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温石棉与纤维水镁石矿物粉尘体外细胞毒性的对比
自从1967年美国一名港口工人死于石棉肺,获得巨额赔偿以来,有关石棉与健康问题成为世人瞩目的焦点之一.
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稀土对镍所致豚鼠肺巨噬细胞产生活性氧的抑制作用研究
在镍的开采、冶炼和精炼中,职业人群接触大量镍的硫化物、镍的氧化物后可以引起肺癌和鼻癌.已被大量的人群流行病学调查和动物实验所证实,为此IARC(1987)已将镍化合物列为第一类致癌物[1].其致癌机理之一是被吞噬的镍在细胞内产生活性氧类(主要是羟自由基)间接引起癌症[2,3].90年代以来,从分子、细胞、整体动物和人群流行病调查发现一定剂量的轻稀土化合物(RE)可以抑制肿瘤发生,并能提高机体抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化,抑制活性氧自由基(如羟自由基和超氧阴离子)的产生[4,5].为此本实验首先观察了黑色氧化镍对肺泡巨噬细胞产生活性氧的作用,并观察了氯化稀土对其作用的影响.
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SiO2粉尘对肺泡巨噬细胞膜性质影响的实验研究
矽肺的发生发展是多因素相互作用的结果.目前一般认为,SiO2粉尘被肺泡巨噬细胞(AMS)吞噬后,导致AMS受损、死亡,是矽肺发病的重要原因[1].随着膜毒理学的发展,进一步证实了SiO2粉尘作用AMS后,在生物物理、生物化学、膜成分以及形态结构等方面都发生了变化[2].采用体外细胞培养方法,检测了AMS的乳酸脱氢酶(LDH)活性、K+和丙二醛(MDA)含量及荧光偏振度P,分析了SiO2粉尘对AMS膜通透性、脂质过氧化及流动性的影响,找出较敏感、简便、迅速反映膜毒性的指标.
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汞对大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α和NO生成的影响
[目的] 比较Brown Norway(BN)和Levis(LE)两种品系大鼠肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)的能力及对氯化汞的反应是否存在差别.[方法] 用肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞进行培养,加入不同浓度的氯化汞(0.1～30 μmol/L),处理不同的时间(12～96 h)后,测定培养基中LDH的相对活性,以反映细胞毒性,并测定TNF-α和亚硝酸盐的含量.[结果] 氯化汞在3 μmol/L以下,培养48 h对肺泡巨噬细胞无明显细胞毒性.对照组BN和LW品系TNF-α的浓度分别为(609.45±111.94)pg/ml和(340.62±44.74)pg/ml,两者相比,差异有显著性.亚硝酸盐的浓度分别为(1.868±0.165)μmol/ml和(1.313±0.084)μmol/ml,差异也有显著性.氯化汞对TNF-α和NO的生成都有一定程度的抑制.[结论] 两种品系大鼠肺泡巨噬细胞体外生成TNF-α和NO的量有所不同,氯化汞能抑制两种品系大鼠的肺泡巨噬细胞产生TNF-α和NO,抑制作用以BN品系为明显,但总的趋势相似.
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沙尘暴细颗粒物对大鼠肺泡巨噬细胞的体外毒作用
目的探寻沙尘暴细颗粒物(PM2.5)不同成分对肺泡巨噬细胞(AM)的毒作用机制.
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煤尘超微结构特征与其毒性的关系
为探讨煤尘超微结构特征与其毒性的关系,借助透射电镜和生物化学技术,对不同矿区煤尘致肺泡巨噬细胞的损伤及其与煤尘超微结构特征的关系进行比较.结果显示煤尘对肺泡巨噬细胞不但造成胞质酶、溶酶体酶外漏,而且可致超微结构损伤.外形棱角锐利,结构排列有序,硬而脆的煤质,对细胞的损伤更重.提示煤尘毒性大小与煤尘颗粒的超微结构特征有关;煤尘可致肺泡巨噬细胞形态结构损伤,并且随着作用时间延长而加剧.
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沙尘暴PM2.5、PM10对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响
目的探讨了沙尘暴PM25、PM10对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响.方法沙尘暴颗粒物采集自北京市城区,细胞毒性测定用MTT法,巨噬细胞吞噬功能采用流式细胞法,以荧光标记的胶珠(Latex beads,D=2.4μm)来测定.结果MTT结果显示,随着染毒浓度的增加,巨噬细胞存活率逐渐减低,高剂量组约为对照的85%左右.流式细胞仪分析表明,各颗粒物染毒组细胞的平均荧光强度逐渐减弱,提示巨噬细胞摄入沙尘暴颗粒物后,其吞噬荧光胶珠的能力明显减低;另外各染毒组的平均侧向光散射强度,即摄入的总颗粒数(沙尘暴颗粒+荧光胶珠)低于对照,提示巨噬细胞的吞噬功能受到了损伤.沙尘暴PM25的细胞毒性比相同浓度的PM10大,对吞噬功能的损伤也更明显.结论沙尘暴PM25、PM10均能损伤大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能,削弱其非特异性防御能力.
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染矽尘大鼠肺组织匀浆一氧化氮含量、一氧化氮合酶活力的研究
研究表明[1],当暴露于矽尘等炎性刺激物作用时,肺泡巨噬细胞和肺中性粒细胞一氧化氮(nitricoxide,NO)生成增加,并上调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)基因表达.但是,有研究[2]认为矽尘并不能够直接增加培养的肺泡巨噬细胞产生NO;还有研究认为NO可能是肺纤维性结节形成的调节因子[3].这些研究提示NO及NOS的变化与矽尘对肺的作用有关.本研究测定了染尘后不同处理时点肺匀浆NO含量和NOS活力,并进行相关分析,以期能有助于解释矽尘对肺的作用.
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军团菌巨噬细胞感染增强蛋白研究及其应用前景
军团病是近20年来新发现的传染病之一，主要是由嗜肺军团菌引起，症状以肺炎为主。1976年7～8月间，在美国费城召开的第58届退伍军人年会上首次暴发流行，故此以军团病或退伍军人病命名。迄今为止，我国已发生10多起小规模的暴发，在肺部感染性疾病中，军团菌肺炎占有很重要的比例。 军团菌是一种机会致病菌，广泛存在于天然水和土壤中。目前研究表明，军团菌属的细菌包含40多个种，其中至少有6个种的细菌有2个以上的血清型，19个种可以引起人患军团病［1，2］。人因吸入含有军团菌的气溶胶而感染，军团菌能侵入肺泡巨噬细胞以及其他的吞噬细胞内，并在其中寄生而不被杀灭，继续存活、繁殖，从而导致细胞破裂，释放出细菌及毒素和被破坏的细胞本身的有害物质，造成组织破坏［3］。 80%～90%的军团病是由嗜肺军团菌引起的，嗜肺军团菌通过“缠绕吞噬”方式被吞噬，能抑制吞噬体-溶酶体复合物的形成，并抑制吞噬细胞吞噬体酸化作用［4］。
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通络化纤合剂对矽肺患者AM介导的肺成纤维细胞的干预
目的:探讨通络化纤合剂对矽肺患者肺纤维化的防治作用;方法:将人胚肺成纤维细胞(FB)分为6组:肺泡巨噬细胞(AM)粉尘刺激组,AM粉尘加中药干预高、中、低剂量组、无粉尘刺激组和空白对照组.比较各组FB中TGF-β1和TGF-β1和M型胶原蛋白的表达;结果:AM粉尘刺激组和无粉尘刺激组FB中TGF-β1和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显增加(P<0.01或0.05).AM粉尘加中药干预高、中、低剂量组与AM粉尘刺激组和无粉尘刺激组比较有显著性差异(P<0.01或0.05),且中药干预高剂量组＜中剂量组＜低剂量组;结论:中药通络化纤合剂能够对抗AM诱导与粉尘刺激而形成的矽肺纤维化作用,其机制可能与下调FB TGF-β1和Ⅲ型胶原蛋白有关.而且其作用与剂量呈正相关.
关键词： 通络化纤合剂 矽肺 TGF-β1和Ⅲ型胶原蛋白 肺泡巨噬细胞 二氧化硅 -
通腑利肺作用机制的实验研究
目的 从整体、细胞、分子3个层面探讨通腑法通腑利肺的作用机制.方法 将40只SD大鼠随机等分为正常组、模型组、解扎组及治疗组,每组各10只,采用体外直肠不全结扎法造模,治疗组于术后48 h从体外解除直肠结扎丝线并继续常规饲养,同时每天以大承气汤灌胃2次,每只每次2 ml,服用2天.采用放射免疫分析法检测各组血清IL-8含量,RT-PCR法检测肺组织TNF-α mRNA水平,检测各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞(PAM)死亡百分率.结果 模型组大鼠血清IL-8含量较正常组明显增加(P＜0.01),解扎组与治疗组IL-8含量较模型组明显降低(P＜0.05,P＜0.01);治疗组较解扎组明显降低(P＜0.05).解扎组、治疗组BALF中PAM总数较模型组升高,PAM死亡百分率较模型组降低(均P＜0.05);治疗组BALF中PAM死亡百分率较解扎组降低(P＜0.05).模型组TNF-α mRNA表达明显高于正常组,给予大承气汤治疗可降低肺组织TNF-α mRNA表达.结论 通腑法对损伤肺组织起保护作用.
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血浆内皮素-1含量变化对哮喘病发病影响的初步探讨
内皮素-1(ET-1)是已知强的支气管平滑肌收缩剂,肺泡巨噬细胞(Am)是支气管肺泡灌洗液的主要成分,可释放多种活性介质参与哮喘病[1].目前对Am是否释放ET-1参与哮喘病发病了解甚少,为此本文测定了哮喘患者血浆及体外Am培养时释放的ET-1水平,现报道如下.
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白细胞介素-8的临床意义
白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)是近年由多家实验室发现的细胞因子; 曾有不同命名:如中性粒细胞激活蛋白(NAP-1),白细胞粘附抑制因子(LAF),T淋巴细胞趋化因子TCF).IL-8在炎症因子IL-1、TNF及脂多糖刺激下由多种细胞合成表达. 内皮细胞、T淋巴细胞、肺泡巨噬细胞、肝细胞、滑膜细胞、成纤维细胞和中性粒细胞等均可产生IL-8, 其中以血单核细胞产量为丰富.基因工程IL-8由72个氨基酸组成, 分子量为8kDa.
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铜绿假单胞菌的信号分子3-oxo-C12-HSL促进小鼠MH-S肺泡巨噬细胞自噬
目的 探讨3-oxo-C12-HSL对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞自噬的影响.方法 用LasI基因(3-oxo-C12-HSL合成基因)缺失型和野生型的铜绿假单胞菌(PA)菌株的培养物上清液以及化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子处理MH-S细胞,激光共聚焦荧光显微镜观察LC3-GFP荧光斑点以及Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值来监测自噬的形成,同时检测p62的降解以及氯喹对LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的影响来监测自噬流(autophagic flux)的变化.结果 野生型PA菌株的培养物上清液使MH-S细胞LC3-GFP荧光斑点增多(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.01),LasⅠ基因缺失型PA菌株不能引起上述自噬相关指标的改变.化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子能够明显增加自噬体数量,上调LC3Ⅱ的表达(P<0.01);自噬底物p62随着3-oxo-C12-HSL作用时间的延长而进行性降解,溶酶体抑制剂氯喹可增强3-oxo-C12-HSL引起的LC3Ⅱ累积(P<0.05,P<0.01).结论3-oxo-C12-HSL可增加MH-S细胞的自噬水平.
关键词： 自噬 3-oxo-C12-HSL 肺泡巨噬细胞 铜绿假单胞菌 -
TNF-α对小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体表达的影响
本研究旨在通过观察TNF-α对肺泡巨噬细胞(AM)清道夫受体(SR)、CD14表达的影响,探讨TNF-α在内毒素血症时AM由早期防御性(清除、灭活内毒素)向后期效应性(释放大量的致炎与抗炎因子)转变中的作用.分离培养小鼠AM,以不同剂量TNF-α(0,0.001,0.01,0.1,1,10,100μg/L)刺激细胞16h或以100μg/L TNF-α刺激细胞不同时间(0,2,4,6,8,12,16,24h),采用免疫细胞化学及RT-PCR方法观察SR、CD14表达变化.结果显示,以低至0.1μg/L TNF-α刺激16h或100μg/L TNF-α刺激6h以上就能显著增强CD14并抑制SR蛋白的表达,实验同时显示,CD14mRNA、SRmRNA表达也显著增强,SRmRNA表达变化与SR蛋白表达趋势不一致.研究结果提示,TNF-α能通过增强CD14蛋白表达并抑制SR蛋白表达而在内毒素血症时小鼠AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用.
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IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体及CD14表达的影响
本研究旨在观察IL-10对肺泡巨噬细胞(AM)、清道夫受体(SR)、CD14表达的影响,探讨IL-10在内毒素血症时防止AM由免疫防御向炎症效应转变中的作用.分离培养小鼠AM,以不同剂量(0,0.01,0.1, 1,10,100μg/L)IL-10刺激细胞16h或以100μg/L IL-10刺激细胞不同时间(0,2,4,6,8,12,16h),采用免疫细胞化学及RT-PCR方法观察SR、CD14表达变化.结果显示低至10μg/L IL-10刺激16h或100μg/L IL-10刺激12～24h能显著增强SRmRNA并抑制CD14mRNA表达,SR蛋白表达也显著增强,但CD14蛋白表达无明显变化.IL-10刺激下对SR蛋白表达的增强能降低AM对LPS的反应性,在内毒素血症时防止AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用.
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煤尘致肺泡巨噬细胞氧化损伤的细胞化学研究
目的探讨煤尘致肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM),损伤过程中是否存在着氧化损伤机制. 方法应用细胞化学法显示煤尘作用于AM产生的和H2O2、并做定量测定及相关分析,以Mg2+-ATPase组织化学染色作为检测膜变化的指标. 结果煤尘致AM产生的氧自由基较矽尘的少,同时细胞的形态结构和膜酶的损伤程度也较低. 结论 (1)应用抗氧化剂可减弱煤尘对AM所致的损伤,进而预防肺成纤维细胞增殖;(2)与矽尘相比,煤尘致AM氧化损伤的程度较弱;(3)形态学方法定位显示自由基较之自由基总体测定技术更能直观、具体地阐明细胞损伤的实际状况.
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微管相关蛋白1轻链3及 Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达
目的：观察自噬相关蛋白---微管相关蛋白1轻链3（ LC-3）、Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达，从细胞自噬角度探讨硅沉着病形成的分子机制。方法50只成年雄性SD大鼠随机分为2组（ n＝25）：对照组和硅沉着病模型组，每组再分5个时相组。采用非暴露气管灌注二氧化硅（ SiO2）粉尘混悬液法（50g／L）建立大鼠硅沉着病模型。分别于造模后1、3、7、14及28 d分批处死5只大鼠，进行原位支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞，进行培养纯化和富集后用于后续研究。 HE染色及透射电子显微镜观察肺泡巨噬细胞形态学改变；免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1的表达及分布；免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比模型组肺泡巨噬细胞体积较大，胞质丰富，部分细胞内可见硅沉着吞噬颗粒，电镜下可见自噬体形成；模型组LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多（P＜0．05），1 d即开始增多，随着时间的延长表达逐渐增多，至14 d时达高峰（P＜0．05），28d时回落，但仍高于对照组的表达。结论在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中有自噬的激活，肺泡巨噬细胞自噬参与了大鼠硅沉着病的病理进程。
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双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠NO水平的影响
目的研究双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞上清液NO水平的影响. 方法以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型,用60 mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠,杀鼠取肺,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用LPS刺激培养72 h,同时设有感染组和正常对照.用NO试剂盒分别检测大鼠血清和肺泡巨噬细胞上清液NO活性. 结果感染组大鼠血清、肺泡巨噬细胞上清液原液以及经LPS刺激后肺泡巨噬细胞上清液NO浓度分别为(167.3±23.1)、(141.6±18.0)和(129.5±28.4) μmol/L,治疗组分别为(111.8±40.6)、(136.3±35.1)和(129.9±14.2) μmol/L,正常对照组分别为(87.2±32.1)、(109.8±18.0)和(136.2±30.5) μmol/L,可见感染组和治疗组大鼠NO水平均高于相应的正常对照,治疗组NO水平低于相应的感染组. 结论卡氏肺孢子虫感染可能引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平NO,经双氢青蒿素治疗后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞分泌NO水平降低.
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还原型谷胱甘肽对肺泡巨噬细胞凋亡的影响
肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage, AM）是肺部防御病原微生物和肺损伤的第一道防线，AM凋亡的异常可影响肺免疫防御的完整性。中性粒细胞（PMN）肺内聚集是导致肺损伤的重要因素，PMN释放介质对AM有一定的影响。我们采用体外培养细胞方法原代培养大鼠AM，分离并激活PMN，收集上清液与AM共同孵育，观察AM的形态变化，测定培养上清液中LDH和NO的释放情况，并以原位凋亡检测法和免疫组化测定Fas等反映AM凋亡的变化，以期研究还原型谷胱甘肽（R-GSH）对AM凋亡的影响。
