等位基因与apoE第四外显子ε4等位基因密切相关.结论:ApoE第一内含子增强子BspLI位点的G/G基因型可能是冠心病痰证及痰瘀互阻证的易感基因型之一.
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EGFP作为报道基因在研究WT1基因调控元件中的应用
本研究调查EGFP基因作为报道基因在研究WT1因调控功能中应用的可行性.利用基因重组技术分别将WT1基因启动子和增强子的功能片段构建到质粒pEGFP-1载体中,转化感受态E. coli茵细胞,筛选了阳性转化茵落,通过限制性酶切鉴定重组质粒插入片段正确的菌落,抽提重组质粒DNA;同时将重组质粒转染K562细胞,通过荧光显微镜检测重组质粒的功能.结果表明:通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体(pEWP)和含有WT1基因启动子和增强子的载体(pEWPE、pEWPA和pEWPD).转染48小时后,pEWP、pEWPE、pEWPA和pEWPD的K562细胞在荧光显微镜下能够显示荧光,而转染了空载体pEGFP-1的K562细胞未出现荧光.结论:EGFP基因作为报道基因可以用于WT1基因调控功能的研究,为进一步开展基因治疗创造了条件.
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EZH2在恶性肿瘤中的相关研究
EZH2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是果蝇zeste 基因增强子的人类同源物,属于PcG(polycomb group)基因家族的重要成员之一,在多种原发肿瘤中高表达,在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用.
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SV40增强子修饰提高人端粒酶逆转录酶启动子的转录活性
人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子能启动治疗基因的表达,用于治疗端粒酶阳性肿瘤.已有研究运用hTERT启动子携带肿瘤治疗基因进行肿瘤靶向性的基因治疗[1,2].
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大鼠实验性肺损伤肺组织核蛋白核因子-κB 活性的检测
核因子-κB(NF-κB)与基因启动子和(或)增强子中特定的κB序列结合,启动和调控众多参与炎症过程细胞因子和炎症介质的基因表达[1]。有关NF-κB活化及其表达调控在全身炎症反应综合征(SIRS)和远隔脏器靶器官的研究较少,为此,我们进行了以下研究。
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细胞周期蛋白D1表达、聚合酶链反应及荧光原位杂交检测t(11;14)(q13;q32)易位在套细胞淋巴瘤诊断中的应用
细胞遗传学和分子遗传学的研究证实,70%~80% 套细胞淋巴瘤(MCL)中可以检测到t(11;14)(q13;q32) [1-3],易位使位于11q13上的bcl-1癌基因(也称为PRAD1,parathyroid adenomatosis,甲状旁腺腺瘤病或CCND1)处于14q32上IgH基因增强子的调控下,从而被激活,使其编码的细胞周期蛋白(cyclin) D1过度表达.这种易位在其他小B细胞淋巴瘤中极其罕见,所以通过免疫学和分子遗传学方法检测cyclin D1表达和t(11;14)(q13;q32)可作为区别MCL和其他小B细胞性淋巴瘤的重要手段.我们采用免疫组织化学检测cyclin D1蛋白表达,用聚合酶链反应(PCR)和荧光原位杂交(FISH)分别检测t(11;14)(q13;q32),以比较三种方法的敏感性和优劣点,探讨如何合理应用组织学、免疫组织化学和分子遗传学方法为日常病理诊断MCL提供帮助.
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乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对病毒自身调控序列的影响
目的 研究双剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接变异体特异性蛋白TPds对病毒自身调控序列的影响.方法 PCR扩增6种HBV启动子/增强子序列,以Kpn Ⅰ及Xho Ⅰ位点克隆于pGL3-basic,分别构建萤火虫荧光素酶重组报告载体pGL3-BCP(含HBV基本核心启动子)、pGL3-CP1601(含增强子Ⅱ的核心启动子)、pGL3-XP(X基因小启动子)、pGL3-XP1071(含增强子Ⅰ的X基因启动子)、pGL3-SP1(表面抗原大蛋白基因启动子)、pGL3-SP2(表面抗原中蛋白基因启动子).以FuGENE6将TPds表达载体pcDNA3.1/HisC-TPds或空白载体pcDNA3.1/HisC分别与6种HBV启动子/增强子报告载体共转染Huh7细胞,转染后48 h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性,实验重复5次,数据以SPSS11.5软件分析.结果 在一定的质量比值范围内,与pcDNA3.1/HisC空白载体对照相比,pcDNA3.1/HisC-TPds分别与pGL3-CP1601、pGL3-XP1071、pGL3-SP1、pGL3-SP2共转染后,Huh7细胞内萤火虫荧光素酶活性增高,而pcDNA3.1/HisC-TPds分别与pGL3-BCP或pGL3-XP共转染后,胞内荧光素酶活性无变化.结论 TPds蛋白可反式激活HBV启动子SP1、SP2和增强子Ⅰ、Ⅱ,对基本核心启动子和X基因小启动子无影响.
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NF-κB在机体炎症与免疫反应中作用的研究进展
Sen和Baltimor[1]首先从B淋巴细胞核提取物中检测到一种能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子κB序列(5'GGGACTTTCC3')特异结合的核蛋白因子,称其为核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB).NF-κB存在于体内多种细胞中,活化后能与许多基因启动子区域的固定核苷酸序列结合而启动基因转录,参与多种疾病的发病过程.本文现对NF-κB及其在炎症与免疫反应中的作用作一综述.
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癌胚抗原启动子调控融合自杀基因yCDglyTK载体的构建及其应用研究
目的构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK,研究癌胚抗原(CEA)启动子是否能控制新型融合自杀基因yCDglyTK在CEA阳性结肠癌细胞中专一性表达和杀伤作用.方法采用PCR、RT-PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建由CEA启动子、CMV增强子驱动的融合自杀基因pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK表达载体和分别由CEA启动子和巨细胞病毒(CMV)增强子驱动的融合自杀基因pcDNA3.1(-)CEAyCDglyTK、pcDNA3.1(-)CMVyCDglyTK表达载体,以磷酸钙纳米为载体分别转染CEA阳性的人结肠癌细胞株LOVO细胞和CEA阴性的Hela细胞,采用RT-PCR、免疫荧光法检测感染细胞中yCDglyTK基因的表达,并用MIT法检测感染后细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性.结果LOVO细胞在感染以上三种质粒表达载体后均有yCDglyTK mRNA表达,且对5-FC的敏感性明显增强,Hela细胞在纳米-pcDNA3.1(-)CMVyCDglyTK复合物感染后有yCDglyTK mRNA表达,对5-FC的敏感性增强,而在纳米-pcDNA3.1(-)CEAyCDglyTK及纳米-pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK复合物感染后则没有yCDglyTK mRNA表达,5-FC对其亦无杀伤作用.结论该实验构建的由CEA启动子、CMV增强子驱动的融合自杀基因yCDglyTK靶向性基因治疗载体,能使融合自杀基因在CEA阳性细胞中专一性表达,从而达到靶向治疗肿瘤的目的.
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核转录因子κB与恶性肿瘤侵袭转移机制的研究进展
核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)是1986年Sen等[1]在B细胞中发现的一种核转录因子,因其能和免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κB序列特异性结合而得名.它几乎存在于所有组织细胞中,能与多种细胞基因启动子或增强子的特定序列的位点发生特异性结合从而促进基因转录和蛋白表达.继往人们着重于NF-κB在炎症反应和免疫性疾病等方面的研究,近些年来大量研究表明NF-κB可通过调节细胞的增殖、凋亡、迁移等相关因子的转录而参与肿瘤的侵袭转移.现就NF-κB与恶性肿瘤的发病机制作一综述.
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hAFP增强子调控的肝癌特异性基因治疗载体的构建及活性测定
目的:构建新型AFP顺式作用元件调控的基因表达载体,检测该调控元件的特异性和活性表达.方法:设计含有特定酶切位点的引物,采用PCR法从HepG2细胞中克隆AFP启动子及增强子基因亚区片段.启动子与增强子长、短片段分别与含有报告基因荧光素酶基因的载体pGL-3的多克隆位点连接,构建不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc.经测序,PCR及酶切鉴定各重组体.用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系进行荧光强度及特异性表达测定.结果:成功地将AFP基因启动子、增强子克隆到报告基因载体pGL-3的多克隆位点,构建成为不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc,酶切鉴定和DNA序列分析无误.转染APLE-Luc质粒的细胞中Luciferase表达量明显高于转染APSE-Luc质粒的细胞,其在HepG2细胞中的表达明显高于SMMC7721细胞及Hela细胞.结论:成功构建AFP启动子与增强子联合调控载体APSE-Luc/APLE-Luc.AFP增强子能够特异性地增强目的基因在AFP阳性细胞中表达,并且不同的亚区活性不同,长片段的活性明显高于短片段.
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乙型肝炎病毒对细胞信号转导的影响
0引言乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原,X蛋白以及HBV DNA的聚合酶.此外,HBV DNA结构中还有4段启动子、2段增强子以及与HBV DNA复制过程密切相关的顺向重复序列1、2(DR1、DR2)等[1].
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NF-κB在肝脏纤维化中的作用
肝脏纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤修复愈合反应,表现为肝内纤维结缔组织增生和沉积.由于肝脏纤维化是慢性肝病在进展为肝硬化时所必经的可逆病理过程,所以其治疗H益成为人们研究的重点.核因子NF-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是Sen和HBaltimore[1]于1986年发现的一种能够与B细胞免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κB序列特异结合的核蛋白因子,NF-κB属于NF-κB/Rel蛋白家族,具有转录激活功能.
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肝细胞核因子-1β基因与MODY5
肝细胞核因子-1β(HNF-1β)又名变异型肝细胞核因子-1(VHNF-1)或肝细胞因子-B3(LFB3),是一种核蛋白.作为转录因子,HNF-1β能识别启动子、启动子近侧元件和增强子等顺式元件中的特异靶序列并与之结合,对靶基因的转录起到激活或阻遏的作用;也可与其它转录因子相互作用,协同调节靶基因的终活性状态.近来发现HNF-1β基因(TCF2)突变与青少年起病的成年型糖尿病(maturity-onset diabetes of the young, MODY)伴肾脏畸形有关,现就此作一介绍.
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核因子-κB与阿尔茨海默病
早在20世纪80年代中期Sen和Baltimore[1]即在B淋巴细胞中发现一种特异结合于免疫球蛋白κ轻链基因增强子上的核转录因子蛋白,因而命名为核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB).NF-κB是机体细胞快速反应系统中关键的因子,随其功能变化可快速调节细胞的转录程序,使其能适应外界应激情况[2].NF-κB本身和调节分子的复杂性使得NF-κB可在不同的细胞中发挥不同的生理作用.
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镇痛抗肿瘤肽基因真核表达载体构建及其体外抗肝细胞癌作用
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国的发病率及病死率均高.西医治疗肿瘤有起效快的优点,但往往有较大的副作用和局限性.我国传统中药中许多成分具有抗肿瘤作用,作为中药蝎毒成分之一的东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(analgesic-antitumor peptide,AGAP)近来备受关注,将其与现代生物技术结合开发新的抗肿瘤药物具有很好的发展前景.本研究通过构建甲胎蛋白(AFP)启动子及增强子调控的AGAP真核表达载体,观察其对HCC的治疗作用,为蝎毒在肝癌基因治疗方面的价值提供实验依据.
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儿童急性淋巴细胞性白血病E2A/PBX1融合基因的检测及临床意义
白血病是儿童期常见的恶性肿瘤,其中急性淋巴细胞性白血病(ALL)约占70%.t(1;19)(q23;p13)是小儿ALL较常见的染色体易位之一,大约可在3%~5%的B细胞ALL患儿中发生,此易位涉及1号染色体上的前B白血病1(pre-B leukemia 1,PBX1)基因和第19号染色体上的免疫球蛋白增强子结合因子(immunoglobulin enhancer binding factor,E2A)基因,在衍生19号染色体上形成E2A/PBX1融合基因.我们利用巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究我院ALL患儿中此易位的发生率,并初步探讨患儿的临床特征.