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巨细胞病毒对细胞周期的影响及其机制
HCMV感染对细胞周期有很大的影响,处于不同细胞周期的细胞感染HCMV,皆可导致细胞周期的改变,在G0期及G1期感染HCMV可导致细胞周期进展到了G1/S限制点,在S期细胞感染HCMV可导致细胞周期受阻,细胞将不能进行有丝分裂.HCMV影响细胞周期主要是其极早期蛋白IE1-72及IE2-86的作用,以IE2-86为主,其机制包括:使CyclinE的转录活性增加;把Cdk2从细胞浆转移到细胞核;细胞核中CKIs水平的下降.
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精子顶体相关基因SPACA7的转录活性研究
目的 研究精子顶体相关基因SPACA7转录起始位点上游-2000bp至下游+84bp范围内启动子活性.方法 利用启动子截短实验获得人类SPACA7基因转录起始位点上游-2000bp与下游+84bp序列的系列不同长度的启动子共16个,以人肾上皮细胞293T基因组DNA为模板,进行PCR反应,将不同长度的启动子重组至荧光素酶表达载体pGL3 basic中并转染细胞,转染24h后收集细胞加入裂解液,收集细胞裂解液,利用多功能酶标仪测定荧光素酶活性.结果 我们研究了SPACA7启动子-2000bp至+84bp序列,构建了16个不同长度的promoter::Luciferase,荧光素酶活性检测结果发现各个启动子都具有一定的活性,其中-1500bp至+84bp序列启动子活性高.结论 初步证明精子顶体相关基因SPACA7启动子在-1500bp至+84bp区域具有较强转录活性.
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DNA-PKcs对c-myc蛋白稳定性的调控作用
目的 DNA-PKcs是DNA依赖蛋白激酶的催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit),与另外2个亚单位Ku70和Ku80共同构成DNA-PK复合物.与ATM、ATR等同属于磷脂酰肌醇3-激酶相关蛋白激酶(Phosphatidylinositol-3 kinase-related proteinkinase,PIKK)超家族成员.
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原因不明复发性流产易感基因单核苷酸多态性研究进展
原因不明复发性流产(URSA)是指妊娠20周之前与同一性伴侣连续发生≥3次的自然流产,且不存在染色体、解剖、内分泌和自身免疫功能异常以及生殖道感染等病因,发病率约为1%~3%[1],具体发病机制尚不清楚.现已证实URSA是多基因遗传病,单核苷酸多态性(SNP)作为人类基因组中常见的一种可遗传变异,可能通过改变基因的转录活性而影响蛋白的表达,导致人类对URSA易感性的个体差异.SNP是由单个核苷酸的变异而引起的DNA序列多态性变化,具有数量大、分布广、高度稳定、易于自动化分析等特点,被广泛应用于生物及医学研究的诸多领域.
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DYX1C1基因rs3743205位点等位基因的功能研究
目的:为鉴定儿童发展性阅读障碍发病相关易感基因DYX1C1的rs3743205位点-3C/T不同等位基因对基因调控区转录活性的影响。方法本研究构建含DYX1C1基因rs3743205位点-3C/T不同等位基因的萤光素酶报告基因重组质粒,体外转染原代培养神经细胞并测定其瞬时表达萤光素酶活性。结果体外转染增殖期原代培养神经细胞,含等位基因-3T重组质粒的报告基因荧光素酶表达活性高于含等位基因-3C重组质粒,并均低于PGL3-control Plas-mid。结论位于DYX1C1基因5'调控区的rs3743205位点-3T等位基因可能参与基因的转录调控,-3C等位基因可能是儿童发展性阅读障碍的易感基因。
关键词: 儿童发展性阅读障碍 DYX1C1基因 rs3743205位点 转录活性 -
肿瘤坏死因子-β遗传变异与食管癌发病风险的关系
食管癌是危害人类生命和健康的严重疾病之一,研究表明,饮食因素和环境因素是我国食管鳞癌的主要危险因素,遗传变异是肿瘤个体易感性的重要原因[1-2].肿瘤坏死因子(TNF) 在多种恶性肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用[3-4].有报道显示,位于TNF-β基因第一内含子+252位的G>A变异可导致该基因转录活性的增加[5].功能性TNF-β+252 G>A遗传变异可能是食管癌发生的重要遗传易感因素.为验证该假设,本研究探讨了TNF-β+252 G>A遗传变异对食管癌发病风险的影响.
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热休克蛋白、免疫及针灸
1 概述 热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是在热休克反应过程中,细胞内正常蛋白合成关闭并诱导产生的一组蛋白质,它能保护组织细胞免受骤起的热休克损伤,形成热耐受性以防御随后发生的热休克或其他紧急状态。这一现象早(1962年)是由Ritossa发现的,果蝇在温度升高(热休克)时,其唾液腺多线染色体发生蓬松现象并有转录活性。推测这种现象是由于与氧化磷酸化的解偶联相关的某些化学修饰引起的,他把这种现象称为“热休克反应”。其后的研究表明,除热应激以外的许多其他理化因素,如感染、缺氧、重金属、低血糖及某些药物等刺激也能诱导HSP的合成增加,由此引入了应激蛋白的概念。“热休克反应”不仅表现了它对物种的普遍性,而且对不同的应激条件也具有反应的相似性,因而,“热休克反应”更确切地应称为“应激反应”。 目前已发现的HSP已有10多种,Morimoto[1]将主要的HSP分为HSP90、HSP70、HSP6 0及小HSP等4个家族。此外还有分子量100~100kD而性质不同于上述家族的大分子HSP。不同的应激因素以及不同的实验动物可致不同比例的HSP产生,近几年已陆续证实HSP的诱导现象存在于从细菌至人的整个自然界。为了防止标准不统一而造成混乱,近Schlesinger [2]提出了HSP必须具备的两个标准:(1)它的合成是由于环境应激因素的强烈刺激而引起,特别是温度变化高于正常几个摄氏度的条件下;(2)它的编码基因的5′端非编码区域含有14个碱基对组成的保守序列,称为Pelham盒。这一序列起HSPmRNA转录启动子的作用。
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脱落酸对铁皮石斛Ty1-copia类反转录转座子转录活性的影响
研究以Ty1-copia类反转录转座子反转录酶区域的简并引物,对100 μmol·L-1脱落酸(ABA)处理的铁皮石斛进行反转录PCR(RT-PCR)扩增,得到260 bp左右的目的条带,说明100 μmol·L-1的ABA能诱导Ty1-copia类反转录转座子转录活性的表达.将目的条带回收、克隆和测序后分析得到42条Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守序列,该序列变异性较大,核苷酸序列长度247~ 266 bp,同源性为46.3%~98.9%.经plantCARE软件分析发现与铁皮石斛基因组所分离的Ty1-copia类反转录转座子一样,存在多个受胁迫条件作用的调控元件、多个启动子的特征结构TATA box和CAAT box的保守序列及其他一些调控元件;但有转录活性的铁皮石斛Tyl-copia RT序列中与胁迫条件作用相关的调控元件明显增加.翻译成氨基酸后,有15条序列出现不同程度的终止密码子突变,19条序列出现移码突变,保守序列“SLYGKQ”全部发生不同程度的突变.其氨基酸序列经过系统聚类后可分为5类;且与基因组Tyl-copia RT序列聚类后发现多数发生转录的Tyl组反转录转座子RT序列与基因组Tyl组反转录转座子RT序列亲缘关系较远,说明经ABA诱导后发生转录的Tyl组反转录转座子RT序列与基因组Tyl组反转录转座子RT序列有很大的差异.
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乙型肝炎病毒X蛋白(HBx):一种多功能的病毒调节因子
乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是导致肝细胞癌(HCC)的主要危险因子.X蛋白(HBx)被认为在肝细胞癌的发生发展中起重要作用.X基因是HBV基因组小的开放读码框,它编码的X蛋白含154个氨基酸,分子量约为16.5kD.HBx是一种多功能的病毒调节因子,通过调节细胞和病毒的转录活性、信号传导途径、基因毒性压力反应、蛋白质降解等,直接或间接地影响HBV的复制和增殖.HBx亦可影响细胞周期调控、细胞凋亡,从而可能在慢性活动性肝炎和肝硬化的病程中起到起始肿瘤形成的作用.
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PES1对雌激素受体转录活性的调节作用
目的 探讨PES1与雌激素受体(ER)的相互作用及其对ER转录活性的影响.方法 将体外翻译的PES1与纯化的GST-ERα和GST-ERβ蛋白分别混合,用GST pull-down验证在体外PES1与ERα和ERβ是否存在相互作用.将HA-PES1与FLAG-ERα或FLAGC-ERβ共转染293T细胞后进行免疫共沉淀,以验证PES1与ER是否在体内有相互作用.用含雌激素受体作用元件的荧光素酶报告基因检测PES1对ERα和ERβ转录活性的影响.结果 PES1与ERα、ERβ在体内外均存在相互作用,而且PES1与ERα的结合比与ERβ的强.在体内,在雌激素(E2)存在下,E2可以增强PES1与ERα的结合,而对PES1与ERβ的结合没有明显影响.PES1对ER转录活性的影响是E2依赖性的,PES1能升高ERα的转录活性而降低ERβ的转录活性(P<0.01).结论 PES1是一种新的ER共调节因子,能反向调节ERα和ERβ的转录活性,需要进一步研究的是其在ER信号通路以及在E2诱发的肿瘤发生发展中的作用.
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SREBP1 c/cm对PERK启动子转录活性及表达的差异性调控
目的:探讨转录因子固醇调节元件结合蛋白( SREBP1c)及其活性形式( SREBP1cm)对人蛋白激酶R样内质网激酶( PERK)的调控作用。方法构建人PERK启动子截短体报告基因载体,与内参质粒pRL-SV40共转入人胚肾细胞HEK293检测荧光素酶活性;用pcDNA3.1(-)-SREBP1c、pcDNA3.1(-)-SREBP1cm与PERK启动子转录活性核心区域共转293T细胞,双荧光素酶报告基因分析SREBP1c及活性形式SREBP1cm对PERK启动子转录活性的调控;RT-PCR和免疫印迹法检测SREBP1c、SREBP1cm对PERK mRNA和蛋白表达的影响。结果成功构建PERK启动子截短体报告基因载体,确定了PERK启动子转录活性核心区域;双荧光素酶报告基因分析结果显示SREBP1c抑制PERK启动子的转录活性,而SREBP1cm促进PERK启动子的转录活性。 SREBP1c抑制PERK mRNA和蛋白的表达(P<0.05),SREBP1cm促进PERK mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 SREBP1c和SREBP1cm对PERK启动子转录活性及其表达具有相反的调控作用。
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伊贝沙坦对系膜增生肾炎大鼠肾核因子-κB及MMP-9的作用
核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,参予细胞内信号传递,调控多种基因表达,许多肾脏疾病均伴有NF-κB转录活性异常.
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表达Cys548雌激素受体突变型cDNA的真核载体构建及其促转录活性分析
目的 考察一个548位点C→T单核苷酸突变的雌激素受体(ER)在体外条件下,对乳腺癌细胞株(MCF-7)信号通路的影响,以探讨ER单核苷酸突变引起非雌激素依赖性性早熟的可能机制.方法 用重叠延伸PCR定点诱变技术对548位点的碱基进行定点突变.构建定点突变表达载体pSG5-MuER.构建含雌激素受体反应元件(ERE)的萤光素酶报告基因载体pGL3-ERE-Luc.将野生和突变ER质粒分别和pGL3-ERE-Luc共转染MCF-7细胞,观察萤光素酶的变化,以检测突变ER反应活性的变化.结果 成功构建ER突变质粒psG5-MuER和ER报告质粒pGL3-ERE-Luc,psG5-MuER较pSG5-ER能够增加萤光素酶的产生.结论 该突变雌激素受体在体外具有高促转录活性特征,构建的载体可用于进行进一步的相关研究.
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甲状腺转录因子-1在病理诊断中的意义
甲状腺转录因子(thyroid transcription factor, TTF)有两个亚型(TTF-1和TTF-2).TTF-1是一种分子量为32kD的蛋白,是NKX2转录基因家族中的成员之一,主要分布于甲状腺、间脑和呼吸道上皮,在胎盘形成过程中起提高转录活性的作用[1].
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SV40增强子修饰提高人端粒酶逆转录酶启动子的转录活性
人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子能启动治疗基因的表达,用于治疗端粒酶阳性肿瘤.已有研究运用hTERT启动子携带肿瘤治疗基因进行肿瘤靶向性的基因治疗[1,2].
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含不同启动子的重组9型腺相关病毒载体转染大鼠心肌细胞表达效率的差异
9型腺相关病毒( AAV9)作为基因治疗心脏疾病的佳载体之一而成为近年来研究的热点[1],但影响AAV9转导效率的因素很多,其中载体上的启动子和受体细胞是否合适是直接影响到目的基因的转录效率和表达水平的重要因素[2],本研究分别选用含CMV启动子和CBA启动子的rAAV9携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染心肌细胞,比较两个启动子在心肌细胞的转录活性以及对细胞生长的影响,从而为AAV9携带靶基因高效转染心肌细胞以及应用于心脏疾病的基因治疗提供实验资料.
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人巨细胞病毒感染对体外培养成纤维细胞E2F1表达的时序性影响
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对体外培养成纤维细胞E2F1表达的时序性影响,进一步揭示HCMV的致病机制.方法用高和低感染复数(multiplicity of infection,MOI)HCMV病毒感染体外培养的成纤维细胞,在不同时间点用Western blot法检测细胞E2F1蛋白表达水平.结果低MOI和高MOI感染都可时序性上调宿主细胞E2F1蛋白表达,均以感染后2h上调幅度高(2~3倍).高MOI感染的上调作用强于低MOI感染.结论HCMV在感染初期即可激发宿主细胞E2F1表达明显增加,并在24h内呈时序性上调,提示E2F1在病毒感染早期诱导宿主细胞向S期和G2/M期偏移,进而在营造有利于病毒复制微环境的机制中起关键作用.
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异丙酚对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1启动子转录活性的影响
目的 探讨异丙酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺泡巨噬细胞(alveolar maerophages,AM)高迁移率族蛋白B1(high mobility group box l protein,HMGB1)启动子转录激活的影响.方法 以基因重组技术将HMGB1启动子克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGl3-Basic,得到重组质粒pGL3-HMGB1P,采用脂质体介导的转染技术将质粒转染AM细胞.根据转染质粒和施加刺激的不同分为以下各组:未转染组;转染pGL3-Basic组;转染pGL3-HMGB1P组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)刺激组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)+异丙酚(5 mg/L)处理组.通过检测荧光素酶活性米观察启动子活性变化,分别采用Western blot和RT-PCR方法检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达.应用单因素方差分析进行不同组别问的比较.结果 酶切和测序结果证实重组体pGL3-HMGB1P构建止确,荧光素酶活性检测显永pGL3-HMGB1P在AM细胞中有效表达.与转染pGL3-HMGB1P组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组HMGB1启动子的转录活性(423±27),HMGB1蛋白(0.49±0.03)和mRNA(0.48±0.04)的表达均显著增加(P<0.05);与转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS+异丙酚处理组HMGB1启动子的转录活性(207±13),HMGB1蛋白(0.17±0.02)和mRNA(0.13±0.02)的表达均显著降低(P<0.05).结论 异丙酚在转录水平通过抑制LPS诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达.
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恶性肿瘤患儿外周血T细胞核仁形成区嗜银蛋白的测定
监测恶性肿瘤患儿T细胞银染色核仁组织区(Ag-NORs)酸性非组蛋白转录活性,可反映机体细胞免疫水平、肿瘤状态及体内肿瘤因素与免疫功能间的相互作用关系.
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Ets转录因子家族在发育和肿瘤发生中作用的研究进展
Ets转录因子家族包括30多个成员,具有复杂的结构和功能,通过调节细胞的增生、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用,在许多生理和病理过程中发挥重要的调控作用.Ets家族成员在发育过程中特异性时空表达与其对发育的调控作用密切相关,他从细胞、组织、器官不同的水平调控发育过程,特别是在血管发生和免疫系统的发生中发挥重要作用.此外,Ets在肿瘤的侵袭、转移和血管生成过程中发挥重要作用,主要与调节细胞外基质(ECM)酶的转录活性有关.Ets转录因子受多种信号通路的调控,MAP激酶(Erk,p38和JNK)、Ca2+依赖的信号通路以及TGF-β、JAK/STAT信号通路都可以调控转录因子Ets表达和功能.