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新加良附药物血清体外抑制肿瘤细胞活性研究
目的 研究新加良附药物血清体外抑制肿瘤细胞生长效应.方法 采用MTT法测定新加良附药物血清对人正常肝细胞L-02、人肝癌细胞BEL-7402、人胃癌细胞BGC-823、人食管癌细胞ECA-109、人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制率影响.结果 新加良附药物血清对正常人肝细胞无抑制生长作用;对肿瘤细胞均有不成程度抑制效应,而对BGC-823、ECA-109细胞抑制效果佳,并与用药剂量呈正相关性.结论 新加良附药物血清体外具有明显的抗消化道肿瘤活性作用,且对正常细胞无明显影响.
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叶下珠复方对人肝癌HePG2细胞增殖及细胞信号传导通路的影响
目的 观察叶下珠复方药物血清对人肝癌HePG2细胞体外增殖的抑制作用并探讨其机制.方法 用叶下珠复方药物血清处理HePG2人肝癌细胞株,MTT法检测该药对肝癌细胞株增殖的抑制作用,用流式细胞仪检测该复方诱导肿瘤细胞凋亡情况.通过RT-PCR检测该药对细胞信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其下游靶基因bcl-2的表达.结果 叶下珠复方药物血清对HePG2细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,该抑制作用与药物呈时间浓度关系.不同浓度的叶下珠复方处理HePG2细胞后bcl-2、stat3的mRNA水平明显下调(P＜0.05).结论 叶下珠复方在体外能抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的不同信号通路有关.
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解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2坏死和凋亡的干预
目的 观察解毒护肝饮药物血清对异烟肼致人肝癌细胞株(human hepatocellular carcinoma cell lines,HepG2)病变的干预,并分析其机制.方法 制备解毒护肝饮和甘草酸二铵的药物血清,建立异烟肼致HepG2细胞损伤模型,以解毒护肝饮和甘草酸二铵药物血清加入HepG2培养液,观察对HepG2坏死和凋亡的干预,以及对HepG2 Fas/FasL表达的影响,以评价解毒护肝饮的疗效机制.结果 解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2损伤有明显抑制作用,可以减少HepG2细胞凋亡和坏死,并减少其Fas/FasL表达,效果优于甘草酸二铵胶囊组.结论 以清热利湿解毒兼养阴化瘀为治法的解毒护肝饮有确切的减少异烟肼致HepG2坏死和凋亡的作用,其抗细胞凋亡作用与减少HepG2的Fas/FasL的表达有关.
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中药复方药物血清对CDKN2A和RPS3a基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响
目的 研究CDKN2A(细胞周期依赖性激酶抑制基因)和RPS3a基因(核糖体蛋白质S3a)在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株人卵巢浆液性乳头状囊腺癌(SKOV3)细胞凋亡中的作用.方法 将20只Wistar大鼠随机分为理冲生髓饮组和生理盐水组,灌胃给药,采血制备含药血清.提取生理盐水组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因.结果 共筛选出显著差异表达基因66个,其中20个基因表达水平上调,46个基因表达水平下调.结论 理冲生髓饮可能通过上调CDKN2A基因和下调RPS3a基因,达到诱导卵巢癌细胞凋亡的目的.诱导细胞周期停滞,阻碍肿瘤细胞蛋白质合成,影响细胞正常代谢等,可能是其诱导细胞凋亡的作用机制.
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软坚消瘤片药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的机制研究
目的:通过观察软坚消瘤片药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨软坚消瘤片治疗乳腺肿块性疾病的可能机制.方法:制备软坚消瘤片含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶(CYP19)及雌激素受体(ER)mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线.结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0 32和0 09倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以G2/M期为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果明显.结论:软坚消瘤片药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制一定时段的细胞生长.
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贞芪酪蛋白肽复合物血清对人肺腺癌A549细胞分化抑制作用及相关机制研究
目的:探索贞芪酪蛋白肽(ligustri-astragali casein co-peptid,LACP)复合物对人肺腺癌A549细胞分化的诱导作用及作用机制.方法:MTT法检测贞芪酪蛋白肽含药血清5%,10%,15%,20%浓度对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;通过贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞核质比和端粒酶活性的影响观察其诱导分化作用;免疫细胞化学方法观察贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞Bax/bcl-2基因表达的影响.结果:4种不同浓度的贞芪酪蛋白肽含药血清均对A549细胞增殖有抑制作用,其中以浓度为20%的贞芪酪蛋白肽血清的抑制率高;能降低细胞的核质比,并抑制人肺癌细胞端粒酶活性的作用;贞芪酪蛋白肽血清能促进A549细胞凋亡基因bax/bcl-2的表达,与无药血清对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:贞芪酪蛋白肽含药血清对人肺腺癌细胞A549有一定抑制作用;有诱导人肺癌细胞A549分化的作用,其主要机理可能是抑制了A549细胞端粒酶活性;贞芪酪蛋白肽诱导A549细胞凋亡的作用机制之一可能是促进促凋亡基因bax/bcl-2的表达.
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芪冬活血饮药物血清对脂多糖刺激下人肺微血管内皮细胞E-selectin和IP-1表达的影响
目的:研究芪冬活血饮药物血清对人肺微血管内皮细胞(HPMEC)表达E-selectin和IP-10的影响.方法:将细胞随机分为5组,空白组,LPS组,正常大鼠血清+LPS组,5％药物血清+LPS组,10％药物血清+LPS组,用不同浓度的药物血清培养HPMEC 4h后,再加入lμg/mL LPS刺激HPMEC,用RT-PCR方法检测E-selectin和IP-10的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中E-selectin和IP-10蛋白水平.结果:LPS刺激HPMEC细胞后E-selectin和IP-10的表达和分泌显著高于空白对照(P＜0.01),而芪冬活血饮药物血清则能降低该类细胞因子的表达和释放(P＜0.05).结论:芪冬活血饮药物血清能明显抑制HPMEC的活化,降低E-selectin和IP-10的释放,减轻炎性反应损伤.
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连黛片药物血清诱导MGC-803细胞凋亡的初步观察
胃癌是我国死亡率很高的主要恶性肿瘤之一.近年来,应用以中药为代表的天然药物针对于胃癌的防治研究已成为当今医学研究的热点.连黛片为一个由黄连、青黛等中药所组成的复方制剂.已有研究表明,该方能明显降低由N-甲基-N＇-硝基-亚硝基胍(MNNG)自由饮用或胃溃疡结合MNNG灌胃攻击两种模型所诱发的大鼠胃癌的发生率,并明显抑制p21ras和c-erbB2癌基因蛋白的过度表达(1,2,3),因而提示,连黛片对胃癌可能具有较好的防治作用.为进一步探讨连黛片防治胃癌的作用机理,本文观察了连黛片大鼠药物血清对人胃癌细胞株的凋亡诱导作用.
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解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响
目的:研究解毒活血益气方药物血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖、脂质过氧化的影响.方法:首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型,运用球囊原位扩张和喂饲高脂饲料致经皮动脉腔内成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)后再狭窄模型,造模成功后给予含解毒活血益气组方和阳性对照药(普伐他汀、巴米尔)的饲料进行治疗4周,获取模型动物和给药动物血清;采用MTT法、黄嘌呤氧化酶法和MDA测试盒观察药物血清作用12、24h时,对VSMC增殖、总SOD活力和MDA含量的影响.结果:解毒活血益气方在不同时相均能显著抑制VSMC的增殖;解毒活血益气方显著降低MDA的含量和增加总SOD活力,并呈现出良好的时效性.结论:解毒活血益气方可能通过抑制VSMC增殖,对抗脂质过氧化损伤等机制,干预PTCA术后再狭窄.
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生肌化瘀方及拆方对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达影响
目的:观察生肌化瘀方及拆方对创面成纤维细胞的α1(Ⅰ)mRNA和α1(Ⅲ) mRNA表达的影响,探讨其促进创面修复呈皮肤修复的作用机理.方法:采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清,运用Nthern Blot分子杂交法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA的表达.结果:生肌方能够加强创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,高于模型组;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,低于模型组;生肌化瘀方各剂量组Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与正常组相比差异均无显著性.结论:生肌化瘀方通过调控创面成纤维细胞的α1(Ⅰ)mRNA和α1(Ⅲ)mRNA表达使创面修复呈皮肤修复.
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生肌化瘀方对实验性大鼠创面肉芽组织成纤维细胞形态学的影响
目的:从细胞组织形态学角度探讨生肌化瘀方促进创面修复呈皮肤修复的机理.方法:采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞,并用乳鼠皮肤成纤维细胞做对照,分别加入用血清药理学方法制备的生肌方、化瘀方、生肌化瘀方大、小剂量药物血清.通过HE染色、透视电镜观察成纤维细胞形态学的改变.结果:生肌方可以促进成纤维细胞的增殖,化瘀方能够抑制成纤维细胞的增殖,与模型组有显著性差异.生肌化瘀方对成纤维细胞生长具有调节作用,即促进其增殖,又避免过度增生.结论:生肌化瘀方通过调控创面肉芽组织成纤维细胞增殖,影响Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,使创面修复达到皮肤修复.
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中药复方抗纤抑癌方和复方鳖甲软肝片不同采血时间点药物血清对HepG2肝癌细胞增殖活性的影响
目的:研究人来源不同采血时间点中药药物血清对HepG2人肝癌细胞增殖活性的影响.方法:HepG2人肝癌细胞体外培养,健康志愿者3名,服用中药复方抗纤抑癌方(KX)和中成药复方鳖甲软肝片(BJ)后不同时间点收集血清,采用MTT法检测各组药物血清对细胞增殖的影响.结果:(1)1h、2h与MEM对照组比较,各实验组药物血清对HepG2人肝癌细胞具有明显的增殖抑制作用(P＜0.01);KX1h20%浓度抑制效果优于KX2h同浓度(P＜0.01);KX1h5%浓度与BJ1h同浓度有差异(P＜0.05);BJ2h20%、10%浓度均较KX2h抑制作用强(P＜0.05);(2)增加0.5h抽血时间点,KX 0.5h优于KX 2h(P＜0.05);(3)与空白血清组比较,KX0.5h40%浓度时抑制效果明显(P＜0.05).结论:2种药物血清对HepG2人肝癌细胞均有增殖抑制作用;在同一采血时间点和不同时间点上,2种药物血清的抑制效果比较均存在差异.
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癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响
目的：观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。
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解毒化瘀方药物血清与药物血浆对模型PC12细胞蛋白酶活化受体-1、细胞外信号调节激酶1/2表达的影响
目的：比较解毒化瘀方药物血清与药物血浆对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤蛋白酶活化受体（PAR）-1、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2表达的差异。方法灌胃给药制备大鼠药物血清和药物血浆。采用三气培养箱和无糖DMEM培养液造成细胞缺氧模拟缺血，并同时加入150 U/mL凝血酶，建立体外缺氧合并凝血酶诱导的PC12细胞损伤模型。实验分为空白组、模型组、药物血清组及药物血浆组。实时荧光定量PCR检测细胞PAR-1、ERK1/2 mRNA表达，免疫荧光法检测细胞PAR-1、ERK1/2蛋白表达。结果与空白组比较，模型组PAR-1、ERK1/2 mRNA和蛋白表达增强（P＜0.05）；与模型组比较，药物血清组和药物血浆组PAR-1、ERK1/2 mRNA和蛋白表达下降（P＜0.05，P＜0.01）；药物血浆组PAR-1、ERK1/2表达较药物血清组下降（P＜0.05）。结论解毒化瘀方药物血浆抗缺氧合并凝血酶诱导PC12细胞损伤作用优于其药物血清。
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苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响
目的 研究苦参碱含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞形态、增殖及Jagged1信号分子表达的影响,探讨苦参碱对肝干细胞诱导分化的作用机制.方法 用不同浓度苦参碱含药血清(5%、1 0%、20%)作用于WB-F344细胞,以未用苦参碱含药血清处理的WB-F344细胞为空白对照组,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学法观察ALB、Jagged1蛋白表达变化,RT-PCR观察Jagged1、Hes1mRNA表达的变化.结果 经苦参碱含药血清干预后,WB-F344细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞体积增大,核缩小,核浆比减小,培养48 h大部分细胞呈多边形.MTT结果显示,5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清24、48、72 h均能不同程度抑制WB-F344增殖,且存在时间、剂量依赖性.免疫细胞化学结果显示,空白对照组WB-F344细胞表达Jagged1蛋白,不表达ALB蛋白,经苦参碱含药血清处理后Jaggedl蛋白表达显著下降(P＜0.01),ALB蛋白表达显著升高(P＜0.01).RT-PCR结果显示,经苦参碱含药血清处理后Jagged1mRNA、Hes1mRNA表达显著下降(P＜0.01).结论 苦参碱含药血清可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向分化,其作用机制与调节Notch信号通路的关键分子有关.
关键词： 苦参碱 药物血清 WB-F344细胞 Notch-Jagged信号通路 -
五指毛桃药物血清对老龄小鼠脾淋巴细胞氧化损伤的影响
目的：观察五指毛桃药物血清对老龄小鼠衰老所致脾淋巴细胞氧化损伤的影响，探讨其作用机制。方法将40只老龄小鼠随机分为空白对照组和五指毛桃高、中、低剂量组，分别给予0.9%氯化钠溶液和6.6、4.4、2.2 g/kg五指毛桃水提物灌胃，测定脾脏指数，确定五指毛桃水提物的佳剂量，采用MTT法确定佳剂量药物血清干预老龄小鼠脾淋巴细胞增殖的佳稀释浓度及佳作用时间。使用佳稀释浓度药物血清作用老龄小鼠脾淋巴细胞48 h后观察衰老细胞阳性率，检测细胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量。结果与空白对照组比较，药物组老龄小鼠脾脏指数均明显提高（P＜0.05，P＜0.01)，以中剂量组效果佳；五指毛桃药物血清促进老龄小鼠脾淋巴细胞增殖的佳浓度为20%，佳作用时间为48 h。20%五指毛桃药物血清明显降低衰老细胞阳性率（P＜0.01)，提高老龄小鼠T-SOD活性，降低MDA和ROS含量（P＜0.05，P＜0.01）。结论五指毛桃药物血清能够提高老龄小鼠脾淋巴细胞增殖活性，其机制与降低衰老细胞阳性率、增强细胞抗氧化能力有关。
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益气化瘀养阴解毒方药物血清对人肺癌A549细胞增殖及周期的影响
目的 观察益气化瘀养阴解毒方药物血清对人肺癌细胞A549增殖及周期的影响.方法 大鼠灌胃制备益气化瘀养阴解毒方药物血清,采用MTT法观察药物血清干预24、48、72h后对细胞增殖的作用(分为空白组及药物血清高、中、低剂量组)采用流式细胞检测分析药物血清干预24h对细胞周期的影响(分为空白组、生长液组及药物血清高、中剂量组).结果 各药物血清组与空白组之间的吸光度差异有统计学意义(P＜0.05),随着作用时间的延长,其吸光度逐渐降低,抑制率逐渐增高(P＜0.05).药物血清组细胞周期G1期增多,G2期及S期减少.结论 益气化瘀养阴解毒方对肺癌细胞具有抑制作用,可能与其抑制细胞分裂有关.
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紫柏凝胶对宫颈癌SiHa细胞的影响
目的：探讨紫柏凝胶药物血清作用于高危型人乳头瘤病毒感染相关性宫颈癌SiHa细胞的免疫学反应机制。方法采用细胞培养及免疫组化方法,用不同浓度紫柏凝胶药物血清作用宫颈癌SiHa细胞24、48、72 h 后,分别标记出相同作用时间段不同浓度下及不同时间段相同浓度下白细胞介素(IL)-6、IL-10、CD83、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的光密度,通过计算平均光密度,分析药物作用与免疫因子 IL-6、IL-10、CD83、TNF-α表达的量效与时效关系。结果随着药物血清浓度及作用时间的增加,IL-6及TNF-α的免疫表达均逐渐减弱,CD83及IL-10的免疫表达均逐渐增强(P＜0.05)。结论紫柏凝胶药物血清能够通过改善宫颈局部免疫功能,抑制局部炎症反应,从而抑制宫颈高危型人乳头瘤病毒。
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抗纤灵药物血清对人肝癌细胞体外生长的抑制及机理研究
目的:研究抗纤灵的抑癌作用及分子机理.方法:采用人肝癌细胞(HepG2)体外培养,血清药理学及免疫组织化学等方法.结果:含抗纤灵血清18、9、3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率分别为63.09%±5.08%,55.09%±4.09%,48.08%±4.08%,细胞毒活性分别为48.06%±4.08%,38.09%±5.01%,25.00%±4.1 3%,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清比较,差异有显著性或无显著性(P＜0.05或P＞0.05).含抗纤灵血清1 8、9、3g/kg体重各组HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组((P均＜0.01).结论:抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机理与该方提高HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达有关.
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参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响
目的：观察参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响，探讨其相关机制。方法以参芪抑瘤方不同浓度药物血清干预胃癌 MGC-803细胞后，MTT 法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期， qRT-PCR检测CDKN1B、CDKN1C基因表达，Western blot检测p27、p57蛋白表达。结果3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24、48、72 h，细胞增殖水平显著降低（P＜0.01），且与时间和剂量呈依赖关系；3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24 h后，G0/G1期细胞增多，S期细胞减少；qRT-PCR检测结果显示，与对照组和空白血清组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞CDKN1B、CDKN1C mRNA表达显著上调（P＜0.01）；Western blot检测结果显示，与对照组比较，药物血清各剂量组MGC-803细胞p27、p57蛋白表达显著上调（P＜0.01）。结论参芪抑瘤方药物血清可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖，其机制可能是通过调节CDKN1B、CDKN1C mRNA和蛋白表达，进而干预细胞周期。
