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细胞凋亡的死亡受体途径
死亡受体信号转导通路是诱导细胞凋亡的主要途径之一,目前已知的死亡受体有8种,其信号转导途径主要有3条,分别为TNFR、TRAIL和Fas/FasL信号途径.本文将就这三条通路的研究概况进行阐述.
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FAS/FASL系统介导的生精细胞凋亡在男性生殖中的作用
生精细胞凋亡是机体清除过量及缺陷生精细胞的正常生理机制,其病理状态下的过度凋亡会导致少、弱精子症发生.FAS/FASL系统是介导哺乳动物睾丸生精细胞凋亡的主要途径.FASL特异性的与生精细胞膜上的FAS结合后,通过胞内肽段的死亡结构域激活相关的半胱天冬氨酸酶级联反应,诱导其凋亡.FAS/FASL系统在调节生精细胞凋亡中发挥重要作用,FAS与FASL的结合可触发细胞凋亡,是人体生长发育过程中正常的生理现象,但其过度表达会对精子数量质量产生不利影响.本文综述FAS/FASL系统在生精细胞凋亡中的作用,并讨论与之相关的特发性少、弱精子症所致男性不育.
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Fas/FasL系统与肝癌细胞免疫逃逸的研究进展
Fas是一种重要的诱导细胞凋亡的死亡受体,在靶细胞表面相应配体FasL的激活下介导细胞凋亡.近的研究揭示肝癌细胞通过表达FasL反击免疫系统,消除体内抗肿瘤T细胞,并且抵抗Fas/FasL系统介导的凋亡,从而使肿瘤成为机体的免疫豁免部位而逃逸免疫系统的攻击.本文就Fas/FasL系统与肝癌细胞免疫逃逸研究进展做一综述.
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低硒碘处理大鼠肝脏某些生化指标和凋亡蛋白(Fas/FasL)表达的变化
目的 探讨低硒碘处理大鼠肝脏某些生化指标与凋亡蛋白(Fas/FasL)表达的变化.方法 选取人工合成的低硒、低碘复合饲料喂养繁殖的仔二代SD大鼠作为研究对象,采用比色法检测大鼠肝脏中GPX-Px的活性、脂质过氧化物(MDA)和一氧化氮(NO)的含量,用western blot法检测肝脏组织中凋亡蛋白(Fas/FasL)的表达.结果 低硒组大鼠肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-Px)的活性明显降低,MDA、NO含量及凋亡蛋白Fas/FasL的表达均明显升高;低碘组大鼠肝脏中GPX-Px活性、NO含量未见明显改变,MDA含量明显增加,Fas/FasL表达明显升高.低硒低碘联合组大鼠肝脏GSH-Px活性降低及MDA、NO含量、Fas/FasL表达水平增加的幅度远大于单纯低硒或低碘组.结论 长期硒缺乏可致大鼠肝脏GSH-Px活性下降,MDA和NO含量升高,肝脏Fas/FasL过量表达.
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Fas/FasL、FAP-1在肝母细胞瘤中的表达研究及其临床意义
目的探讨肝母细胞瘤组织Fas、FasL及FAP-1和组织中淋巴细胞的Fas、FasL的表达状况及临床意义.方法应用Fas、FasL多克隆抗体及FAP-1单克隆抗体对15例小儿肝母细胞瘤组织标本进行免疫组化染色,以检测其组织Fas、FasL及FAP-1和淋巴细胞的Fas、FasL的蛋白表达,并以相应的正常肝组织作对照.
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益心康对感染柯萨奇病毒B3大鼠体外心肌细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA表达的影响
目的 探讨益心康对体外感染柯萨奇病毒(CV) B3的新生SD大鼠心肌细胞的保护作用,分析其对细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 取新生SD大鼠心肌细胞,分成4组.并进行不同干预:正常细胞对照组、病毒对照组给予感染病毒,益心康组感染病毒后加入益心康,利巴韦林组感染病毒后加入利巴韦林.用RT-PCR方法检测各组心肌细胞中Fas及FasL mRNA的表达.结果 益心康组给药48h后细胞内Fas及FasL mRNA的表达较病毒对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05).益心康组及利巴韦林组减轻Fas及FasL mRNA的表达效果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益心康可有效减轻细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA的表达水平,证实该方有抑制心肌细胞凋亡的作用.
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路氏滋燥汤对小鼠颌下腺细胞因子Fas/FasL的影响
目的 通过检测颌下腺细胞凋亡及Fas/FasL表达程度,探讨路氏滋燥汤治疗干燥综合征的作用机制.方法 采用白百破疫苗加完全弗氏佐剂及同种鼠颌F腺抗原联合诱导干燥综合征动物模型.治疗组小鼠以路氏滋燥汤灌胃,空白组和模型组给予生理盐水灌胃.两周后处死动物,流式细胞仪检测各组小鼠颌下腺组织细胞凋亡率、免疫组化法测定各组小鼠颌下腺中Fas/FasL水平.结果 相对于模型组,2个治疗组小鼠颌下腺细胞凋亡率及Fas/FasL表达程度明显降低.结论 路氏滋燥汤可降低诱导干燥小鼠颌下腺细胞凋亡率及Fas/FasL表达程度,是其治疗干燥综合征的作用机理之一.
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解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2坏死和凋亡的干预
目的 观察解毒护肝饮药物血清对异烟肼致人肝癌细胞株(human hepatocellular carcinoma cell lines,HepG2)病变的干预,并分析其机制.方法 制备解毒护肝饮和甘草酸二铵的药物血清,建立异烟肼致HepG2细胞损伤模型,以解毒护肝饮和甘草酸二铵药物血清加入HepG2培养液,观察对HepG2坏死和凋亡的干预,以及对HepG2 Fas/FasL表达的影响,以评价解毒护肝饮的疗效机制.结果 解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2损伤有明显抑制作用,可以减少HepG2细胞凋亡和坏死,并减少其Fas/FasL表达,效果优于甘草酸二铵胶囊组.结论 以清热利湿解毒兼养阴化瘀为治法的解毒护肝饮有确切的减少异烟肼致HepG2坏死和凋亡的作用,其抗细胞凋亡作用与减少HepG2的Fas/FasL的表达有关.
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蒙药珍宝丸对视网膜缺血再灌注损伤Fas\Fasl、P53蛋白表达的影响及意义
目的:研究蒙药珍宝丸对Fas、FasL及p53蛋白在家兔视网膜缺血再灌注损伤中的表达影响,探讨珍宝丸对家兔视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制.方法:通过升高眼内压法造成视网膜缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学链酶卵白素一生物素复合体法和计算机图像分析系统对95只家兔视网膜中Fas、Fasl和P53蛋白表达进行测定.结果:1.组织病理学改变:6～48 h水肿逐渐加重,神经节细胞和内核层细胞数量减少,内外核层密度降低、排列紊乱.72 h视网膜明显变薄,水肿减轻,神经节细胞数量稀少,内核层明显变薄.2.相关因子表达情况:Fas在正常视网膜组织中几乎不表达,在缺血再灌注6h开始表达,24h达到高峰,48 h开始下降,延续至缺血再灌注后72 h仍有表达；FasL在正常视网膜组织中低表达,于缺血再灌注12 h表达升高,24h达到高峰,48 h开始下降；再灌注72 h表达较24h降低,但仍维持高表达.P53在正常视网膜组织中无表达,缺血再灌注后6h开始表达,24h达高峰,48 h仍持续强表达,72 h已明显下降.珍宝丸治疗组各观察指标表达变化规律与缺血再灌注组基本一致,但均较缺血再灌注组明显下降.其中Fas表达在6h、12 h、24h、48 h组较缺血再灌注组显著下降(P＜0.05)；FasL表达在12 h、24h、48 h组较缺血再灌注组明显下降(P＜0.05)；P53在6h、12 h、24h、48 h组表达明显低于缺血再灌注组(P＜0.05).结论:视网膜缺血再灌注损伤导致视网膜组织中Fas/Fasl和P53蛋白表达的增高.珍宝丸可以抑制其增高,可用于临床上视网膜缺血再灌注损伤的治疗.
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芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究
目的 探讨芍药苷对Fas配体(FasL)诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响.方法 采用1月龄SD大鼠(雌雄不拘)的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养.传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型.实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体(FasL)诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预.Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平.结果 药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组(P＜0.01),药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组(P＜0.01).结论 芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率.
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补肾清热毒方对cGVHD狼疮小鼠肾组织细胞凋亡的调节作用
目的:探讨补肾清热毒方(简称补清方)对慢性移植物抗宿主病(chronic graftversus-host disease,cGVHD)狼疮样小鼠模型肾组织细胞Fas/FasL(Fas ligand)的调节作用.方法:采用原位末端标记法(TUNEL)染色观察肾组织细胞凋亡;免疫组化、蛋白印记(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL基因转录及蛋白表达情况.结果:补清方可增加肾组织TUNEL阳性积分,上调Fas、FasL mRNA和蛋白水平.结论:补清方治疗狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的作用可能是通过上调Fas、FasL,促进细胞凋亡实现的.
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中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究
目的:通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制.方法:取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况.结果:治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用.
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川芎嗪对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响
川芎嗪(tetranethyipyrazine TMP)是中药川芎中的一种生物碱,具有活血化瘀、扩张血管及抗血小板聚集等多种作用,对心肌缺血及再灌注损伤有较好的保护作用[1],在临床上有着较广泛的应用.
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重楼总皂苷对人胃癌MKN-45细胞凋亡及Fas/FasL信号通路的影响
目的:研究重楼总皂苷(Paridis Rhizoma total saponins,PRTS)诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡的机制.方法:在前期研究基础上,将PRTS设定3个不同质量浓度(5,10,20 mg·L-1)处理人胃癌细胞12h,采用荧光染色法观察MKN-45细胞凋亡形态学变化;流式细胞术(Annexin V/PI双染色法)测定细胞凋亡率;ELISA测定MKN-45细胞caspase-3,caspase-8酶活性;Western blotting法检测Fas,FasL蛋白表达水平.结果:在荧光显微镜下,经PRTS处理的MKN-45细胞,可见典型的凋亡形态学特征;PRTS可明显增加细胞凋亡率,且PRTS 20 mg· L-1与对照组相比凋亡率有显著差异(P＜0.01);PRTS作用于MKN-45细胞12h,与对照组比较,其caspase-3,caspase-8活性明显增高(P＜0.01),Fas,FasL蛋白表达明显增高(P＜0.01).结论:PRTS能显著诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡,其机制可能与增加caspase-3,caspase-8活性,上调Fas和FasL的表达有关.
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养阴益气活血方药对干燥综合征NOD小鼠颌下腺Fas/FasL及其mRNA表达的影响
目的:观察养阴益气活血方药对于燥综合征NOD小鼠颌下腺组织Fas/FasL及其mRNA表达的影响.方法:32只NOD小鼠随机分为模型组、中药组(每天按100 g·kg-1灌胃养阴益气活血煎剂0.4 mL)、羟氯喹组(每天按60 mg·kg-1灌胃羟氯喹0.4 mL)、中西药组(每天灌胃养阴益气活血煎剂50 g·kg-1+羟氯喹60 mg· kg-,0.4 mL),每组8只,选8只Ba1b/C小鼠做为正常对照组.实验进行8周后处死小鼠,解剖摘取颌下腺,免疫组织化学法检测颌下腺组织Fas,FasL蛋白的表达;RT-PCR法检测颌下腺组织Fas,FasL mRNA的表达.结果:模型组小鼠颌下腺组织Fas,FasL表达均高于其他各组(P＜0.05).对照组FasL表达明显低于羟氯喹组(P＜0.05).模型组小鼠颌下腺Fas mRNA相对表达量均高于其他组,对照组明显低于其他各组(P＜0.05).模型组小鼠颌下腺FasL mRNA表达高于中药组、中西药组(P＜0.05);中西药组表达明显低于羟氯喹组(P＜0.05).结论:养阴益气活血煎剂能下调干燥综合征NOD小鼠颌下腺Fas,FasL及其mRNA的表达,且与羟氯喹合用效果较好.养阴益气活血煎剂可能通过减少Fas/FasL调控的细胞凋亡达到治疗SS的作用.
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补骨脂素加长波紫外线诱导NB4细胞凋亡及对Fas/FasL基因表达影响的研究
目的 探讨自中药补骨脂中提取的补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)诱导人白血病细胞NB4凋亡及对Fas/FasL基因表达的影响.方法 以NB4细胞为研究对象,采用流式细胞术、透射电镜、定量PCR等方法观察不同浓度的PSO,在不同时间的波长为360 nm的UVA照射下,细胞凋亡率、细胞超微结构以及细胞Fas/FasL基因、蛋白表达水平的变化.结果 (1)补骨脂素加长波紫外线(PUVA)可诱导NB4细胞凋亡,当PSO浓度为10、20、40、80μg/mL时,UVA照射5 min的细胞凋亡率分别为(26.57±0.42)%、(30.67±0.11)%、(34.90±0.30)%、(24.63±0.38)%,凋亡率呈剂量-时间依赖性,两因素间有交互作用.(2)电镜下观察经PUVA处理后的NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变特征.(3)PUVA可上调NB4细胞Fas基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,在基因水平两因素间有交互作用,在蛋白水平两因素无交互作用.(4)PUVA可下调NB4细胞FasL基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,且两因素间有交互作用.结论 PUVA可诱导白血病细胞NB4发生凋亡,Fas/FasL系统是PUVA诱导NB4细胞发生凋亡的作用途径之一.
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壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响
目的 观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,ClA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响.方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只.模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27 mg/100 9大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08 g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日.HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达.结果 正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善.与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P ＜0.05,P＜0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一.
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IFNγ调控人肺癌A549细胞Fas/FasL表达对T淋巴细胞生长的影响
为探讨IFNγ调控人肺癌细胞Fas/FasL表达对T细胞生长的影响,分别采用FACScan、RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白质及mRNA表达;以荧光染色及 FACScan法观察细胞调亡;用苔酚兰排除实验分析细胞生长.结果表明,人肺癌细胞A549及T-细胞系(Jurkat)均有 Fas及 FasL表达;IFNγ可引起A549 Fas表达上调,且与剂量相关,并增加了A549细胞凋亡诱导的敏感性;A549细胞与Jurkat细胞共培养实验证明:人A549细胞通过Fas/FasL介导导致Jurkat细胞生长抑制及凋亡诱导;IFNγ处理A549细胞后,减少了其对Jurkat细胞的生长抑制.上述结果提示:Fas/FasL途径介导了A549细胞与Jurkat细胞之间的凋亡,IFNγ通过对人肺癌细胞Fas/FasL系统表达调控,使A549细胞自身对凋亡诱导的敏感性增加,并对T细胞生长的抑制作用减弱,提示IFNγ在防止肿瘤细胞逃避免疫监控有一定作用.
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三七总皂甙降低兔肺缺血再灌注损伤和抑制细胞凋亡
目的 探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及三七总皂甙的作用及机制.方法 健康日本大耳白兔84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1、3、5h组和相应三七总皂甙干预组.复制肺缺血再灌注损伤模型.用原位缺口末端标记(TUNEL)法、聚丙烯酰胺凝胶电泳观测肺组织细胞凋亡,原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统和caspase-3基因表达.结果肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数(肺缺血再灌注5h组:22.08±1.93；对照组:2.04±0.67)、Fas/FasL和aspase 基因表达(肺缺血再灌注5h组:0.241 *0.029;对照组:0.121 ±0.015)均显著高于对照组(P＜0.01),并出现电泳梯形条带结构；三七总皂甙干预组Fas/FasL mRNA及其caspase-3的表达(三七总皂甙干预5 h组:0.199 ±0.020;肺缺血再灌注5h组:0.241 ±0.029)显著低于缺血再灌注组(P＜0.01),肺组织细胞凋亡指数(三七总皂甙干预5h组:12.58±1.82;肺缺血再灌注5h组:22.08±1.93)也显著低于缺血再灌注组(P＜0.01),梯形条带结构基本消失.肺组织细胞凋亡指数分别与caspace mRNA及Fas/FasL mRNA之间均呈显著正相关(P＜0.01).结论 三七总皂甙可能通过抑制Fas/FasL系统的激活,阻遏肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤.
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食管上皮癌变过程中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达及其意义
目的 研究细胞凋亡调控因子FAS、FASL、FADD和caspase-8基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义.方法 用免疫组化SP法检测食管黏膜中FAS、FASL、FADD和caspase-8的表达;原位杂交法检测食管黏膜中FADD mRNA和caspase-8 mRNA的表达.结果 从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FAS蛋白表达率呈逐渐下降趋势,FASL蛋白表达率呈逐渐上升趋势,食管癌与正常组织之间差异明显(P＜0.05).高、中分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于低分化鳞癌(P＜0.05).从食管正常黏膜组织到不典型增生和食管癌组织,FADD和caspase-8蛋白及RNA阳性表达率呈逐渐下降趋势,食管癌与正常黏膜组织之间差异明显(P＜0.01);caspase-8蛋白和mRNA在高、中分化鳞癌中的表达率高于低分化鳞癌(P＜0.05).结论 FAS与FASL的表达失衡与食管癌的发生、发展有密切关系,并与食管癌的分化和免疫逃避有关.FADD与caspase-8基因表达异常在食管癌的发生、发展中可能起着重要作用.
