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补肾活血颗粒对帕金森病模型大鼠黑质NQO1和HO-1表达的影响
目的 探讨补肾活血颗粒对帕金森病(PD)模型大鼠黑质中醌氧化还原酶(NQO1)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 采用6-羟基多巴损毁黑质的方法建立PD大鼠模型.将20只造模成功的大鼠随机分为模型组10只和治疗组10只,另设正常组10只.治疗组以补肾活血颗粒用生理盐水溶解灌胃,正常组、模型组以等量生理盐水灌胃,每日1次,连续8周.灌胃结束后用Western blot法检测大鼠黑质NQO1和HO-1的表达变化.结果 与正常组比较,模型组NQO1和HO-1蛋白表达均明显减少(P ＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,治疗组NQO1和HO-1表达均明显增加(P＜0.01);治疗组与正常组比较,NQO1和HO-1表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 补肾活血颗粒干预PD的作用机制可能与上调NQO1和HO-1的表达有关.
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夏佛塔苷对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝的保护作用
目的:探讨夏佛塔苷对高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝的(NAFLD)保护作用.方法:72只雄性C 57B L/6小鼠分成6组:正常对照组,模型组,熊去氧胆酸组(60mg/kg),夏佛塔苷低、中、高剂量组(20、40、80mg/kg),灌胃给药8周,除正常对照组外均采用高脂饲料饲养建立NAFLD模型.检测血清和肝组织相关生化指标;观察肝脏组织形态;运用qRT-PCR检测肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,夏佛塔苷高剂量能够显著降低肝组织MDA含量而升高SOD的含量(P＜0.01),提高肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),显著减轻肝脏脂肪变性和炎细胞浸润.结论:夏佛塔苷对高脂饮食诱导的NAFLD有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1途径降低组织活性氧的水平,进而减轻脂肪性导致肝损伤.
关键词： 夏佛塔苷 非酒精性脂肪性肝病 核转录因子E2相关因子 血红素加氧酶 氧化应激 -
血红素加氧酶-1在大承气汤改善脂多糖致小鼠急性肺损伤中的作用
目的:观察血红素加氧酶(HO)-1在大承气汤(DD)改善脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤(ALI)中的作用.方法:将75只雄性昆明种小鼠随机分为对照组、LPS组(经气管内滴注LPS复制ALI模型)、DD+ LPS组、DD+LPS+ ZnPP(锌原卟啉,HO-1特异性阻断剂)组和DD组.各组小鼠鼠于给药后6h处死.测定肺系数；光镜观察肺组织形态学改变；检测支气管肺泡灌洗液(BALF)的中性粒细胞(PMN)数目和蛋白含量的变化；采用RT-PCR和Western blot方法检测肺组织中HO-1 mRNA和蛋白表达的变化.结果:气管内滴注LPS可引起小鼠肺组织明显的形态学改变；BALF中PMN数目和蛋白含量均增加.肺组织中HO-1 mRNA和蛋白表达均增加.预先给予DD再气管内滴注LPS,肺组织损伤减轻,BALF中PMN数目和蛋白含量均减少,而肺组织中HO-1 mRNA和蛋白表达与LPS组相比均增加.HO-1抑制剂ZnPP可抑制DD改善肺损伤的作用.结论:DD改善LPS所致小鼠ALI的作用与其可上调HO-1 mRNA和蛋白表达有关.
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大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究
目的:研究大苞雪莲石油醚部位(petroleum ether extract of Saussurea involucrata,PESI)对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制.方法:首先采用常压密闭缺氧模型进行缺氧大鼠的PESI剂量依赖性实验,给药剂量分别为125,250,500 mg·kg-1,单次腹腔注射给药,终确定的佳给药剂量为PESI高剂量.然后取90只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组、乙酰唑胺250 mg·kg-1组和大苞雪莲石油醚部位高剂量组,每组又按不同缺氧时间分为3个亚组,各亚组10只大鼠.采用与上述相同的方法缺氧和给药,并于缺氧处理0,3,6h后处死大鼠,取脑组织进行常规组织学观察和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫组化染色,并用Real-time RT-PCR检测HIF-1α,促红细胞生成素(EPO),血红素加氧酶(HO-1)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)基因表达情况,用蛋白印迹法检测HIF-1α蛋白的表达情况.结果:缺氧模型组脑组织随缺氧时间的延长而出现严重的病理损伤,乙酰唑胺组和PESI高剂量组的损伤情况则明显减轻.基因表达和蛋白印迹检测均发现,PESI高剂量抑制HIF-1α的表达,单纯基因表达检测发现,PESI高剂量增强EPO和HO-1 mRNA的表达,但抑制Caspase3 mRNA的表达.结论:PESI对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护机制可能与其抑制HIF-1α表达、增强血液输氧能力和抗脑细胞凋亡有关.
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慢性阻塞性肺疾病患者HO-1基因启动子微卫星多态性与iNOS表达的关系
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病患者(COPD)血红素加氧酶-1(HO-1)基因启动子微卫星多态性与诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)表达的关系.方法 利用聚合酶链反应(PCR)及免疫组织化学等技术在50例肺癌合并COPD(COPD组)与30例未合并COPD(对照组)的肺组织中检测HO-1基因启动子5'端(GT)n重复序列不同基因型频率分布特征及其iNOS表达的关系.结果 COPD组iNOS强阳性表达率显著高于对照组(P＜O.01).含有L型等位基因(L/L、L/M、L/S)的样本,iNOS表达强阳性率显著性高于不含有L型等位基因(M/M、M/S、S/S)的样本(P＜0.01).结论 HO-1基因启动子(GT)n大量重复序列的个体可能存在着iNOS诱导性表达升高,而与COPD的易感性相关.
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肾性高血压大鼠主动脉血红素加氧酶-1表达增加
目的 探讨肾性高血压时血红素加氧酶(HO)/一氧化碳(CO)系统的变化,以明确血红素加氧酶在肾性高血压发病过程中的意义及作用.方法 ①制作两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,分别于2、4、6、8周记录血压,用放免法测定血浆中血管紧张素Ⅱ的含量.②分光光度比色法测定主动脉微粒体中HO的活性.③用Western blot方法 测定主动脉HO-1蛋白的表达.结果 从术后2周起,2K1C组血压明显高于假手术组(P＜0.01);同时血浆AngⅡ含量显著增加(P＜0.01).2K1C组在4周和6周时主动脉HO活性升高明显(P＜0.05),但8周时有所回降,但仍高于对照组;2K1C组4周时HO-1蛋白含量明显升高,比假手术组高25.38%(P＜0.05).结论 在肾性高血压大鼠,血浆AngⅡ增高诱导了HO-1的表达增加来对抗压力负荷对血管的损害.
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大鼠钙化血管平滑肌细胞血红素加氧酶-CO-cGMP通路的变化
本文旨在观察钙化细胞血红素加氧酶(HO)-一氧化碳(CO)-环磷酸鸟苷(cGMP)系统的改变, 以探讨血管钙化发生的细胞分子机理.利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞(VSMCs),测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性及45Ca沉积;观察HO-1免疫细胞化学染色;测定VSMCs HO-1活性、碳氧血红蛋白(HbCO)的生成及cGMP含量.发现钙化细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性及45Ca沉积均比正常组显著升高.钙化细胞HO-1的表达不均匀,钙化结节中HO-1表达强于正常细胞.与正常平滑肌细胞相比, 钙化细胞的HO-1活性低42.7% [36.4±2.8 pmol/(mg protein*h) vs 63.5±5.3 pmol/(mg protein*h), P＜0.01]; CO含量低39.2%(3.38±0.39 μmol/ mg protein vs 5.56±0.48 μmol/ mg protein, P＜0.05);cGMP含量比正常细胞低78.1% (4.3±0.5 vs 19.6±1.2 pmol/mg protein, P＜0.01).提示钙化血管血红素-HO-CO-cGMP途径功能下调.
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硫化氢在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用
目的探讨硫化氢(H2S)在脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及可能的机制.方法将64只SD大鼠随机分为对照组、LPS组(经气管内滴注LPS复制ALI)、NaHS+LPS组和炔丙基甘氨酸(PPG)+LPS组.给药后4 h或8 h处死,测定肺系数;光镜观察肺组织形态学改变;化学法检测血浆H2S和CO含量、肺组织丙二醛(MDA)含量、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和血红素加氧酶(HO)活性;用免疫组织化学法检测肺组织HO-1蛋白表达及吸光度值.结果气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变;肺系数和肺组织MDA含量增加;血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降;肺组织HO活性和HO-1蛋白表达增强;血浆CO含量增加.预先给予NaHS可显著减轻LPS所致上述指标的改变.而预先给予PPG可加重LPS所致肺损伤,但对CO含量、HO活性和HO-1蛋白表达无明显影响.结论H2S/CSE体系的下调在LPS所致ALI的发病学中有一定作用,而外源性给予一定量的NaHS对肺组织具有保护作用,该作用可能与其抗氧化效应和上调CO/HO-1体系有一定关系.
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内源性CO抑制肾性高血压大鼠离体血管反应性
体内由血红素加氧酶(HO)催化血红索代谢的产物一氧化碳(CO)可通过刺激血管平滑肌的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)和钙激活的钾通道及抑制ET-1和血小板源生长因子-β(PDGF-β)的表达,发挥舒血管的作用.我们曾报道[1],HO/CO系统可降低肾性高血压大鼠的血压.本研究通过体内外实验进一步探讨HO/CO舒张血管平滑肌的可能机制.
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血红素加氧酶-1 在不同年龄大鼠心肺组织中的表达
血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)是内源性一氧化碳(CO)合成的限速酶和关键酶,可将血红素分解成CO、胆红素和铁.HO-1为诱导型,许多刺激因素如重金属、血红素、炎性细胞因子、发热、缺氧等可诱导HO-1表达增高[1].
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脑血红素加氧酶系统的作用研究
血红素加氧酶(HO)是降解血红素的微粒体酶系统,催化降解血红素生成一氧化碳(CO)、胆绿素和铁离子.同工酶HO-1和HO-2广泛分布于脑中,具有不同的调控机制,可能发挥着调节NO水平、抗氧化应激、参与神经元退行性变等重要作用.
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日本血吸虫血红素降解酶系的研究
目的研究日本血吸虫成虫中血红素加氧酶和胆绿素还原酶的活性以及酶的生物学特性. 方法从日本血吸虫成虫的匀浆组织中抽提微粒体蛋白组分并制备匀浆上清,分别用特异性底物检测微粒体和匀浆上清中血红素加氧酶(HO)和胆绿素还原酶(BR)的活性,并研究这两种酶活性的时间依赖性和pH值依赖性. 结果在日本血吸虫成虫的微粒体和匀浆上清中分别检测到HO和BR,其酶的比活性分别为56.7 nmol bilirubin/(mg*min)和43.4 nmol bilirubin/(mg*min).在这两种酶促反应中,10 min前酶促反应速率呈线形上升,15 min后进入平台期,反应趋于饱和.成虫匀浆抽提物体外降解血红素的反应对pH值有依赖性,HO和BR反应的佳pH环境均为pH 8.7. 结论日本血吸虫成虫具有完整的血红素降解酶系统.
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血红素结合蛋白生化特性及应用研究进展
血红素结合蛋白(HPX)是血浆中与血红素结合能力强的蛋白,广泛参与机体多种生理和病理过程.HPX主要的生理功能是结合和转运有毒的游离血红素.新近研究表明,HPX还有抗氧化、抗凋亡、免疫调节、器官保护等多种功能,并参与细胞分化以及细胞外基质重建等生理过程.近年来,有关HPX保护作用机制的研究不断深入,研究结果向临床转化方面也有新的突破,特别是近几年蛋白组学筛选研究发现,HPX可作为肺癌、肝癌、肾癌、结肠癌、子宫肌瘤以及骨关节炎等疾病的阳性标志物.本文综述了HPX生化特性和功能及其可能的临床应用前景的研究进展.
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血红素加氧酶系统与脑保护
缺血和氧化应激是组织损伤的主要机制[1],脑缺血/再灌注等产生的应激反应在导致脑细胞的损伤和死亡的同时,也诱导多种特殊基因表达并合成相关的应激蛋白,其中血红素加氧酶(heme oxygeneases,HO)具有明显的脑保护作用.现就HO的生物学特性、催化产物的生理作用及其脑保护作用的基础研究进行综述.
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一氧化碳和一氧化氮作为神经介质作用的异同
近几年来,关于气体神经介质的概念已得到较多的阐述,尤其是一氧化氮(NO)及其生成酶--一氧化氮合酶(NOS)在生理和病理状态的研究,已经积累了许多的证据.另一种气体介质一氧化碳(CO),及其生成酶--血红素加氧酶(heme oxyge-nase,HO),自从被Snyder等(1993)所提出以后[1],也不断见到有关其生物学特性和生理学功能的报道[2][3][8][20].
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肥胖与非肥胖2型糖尿病大鼠血管内皮依赖性舒张功能变化及高糖/高渗透压机制
背景高血糖以及严格降糖治疗对2型糖尿病患者心血管功能损害与预后的影响存在很大争议.目的 本实验对照研究肥胖与非肥胖糖尿病大鼠血管内皮依赖性舒张功能,研究胰岛素治疗对血管舒张功能的影响以及内皮型一氧化氮合酶/血红素加氧酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS/heme oxygenate,HO)相关的高糖/高渗透压机制.方法 ①采用24周龄2型糖尿病Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty(OLETF)大鼠与Goto-Kakizaki(GK)大鼠,测定离体胸主动脉血管舒张功能,免疫荧光法检测血管eNOS/HO.②另一组GK大鼠注射胰岛素连续10 d降糖治疗后,观察主动脉舒张功能及内膜超微结构.③主动脉以高糖缓冲液(正常缓冲液+50 mmol/L葡萄糖)及高渗缓冲液(正常缓冲液+50 mmol/L甘露醇)孵育5 h后,以Western Blotting法检测血管eNOS/HO含量.结果 ①两种糖尿病大鼠血糖均明显升高,其中以GK大鼠血糖升高为明显[GK(15.6±2.5)比OLETF(9.9±0.4)mmol/L,P＜0.01].OLETF大鼠胰岛素水平较GK明显增高[OLETF(11.5±1.2)比GK(2.1±0.2)μg/L,P＜0.01].②OLETF主动脉内皮依赖性舒张明显减弱、eNOS减少,阻断eNOS可完全阻断OLETF内皮依赖性舒张;GK主动脉内皮依赖性舒张明显增强、血管eNOS/HO明显增加,联合阻断eNOS/HO方可完全阻断GK内皮依赖性舒张.③胰岛素注射使GK血管eNOS/HO水平明显下降、内皮依赖性舒张反应减弱,伴有内膜明显增殖.④高糖及高渗刺激可诱导血管eNOS/HO上调.结论 OLETF大鼠呈明显高胰岛素血症、主动脉内皮依赖性舒张功能降低伴eNOS减少;GK大鼠内皮依赖性舒张增强伴eNOS/HO上调,胰岛素注射减弱GK血管舒张功能并促进内膜增殖.高糖/高渗诱导血管eNOS/HO增加可能参与血管内皮功能的调节.
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不同年龄非肥胖2型糖尿病Goto-Kakizaki大鼠离体主动脉血管收缩与舒张功能
目的 观察比较肥胖2型糖尿病Goto-Kakizaki(GK)大鼠不同年龄时的血糖及血管收缩与舒张功能,探讨其功能变化的可能机制.方法 实验采用6与40周龄雄性GK大鼠.每组6只.同龄Wistar大鼠作对照.记录体质量、血糖以及清醒状态下的尾动脉血压及心率后,麻醉开胸剪取胸主动脉,检测离体血管环的收缩功能及内皮依赖性与非内皮依赖性舒张功能,并留取血清测定胰岛素水平.结果 ①与Wistar大鼠比较,GK大鼠的血糖在6周龄[(8.1±0.4)比(5.8±0.3)mmol/L,P<0.013、40周龄[(17.3±0.8)比(5.6±0.4)mmol/L,P<0.01]均明显升高,血压及胰岛素水平未见明显变化,40周龄GK大鼠心率较Wistar大鼠明显升高.②两组不同年龄GK大鼠血管对60 mmol/L氯化钾及1×10-6～1×10-5mol/L苯肾上腺素的大收缩反应均减弱,但去内皮后40周龄组GK血管对低剂量1×10-8mol/L苯肾上腺素的收缩反应增强.③两组不同年龄GK大鼠血管对乙酰胆碱及硝普钠的舒张反应均较Wistar大鼠显著增强.④6周龄GK大鼠血管对乙酰胆碱的舒张反应可被一氧化氮合酶(NOS)阻断剂完全阻断.而40周龄GK大鼠血管对乙酰胆碱的舒张反应不能完全被NOS阻断剂阻断.剩余的舒张部分可进一步被血红素加氧酶(HO)阻断剂阻断(P<0.01).结论 NOS系统活性的上调可能是GK大鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能增强的主要机制,高龄GK大鼠的血管舒张功能增强可能由于NOS系统与HO系统共同参与调控所致.
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骨髓间质干细胞移植对自发性高血压大鼠心脏纤维化及心功能的影响
目的研究骨髓间质干细胞(MSCs)对于自发性高血压大鼠心脏纤维化的修复作用,探讨MSCs逆转心室重构的可能性. 方法选用12周龄自发性高血压大鼠及同龄Wister鼠作为研究对象,采用密度梯度离心分离健康大鼠MSCs,贴壁培养14天消化传代,采用心腔内注射方法移植细胞,移植剂量为1×106个/只,注射后4周处死动物.检测干细胞移植对于心脏舒张容积、顺应性及心脏结构的影响,研究MSCs对于血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,并对结果进行统计学分析.结果 MSCs干预组大鼠心脏顺应性低于正常对照组,但明显优于未干预组(P<0.05),胶原容积分数及I型胶原含量与未干预组相比也明显降低;同时MSCs还促进心脏局部HO-1的表达(P<0.05).MSCs移植并不增加心室肥厚指数(LV Mass),但可以增加舒张末期心脏容积/体重,改善心脏向心性肥厚. 结论 MSCs移植治疗可以通过调节组织局部胶原的合成与降解,改变心脏局部胶原纤维的含量,从而有效地逆转高血压心脏纤维化的过程,这种结构的变化同样伴有功能的改变.
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葡萄糖和晚期糖基化终产物联合刺激对人单核细胞血红素加氧酶1表达的影响
目的 探讨葡萄糖和晚期糖基化终产物(AGE)联合刺激对人单核细胞THP-1血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响. 方法 分别以15mmol/L葡萄糖、100μg/ml AGE和二者联合刺激THP-1,比较各组活性氧(ROS)产量,培养液丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNFα)水平和细胞HO-1mRNA及蛋白的表达量. 结果葡萄糖和AGE联合刺激的ROS产量、MDA、TNFα水平及HO-1mRNA和蛋白表达均明显高于单独刺激组. 结论 葡萄糖和AGE联合刺激可导致THP-1细胞氧化应激和HO-1表达增加.
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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究
目的：探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F拮抗血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移的机制。
方法：利用D-4F预孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMCs），而后给予氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导；采用CCK8细胞活力试剂盒检测VSMCs的增殖；利用transwell迁移小室和细胞划痕实验检测VSMCs的迁移；采用活性氧探针测定活性氧簇（ROS）的释放；利用western blot检测PI3K/Akt信号通路的激活和血红素加氧酶-1（HO-1）的蛋白表达。使用PI3K/Akt抑制剂、HO-1抑制剂及RNAi下调HO-1的表达，检测D-4F拮抗ox-LDL诱导VSMCs增殖和迁移的机制。
