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二氧化氮对肺组织匀浆某些生化指标的影响
二氧化氮(NO2)是氮氧化物在空气中的主要存在形式,是城市环境污染物的重要组成部分,可诱发肺组织损伤.但致肺损伤的机理尚不十分清楚.NO2本身是自由基,可能通过脂质过氧化作用破坏肺组织细胞[1].但在动物实验,实验条件不同,结果也不一致.本实验在体外直接观察NO2对肺匀浆某些生化指标的影响.
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染矽尘大鼠肺组织匀浆一氧化氮含量、一氧化氮合酶活力的研究
研究表明[1],当暴露于矽尘等炎性刺激物作用时,肺泡巨噬细胞和肺中性粒细胞一氧化氮(nitricoxide,NO)生成增加,并上调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)基因表达.但是,有研究[2]认为矽尘并不能够直接增加培养的肺泡巨噬细胞产生NO;还有研究认为NO可能是肺纤维性结节形成的调节因子[3].这些研究提示NO及NOS的变化与矽尘对肺的作用有关.本研究测定了染尘后不同处理时点肺匀浆NO含量和NOS活力,并进行相关分析,以期能有助于解释矽尘对肺的作用.
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中药清胰汤治大鼠重症急性胰腺炎时急性肺损伤的比较
目的:探讨中药(清胰汤)、糖皮质激素(地塞米松)、抗生素(凯复定)和生长抑素(善宁)在治疗重症急性胰腺炎(severeacute pancreatitis,SAP)时急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制,为临床用药提供确切的理论依据.方法:采用胰管逆行注射15 g/L去氧胆酸钠制成大鼠重症急性胰腺炎肺损伤模型.实验选用纯雄性健康Wistar大鼠共65只,质量220-250 g之间,随机分成6组:假手术对照组(SHAM,n=10);SAP模型组(SAP,n=20);SAP+善宁治疗组(SS,n=10);SAP+地塞米松治疗组(DEX,n=10);SAP+凯复定治疗组(KEF,n=10);SAP+清胰汤治疗组(QYT,n=10);分别于造模后24 h活杀,测定动脉血气,血清淀粉酶的含量,血清内毒素及血清和肺组织匀浆中TNF,IL-6,MDA,SOD的含量,肺湿/干系数以及肺组织病理学改变.结果:SAP模型组血清内毒素,血淀粉酶,血清及肺组织匀浆中TNF,IL-6,OFR均较假手术对照组(SHAM)明显升高(P<0.01).动脉血气显示肺损伤严重,肺湿/干比值较SHAM组明显升高,肺通透性明显升高,肺病理学形态改变加重.中药治疗组各检测指标均较模型组明显改善,其中LPS,TNF,IL-6下降显著.善宁治疗组在抑酶作用上优于其他治疗组.地塞米松治疗组对改善动脉血气,肺湿/干比率有明显作用.结论:中药清胰汤,通过保护肠道屏障,减少了细菌移位,降低血清中内毒素水平,防止过氧化损伤,纠正机体致炎和抗炎系统失衡等多方面机制而对肺脏起到全面保护作用.地塞米松,善宁,凯复定在治疗ALI过程中均起到一定保护作用,通常在某个致病因素水平降低较中药显著,但并未降低整体死亡率,总体治疗效果较中药组差,故提倡中西医结合治疗
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慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究
我们探讨细胞间粘附分子1(ICAM-1)、中性粒细胞趋化因子巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)及中性粒细胞活性产物髓过氧化物酶(MPO)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道炎症中的作用。 材料与方法 雄性二级Wistar大鼠48只,体重270±20 g,随机分为4组,每组12只。(1)模型组:用每日熏香烟及两次气管内滴入200 μg脂多糖法制作COPD大鼠模型[1]。布地奈德组和异丙托溴铵组先按模型组制备模型。(2)布地奈德组:第8天起每日雾吸布地奈德溶液0.5 mg/ml×4。(3)异丙托溴铵组:第8天起每日雾吸异丙托溴铵溶液0.25 mg/ml×4。(4)对照组:不做任何干预。4周后采用小动物呼吸功能测定仪(北京宣武医院),测定大鼠分钟通气量(VE)、呼气峰流速(PEF)及0.3秒用力呼气容积( FEV0.3)后,即刨腹抽取腹主动脉血处死动物。于4 ℃离心取血清,-20 ℃冻存。左肺行支气管肺泡灌洗(3 ml×2次,回收率60%~70%),灌洗液(BALF)甩片行细胞计数及分类计数,离心后上清液-20 ℃冻存。取右下肺组织用组织匀浆器在冰浴下制成肺组织匀浆,4 ℃,10 000 r/min 离心15 min,取上清-20 ℃冻存。于右肺中叶矢状面大周径处横贯取材,制成石蜡切片和冰冻切片。
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兔急性肺动脉栓塞支气管肺泡灌洗液和肺组织匀浆中血栓素B2及6-酮前列素F1α的变化
急性肺栓塞(acute pulmonary embolism,APE)发病率和病死率均很高,APE时栓子堵塞肺动脉,造成机械性肺毛细血管前动脉高压,肺血管床减少,肺循环阻力增加,肺动脉压力卜升.肺动脉高压可以导致右心室衰竭和患者早期死亡.但是机械阻塞程度往往与血流动力学改变程度不相符.目前认为血管活性物质在肺栓塞早期的血流动力学改变方面起重要作用,是导致急性肺血栓栓塞患者即刻和首发症状出现2 h内高死亡率的重要因素[1].有学者认为血栓素A2、前列环素与急性肺损伤肺动脉高压有关[2].
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脓毒症肺损伤大鼠鞭毛蛋白含量变化及其意义
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是急性肺损伤(ALI)的严重阶段,脓毒症为其常见病因.近的研究表明[1-3],革兰阴性菌产生的鞭毛蛋白有高强致炎作用,推测鞭毛蛋白可能是急性肺部炎症过程的重要激发物.但在脓毒症诱导ALI时,鞭毛蛋白有何变化目前尚不清楚.本实验通过观察脓毒症肺损伤大鼠外周血血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织匀浆中鞭毛蛋白的含量,旨在阐明ALI发病机制,为其防治提供新的理论及实验依据.
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氨溴索对低氧性肺动脉高压大鼠部分细胞因子的影响
细胞因子在气道的持续存在是慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者病情反复发作、恶化发展的重要原因之一,而缺氧又是COPD患者病情进行性发展的主要原因之一,可介导大鼠气道细胞因子的释放从而导致肺血管结构重建.体外及动物实验均表明,氨溴索可抑制细胞因子的合成和释放.本研究意在观察氨溴索对慢性缺氧大鼠血液及肺组织匀浆中细胞因子的影响.
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高浓度氧对新生鼠肺血红素加氧酶1与一氧化碳的影响
2002年7月-2003年1月,我们利用新生鼠高氧肺损伤模型,观察高氧对新生鼠肺血红素加氧酶1(HO-1)及血浆、肺组织匀浆一氧化碳(CO)含量的影响,以了解HO-1/CO系统在此过程中的变化.
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应用SELDI-TOF-MS技术筛选肺鳞癌和肺腺癌患者差异蛋白的研究
目的 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选出不同病理类型肺癌患者血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺癌组织中的差异蛋白,并探讨其临床意义.方法 选用WCX-2芯片、SELDI-TOF-MS技术检测20例肺鳞癌、20例肺腺癌和20例肺良性病变患者血清、BALF和肺组织匀浆的蛋白质谱,用Biomarker Pattern软件分析肺鳞癌和肺腺癌的差异蛋白并初步建立诊断模型.结果 ①肺鳞癌组与肺良性病变组:在血清、BALF、肺组织匀浆中发现存在2、9、8个差异蛋白峰(P<0.05),分别选用其中质荷比为5 124.24、7 967.29联合10 843.45、7914.59联合8709.66的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断肺鳞癌的灵敏度分别为85%、80%、75%,特异度分别为65%、80%、90%,正确率分别为75%、80%、83%,阳性预测值分别为71%、80%、88%,阴性预测值分别为81%、80%、78%,其相对应ROC曲线下面积分别为0.750、0.916、0.930.②肺腺癌组与肺良性病变组:在血清、BALF、肺组织匀浆中发现存在8、9、7个差异蛋白峰(P<0.05),分别选用其中质荷比为9295.79、7923.01、2452.49的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断肺腺癌的灵敏度分别为75%、80%、70%,特异度分别为65%、90%、85%,正确率分别为70%、85%、78%,阳性预测值分别为68%、89%,82%,阴性预测值分别为72%、82%、71%,其相对应ROC曲线下面积分别为0.844、0.933、0.825.结论 肺鳞癌和肺腺癌BALF及肺组织匀浆中的差异蛋白较血清多,诊断效率比血清高,肺鳞癌BALF中质荷比为7967.29和10843.45的差异蛋白峰联合、肺组织匀浆中质荷比为7914.59和8709.66的差异蛋白峰联合建模及肺腺癌BALF中质荷比为7923.01的差异蛋白峰建立分类树诊断模型,其诊断的灵敏度、特异度和正确率可达到75%~90%,有可能作为诊断肺鳞癌和肺腺癌的标志蛋白.
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高氧肺损伤大鼠晚期糖基化终末产物受体的表达及意义
目的 探讨高氧致新生大鼠肺组织损伤过程中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达情况.方法 将16只3日龄新生大鼠依据是否高浓度氧暴露随机分为空气组(空气环境下暴露7天)大鼠和高氧组(95%氧暴露7天)大鼠,并进行比较观察.在此实验结束后,留取大鼠的肺组织标本和静脉血标本,通过光镜观察并盲法评分比较其肺组织辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC)、RT-PCR法检测肺组织匀浆RAGEmRNA表达、免疫组化法检测肺组织RAGE的表达情况、ELASA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)TNF及sRAGE的水平.结果 高氧组大鼠组肺组织损伤RAC降低(t=14.87,P=0.000)、肺组织RAGE mRNA增加(t=9.7109,P=0.000)、RAGE蛋白表达增加、BALF TNF-α(t=9.807,P=0.000)增高、sRAGE水平下降(t=3.7484,P=0.000).结论 RAG通路在新生大鼠高氧引致肺组织损伤中具有重要的作用.
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8Hz和16Hz单次次声作用后大鼠肺组织匀浆中细胞因子TNF-α及IL-8的变化
观察次声作用后肺组织匀浆中细胞因子TNF-α及IL-8的变化.方法 SD大鼠120只随机分为正常对照组、次声作用组,置本校研制的次声压力仓内致伤.次声作用组以8 Hz和16 Hz次声,声压分别为90、100、110、120、130 dB的强度,每次作用2 h.结果 8 Hz 90~130 dB单次作用后TNF-α及IL-8无明显变化.16 Hz 90 dB次声单次作用即可引起肺组织匀浆中TNF-α及IL-8的变化,与正常对照组相比有显著差异(P<0.05).结论在一定作用强度范围内,可较明显地反应其频率作用的特性.
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肢体缺血再灌注致肺损伤时出入肺血CO的变化
目的:继NO之后,另一种可弥散性气体分子CO,逐渐引起人们的重视.已发现CO与NO相似,在机体多种生理和病理状态中发挥信使作用.体内的CO由血红素氧合酶(HO)催化血红素分解产生后进入血液,与血红蛋白(Hb)结合形成碳氧血红蛋白(COHb)并由肺排出.研究证明,非特异性炎症刺激及氧化性损伤可诱导肺组织诱导型血红素氧化酶(HO-1)的表达.但HO/HO-1及其产物CO在再灌注性肺损伤中的变化及意义尚不明了.方法:本实验采用夹闭SD大鼠腹主动脉末段造成双后肢缺血及再灌注性肺损伤模型,观察了假手术组,缺血4 h组及缺血后再灌注2、4、8、16 h组肺组织的组织学变化、肺组织匀浆中脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)变化.同时以出入肺血中COHb百分比的差异衡量肺组织中CO的变化,应用CO-血氧分析仪测量了各组出入肺血中的COHb百分率的变化.结果:假手术组和单纯缺血组肺组织结构基本正常,再灌注后肺组织出现水肿、充血及炎性细胞浸润伴局部肺不张的病理变化.与假手术组和单纯缺血组相比较,再灌注后肺组织中的MDA含量明显增高,而SOD活性则显著降低.各组出肺血中的COHb百分比均高于入肺血,但再灌注后4、8、16 h各组出肺血的COHb的百分比较假手术组和单纯缺血组均显著增高,而入肺血各组的COHb均无显著差异.结论:肢体缺血再灌注可导致肺损伤,肺组织脂质过氧化增强;同时证明肺组织在正常状态下及此种疾病时均可产生CO,但在再灌注性肺损伤时产生显著增多,CO产生增多的病理生理意义有待于进一步探讨.
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大鼠肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮的作用
目的:观察肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide syn thase,iNOS)/一氧化氮(nitric oxide,NO)的变化和作用.方法: 夹闭大鼠腹主动脉下段造成双后肢缺血及再灌注后肺损伤模型.将动物随机分为4组:假手术(sham)组,缺血4 h再灌注8h组(I/R) 、Sham+氨基胍(aminoguanidine,AG)组和I/R+AG组.后两组于再灌注2 h或相应的假手术时间点给予舌静脉注射iNOS阻断剂-AG,前两组给予等量溶剂处理.分别以Northern blotti ng和免疫组化的方法检测肺组织中iNOS mRNA和蛋白表达的变化;以硝酸还原法检测肺组织匀浆中NO代谢产物NO-2/NO-3含量的变化;以硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆中丙二醛(mal ondialdehyde,MDA)含量的变化;检测肺组织学变化和肺组织湿重和干重之比(wet-to-dryw eight ratio,W/D)的变化.结果: I/R组肺组织出现水肿、出血和炎症细胞(主要是多形核白细胞)聚集等病理变化.与sham组相比,I/R组肺组织中MDA含量、W/D以及NO-2/ NO-3含量均显著增高(P<0.05).Northern blotting检测显示I/R组肺组织中iN O S mRNA表达增强,免疫组化检测,可见I/R组肺组织中iNOS蛋白表达增强,阳性颗粒几乎遍布所有肺组织. 与I/R组相比,I/R+AG组肺组织中NO-2/NO-3含量、MDA含量以及肺组织W/D均显著降低( P<0.05),肺组织形态学病理变化明显减轻.Sham组与sham+AG组之间各项指标均无显著差异 .讨论本实验结果显示大鼠双侧后肢肢体缺血再灌注可以导致肺损伤的发生,同时伴有肺组织中iNOS表达和NO生成增多,应用iNOS阻断剂-AG减少NO生成,可显著减轻肢体缺血再灌注所导致的肺损伤,表明肺组织中iNOS的诱生以及NO的过量生成具有损伤作用,参与介导了此种肺损伤的发生.结论: 肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中iNOS表达的上调以及NO的过量生成参与介导了此种肺损伤的发生.
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大鼠肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内一氧化氮对一氧化碳的影响及其分子机制
目的: 观察肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内一氧化氮(NO)对一氧化碳(CO)的影响及其分子机制.方法: 夹闭大鼠腹主动脉下段造成双后肢缺血及再灌注后肺损伤模型.将动物随机分为4组:假手术(sham)组、缺血4 h再灌注8 h组(1/R)、sham +氨基胍(aminoguanidine,AG)组和I/R +AG组.后两组于再灌注2 h或相应的假手术时间点给予舌静脉注射诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase,iNOS)阻断剂-A G,前两组给予等量溶剂处理.分别以Northern blotting和Western blotting的方法检测肺组织中诱导型血红素氧化酶(hemeox yg enase-1,HO-1)mRNA和蛋白表达的变化;免疫组化的方法检测核转录因子一活化蛋白-1(act ivator protein-1,AP-1)的两个亚单位-c-fos和c-jun的免疫组化染色的变化;以CO血氧检测仪检测动脉血内碳氧血红蛋白(COHb)水平变化;以硝酸还原法检测肺组织匀浆中NO代谢产物NO-2/NO-3含量的变化.结果与sham组相比,I/R组肺组织中NO-2/NO -3含量和血内COHb水平显著增高(P<0.05),肺组织中HO-1mRNA和蛋白表达增强, 肺组织中c-fos和c-jun的免疫组化染色亦显著增强.与I/R组相比,I/R+AG组肺组织中N O-2/NO-3含量显著减少(P< 0.05),同时血内COHb水平、肺内HO-lmRNA和蛋白表达以及c-fos和c-jun的免疫组化染色均显著减弱.讨论我室研究已证实肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中iNOS和HO-l表达以及NO和CO的生成显著增多,并发挥不同的重要作用.本实验通过观察iNOS阻断剂-AG减少NO 产生后对CO的影响,发现肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中iNOS的诱生以及NO的大量生成能够促使CO产生增多;通过对HO-l表达的检测表明,NO对CO的影响是通过调控HO-l表达所实现的,而AP-l可能参与了NO对HO-1表达调控作用的信号转导机制.结论: 肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内iNOS诱生以及NO的过量生成具有上调HO-l表达使CO产生增多的作用,核因子AP -l可能参与了NO对HO-l调控的信号转导机制.
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大鼠肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内一氧化碳对一氧化氮的影响
目的: 观察肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内一氧化碳(CO)对一氧化氮(NO )及其衍生物过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的影响.方法: 夹闭大鼠腹主动脉下段造成双后肢缺血及再灌注后肺损伤模型.将动物随机分为4组:假手术(sham)组、缺血4 h再灌注16 h(1/R )组、 Sham十锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)组和I/R+ZnPP组.后两组于再灌注前 15 min或相应的假手术时间点给予舌静脉注射血红素氧化酶(heme oxygenase,HO)阻断剂-ZnPP,前两组给予等量溶剂处理.以CO-血氧检测仪检测动脉血内碳氧血红蛋白(COHb)水平变化;以Northern blotti ng检测肺组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS) mRNA表达的变化;以比色法检测肺组织NOS活性;以硝酸还原法检测肺组织匀浆中NO代谢产物NO- 2/NO-3含量的变化.结果:与sham组相比,I/R组血内COHb水平、肺组织中NO-2/N O-3含量和NOS活性均显著升高(P<0.05),iNOS mRNA表达以及NT的免疫组化染色显著增强表达.与I /R组相比,I/R+ZnPP组血内CO Hb水平显著减低(P<0.05),肺组织中NO-2/NO -3含量和NOS活性均显著升高(P<0.05);iNOSmRNA表达未见显著变化.讨论:我室研究已证实肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中iNOS和HO-l表达上调、NO和CO的生成显著增多,并发挥不同的重要作用. 本实验通过观察HO阻断剂-ZnPP减少CO产生后对NO的影响,发现抑制HO活性使CO产生减少后 ,肺组织中NO生成增多,表明肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中HO-1的诱生以及CO的大量生成具有减少NO产生的作用;通过对iNOS mRNA表达和NOS活性的检测表明,CO对NO的影响是通过影响NOS活性而实现的,可能与iNOS mRNA表达无关.结论:肢体缺血再灌注致肺损伤时肺内HO-l的诱生以及CO的大量生成具有抑制NOS活性从而使NO产生减少的作用.
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痰热清注射剂对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤治疗作用的研究
痰热清注射剂是由黄芩、熊胆粉、山羊角粉、金银花、连翘等五味药物组成的中药制剂,五药相配具有清热解毒、化痰解痉的功效.在临床治疗中,痰热清注射液主要用于治疗呼吸道感染性疾病,本实验采用流感病毒FM1感染小鼠作为模型,研究痰热清注射液对其肺损伤及免疫功能的影响并阐明其作用机制,为痰热清注射液的临床应用提供理论依据.痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用、血凝滴度、肺指数的影响:结果发现,痰热清注射液大、中、小治疗组小鼠对流感病毒FM1感染后的死亡保护率分别为(45.45、63.63、54.54%),模型对照组为(33.33%),与对照模型组比较,具有明显的保护作用,P值分别<0.05;痰热清注射液对小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低,与流感病毒FM1感染模型组比较,差异显著,P<0.05;痰热清注射液治疗组小鼠肺组织形态结构较为完整,偶可见少量淋巴细胞的浸润;痰热清注射液治疗组小鼠肺指数与模型组小鼠比较,显著降低,P<0.05.
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大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究
β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用.构建大鼠β-防御素-2(rBD2)重组质粒pBK-CMV-rBD2和pCDNA-3.1-Myc-His(+)-rBD2,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入,检测其在气管和肺组织表达情况,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率.结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2-His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达,说明脂质体包裹的重组β-防御素-2 pBK-CMV-rBD2质粒可有效转染气道上皮组织.肺细菌清除率实验显示构建重组质粒pBK-CMV-rBD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率(n=8,p<0.01).本研究表明β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能,可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值.
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8 Hz和16 Hz次声多次作用后TNF-α及IL-8的变化
目的观察次声作用后肺组织匀浆中细胞因子TNF-α及IL-8 的变化. 方法 SD大鼠190只随机分为正常对照组(2组),次声作用3,7,14,21次4组,置第四军医大学研制的次声压力仓内致伤. 次声作用组以8 Hz,声压分别为120, 130 dB和16 Hz声压为90, 130 dB的强度,每次作用2 h,连续21次. 结果 8 Hz 120, 130 dB次声作用3, 7, 14次后TNF-α及IL-8与正常对照组相比有显著差异(P<0 .01),作用21次后与正常对照组相比无显著差异(P>0.05). 16 Hz 90, 130 dB的次声作用3, 7, 14次后 TNF-α及IL-8与正常对照组相比有显著差异(P<0.01),作用21次后与正常对照组相比无显著差异(P> 0.05). 结论①次声的累积作用证明了细胞发生的变化性质和程度主要与次声作用的声压强度和时间(作用次数) 有关;②次声作用后肺组织匀浆中TNF-α和IL-8形成时相性的反应过程. 这一改变可能与非炎症细胞结构和功能的原发性损伤有关. 同时提示肺对次声的作用存在一定的适应表现.