自体免疫性甲状腺疾病中甲状腺组织凋亡与凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2表达研究

目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2在自体免疫性甲状腺疾病(ATDs)中的表达及意义.方法:采用原位细胞凋亡检测(Tunel法)及免疫组化SP法进行检测.桥本甲状腺炎(HT)19例,Graves病(GD)13例,对照组非毒性结节性甲状腺肿(NTNG)(结甲)7例.结果:HT及GD滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为100%和80.01%,结甲组滤泡细胞为57.14%.HT及GD分别与结甲组相比有显著差异(P《0.01).HT及GD中均有滤泡细胞表达FasL和Bcl-2,而结甲中FasL没有表达.Bcl-2的表达在HT和GD中较强,而在结甲组织中的表达较弱,与HT和GD相比有显著差异(P《0.01).结论:在HT、GD中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,并经过Fas与FaL的作用导致部分滤泡细胞凋亡.在HT、GD中由于滤泡细胞通过增强Bct-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱.凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用.

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元Fas/FasL和超微结构的影响

目的:探讨丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注(IR)皮质神经元的预防性保护作用及其可能机制.方法:采用改良线栓法制备大鼠右侧脑局灶性缺血再灌注模型;免疫组织化学法和电子显微技术观察缺血再灌注皮质神经元Fas/FasL的表达和超微结构改变.结果:假手术组偶见Fas、FasL阳性细胞表达,神经元形态正常;模型组Fas、FasL阳性表达明显增多,神经元坏死多见,胞膜断续或崩解,线粒体肿胀、嵴断裂,高尔基复合体肿胀扩张,核膜曲折不光滑;与模型组比较,丁苯酞预处理组Fas、FasL阳性表达面积率降低(P＜0.01),多数神经元较正常,核模较完整,染色质分布较均匀,线粒体损伤减轻,内质网趋于正常,凋亡细胞少见.结论:丁苯酞预处理可下调皮质神经元Fas、FasL阳性表达,减轻缺血再灌注神经元超微结构的损伤,对脑IR损伤有一定的预防性保护作用.

UVB致小鼠皮肤癌变中Fas/FasL,CD4及CD8的表达

目的 通过窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射诱发小鼠皮肤肿瘤,探讨Fas/FasL,CD4及CD8在Bowen病(BD)、光老化皮肤及正常小鼠皮肤中的表达情况,加深对皮肤肿瘤Fas/FasL凋亡途径和免疫逃逸机制及周围浸润淋巴细胞类型的认识.方法 将42只健康的昆明种小鼠分为两组,慢性照光组(UVB)32只,正常组10只.应用免疫组化法检测其Fas/FasL,CD4及CD8的表达情况,结果 成功制作了NB-UVB致小鼠皮肤癌模型.Fas表达光老化皮肤组高于正常鼠皮肤,BD组低于光老化组,FasL表达BD组和光老化组均高于正常鼠皮肤,BD组较光老化组增高,CD4在BD组较正常鼠皮肤及光老化皮肤组均降低,光老化组较正常鼠增高.CD8在BD组、光老化组较正常鼠增高,差异均有统计学意义(P均<0.05),而BD组和光老化组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 FasL在光老化皮肤中表达增高,在BD中进一步增高,支持了Fas/FasL系统启动细胞凋亡过程和肿瘤细胞通过表达FasL来逃避机体免疫监视的学说.BD组与正常皮肤组相比,CD4表达降低,CD8表达增高,这可能与BD是表皮内鳞状细胞癌且存在向侵袭性癌转变的倾向有关.

Fas/FasL系统在大鼠视网膜缺血再灌注凋亡损伤中的作用及bFGF的影响

目的:探讨Fas/FasL在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影响.方法:前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,28只大鼠随机分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组,手术组又按照再灌注后不同时间段分为1,6,12,24,48,72h组.应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测视网膜神经细胞凋亡指数(apoptosis index,AI),免疫组织化学法检测视网膜组织中Fas,FasL的表达.结果:视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h组不明显.Fas,FasL表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致.bFGF治疗组各观察指标表达变化规律与缺血组基本一致,但AI值在12,24,48h组明显低于缺血组(P＜0.05);Fas表达在6,12,24h组较缺血组显著下降(P＜0.05);FasL表达在12,24,48h组较缺血组明显下降(P＜0.05).结论:Fas/FasL死亡诱导系统参与视网膜缺血再灌注损伤,导致神经节细胞的凋亡;bFGF可抑制Fas、FasL的表达,减少神经节细胞凋亡,对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用.

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的: 探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系.方法: 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片,HE染色分析肾组织病理损伤程度,用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化,SABC免疫组化方法检测Bcl-2,Fas与FasL蛋白表达的变化. 结果: 缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管,肾小管上皮细胞凋亡指数增加,且随缺血再灌注时间延长而进一步上升,48 h达高峰 (P<0.05).Bcl-2蛋白在对照组呈弱阳性表达,缺血30 min,60 min后再灌注0 h有少量表达,再灌注24 ,48及72 h呈阳性表达,48 h达高峰 (P<0.05) ,并以远曲小管为主.Fas,FasL蛋白在对照组呈阴性表达,缺血30,60 min后再灌注0 h有少量表达,再灌注24,48及72 h呈阳性表达,以72 h时达高峰 (P<0.05) ,多表达在远曲小管.HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶,以近曲小管为主,坏死灶周围有炎性细胞浸润. 结论: 肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡,Bcl-2,Fas/FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用.

红景天多糖对骨髓抑制小鼠表达凋亡相关蛋白的影响

目的 观察红景天多糖对骨髓抑制小鼠表达凋亡相关蛋白的影响,并探讨其造血调控作用部分机制.方法 用免疫组化SABC法分别检测骨髓抑制小鼠骨髓细胞凋亡相关蛋白Caspases-3及Fas/FasL的表达.结果 经过射线照射及化疗药物造模后,小鼠骨髓细胞表达Fas/FasL、caspase-3明显增加.用药后各组小鼠骨髓细胞Fas/FasL、caspase-3蛋白表达有不同程度的减少,以高剂量组减少明显(P＜0.01).结论 红景天多糖可通过影响骨髓抑制小鼠骨髓细胞死亡受体Fas介导的Fas/FasL-caspase-3凋亡信号通路,减少骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血功能的恢复.

三氧化二砷诱导人胃癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及其对Fas/FasL表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As_2O_3)对Fas/FasL表达的影响及其在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 雄性BALB/C-nu/nu裸鼠30只,建立人胃癌裸鼠移植瘤模型后,随机分为3组,即对照组、As_2O_3低剂量组和As_2O_3高剂量组.As_2O_3低剂量组和高剂量组分别按2.5mg/kg和5mg/kg剂量给予As_2O_3腹腔注射治疗;对照组给予等体积生理盐水.测量瘤块体积观察肿瘤的生长情况;采用电镜观察和原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;采用免疫组化法检测Fas/FasL的表达.结果 As_2O_3治疗组瘤块的平均体积均显著小于对照组(P<0.05);As_2O_3治疗组肿瘤组织中凋亡细胞的数量较对照组显著增多(P<0.01);As_2O_3治疗组肿瘤细胞的Fas表达显著高于对照组(P<0.05),但FasL的表达两组间无显著性差异(P>0.05).结论 As_2O_3对人胃癌移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调Fas表达、诱导胃癌细胞凋亡有关.

二甲双胍治疗对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢中Fas/FasL表达的影响

目的 探讨二甲双胍(dimethylbiguanide,DB)治疗前后多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢组织中Fas(factor associated suicide)和FasL(factor associated suicide ligand)蛋白的表达变化,为研究DB临床治疗PCOS的分子机制提供实验资料.方法 选取30只85天龄SD雌性大鼠,随机分为PCOS组(10只)、DB治疗组(10只)、对照组(10只).前两组通过皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,PCOS组和对照组喂服安慰剂,同期DB治疗组喂服二甲双胍.14 d后取出各组大鼠卵巢称重,观察卵巢大体解剖和组织学结构变化(HE染色),并取外周血测定血清胰岛素(insulin,INS)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和睾酮(testosterone,T)水平.采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测3组卵巢组织中Fas蛋白和FasL蛋白的表达变化.结果 ①PCOS组大鼠卵巢的重量、体积、平均卵巢面积、大卵泡直径和卵泡膜厚度均比对照组增加;DB治疗组大鼠以上各指标均比PCOS组降低,所有差异均有统计学意义(P均<0.05);②PCOS组和DB治疗组大鼠血清INS、LH和T值均比对照组增高,且DB治疗组大鼠血清T值比PCOS组降低,所有差异均有统计学意义(P均<0.05);③免疫组化显示,Fas蛋白和FasL蛋白主要表达于囊状卵泡颗粒细胞胞质内,且在PCOS组囊状扩张卵泡中近卵泡腔的1～2层颗粒细胞中表达较强,而在初级卵泡卵母细胞胞质和透明带表达较弱;④Western blot显示,PCOS组大鼠卵巢组织中Fas和FasL蛋白的表达较对照组增高,但DB治疗组Fas蛋白的表达较对照组和PCOS组均降低,而FasL蛋白的表达却较对照组增加,所有差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 Fas/FasL的表达改变是DHEA诱导的PCOS组大鼠卵泡异常凋亡的主要通路之一,可以通过DB治疗逆转卵巢多囊性改变.

细胞凋亡调控分子在自身免疫性甲状腺疾病中的表达

Fas/FasL系统与脑缺血再灌注损伤相关性的研究进展

Fas/FasL系统在中枢神经系统中具有双向调节性：在未损伤的大脑内处于免疫抑制状态；在脑缺血再灌注发生后，以介导细胞凋亡/引发炎性反应的形式，致使脑组织坏死，因此，对Fas/FasL系统的进一步研究对治疗缺血性脑病有重要意义。

肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤的研究进展

细胞凋亡是有秩序、受控制并按某种预定程序发展的生理性的自然死亡过程,对生物机体发育、分化、组织重建具有重要作用[1].其途径:①死亡受体途径[2],Fas/FasL、TNF/TNFR1、caspase3等;②线粒体途径[3], Bcl-2、Bax、caspase3等;③内质网信号途径[4],钙离子平衡的破坏或蛋白的过量积累、caspase3等;④失巢凋亡途径[5], ERK、JNK等.

生长抑素对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨生长抑素对大肠癌细胞凋亡的影响.方法 采用巢式RT-PCR方法检测2004年1月至2006年10月皖南医学院附属弋矶山医院收治的79例大肠癌患者癌组织中生长抑素mRNA的表达情况,采用免疫组织化学法检测大肠癌组织中生长抑素、Fas、FasL、半胱天冬蛋白酶(caspase)3和8蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI).采用χ~2检验、q检验、Spearman等级相关检验对结果进行分析.结果 大肠癌组织中生长抑素mRNA与其蛋白表达呈正相关(r=0.98,P<0.05).低分化和中分化大肠癌组织中生长抑素mRNA及其蛋白的表达明显低于高分化组织(χ~2=10.78,11.24,5.27,5.24,P<0.05);生长抑素mRNA及其蛋白在乳头状腺癌的阳性表达率明显高于黏液腺癌+印戒细胞癌及未分化癌(χ~2=6.56,6.99,5.44,7.39,P<0.05);Dukes A、B期的生长抑素mRNA及其蛋白阳性表达率明显高于C、D期(χ~2=5.17,4.06,P<0.05).生长抑素高表达组、中表达组的AI明显高于低表达组(q=5.66,4.21,P<0.05);Fas、caspase-8、caspase-3在生长抑素高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组(χ~2=5.48,5.62,6.89,4.32,4.19,3.91,P<0.05).结论 生长抑素对大肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas/FasL基因的表达失衡、功能和信号系统的紊乱有关.

凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2在自身免疫性甲状腺病中的表达及意义

目的:探讨HT(桥本氏甲状腺炎)及DTG(弥漫性毒性甲状腺肿)细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和BcL-2的表达及其意义.方法:采用免疫组化S-P法检测HT及DTG中凋亡相关蛋白的表达,并分析凋亡相关蛋白的表达与两种甲状腺疾病病理发生发展的关系.结果:HT及DTG滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为40%和60%,并且在靠近淋巴细胞浸润区的甲状腺滤泡细胞阳性反应较强,正常甲状腺组织滤泡细胞则未见表达.HT及DTG分别与正常甲状腺组织相比有显著差异P＜0.01.在正常甲状腺组织,HT及DTG中均有滤泡细胞表达FasL和BcL-2,而FasL的表达三者相比均无显著差异.BcL-2的表达在正常甲状腺组织和DTG中较强,而在HT中的表达较弱,与正常甲状腺组织和DTG相比有显著差异P＜0.01.结论:结果提示在HT中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,经过Fas与FasL的作用导致部分滤泡细胞凋亡,并通过BcL-2表达的减弱,降低了抗凋亡的作用.在DTG中由于滤泡细胞通过增强BcL-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱.本研究结果显示凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用.

鳞癌与基底细胞癌的Fas/FasL表达及其与细胞凋亡的关系

目的:探讨鳞癌与基底细胞癌的Fas/FasL表达及其与细胞凋亡的关系.方法:用免疫组化及TUNEL方法检测45例鳞癌与基底细胞癌的Fas/FasL表达及其与细胞凋亡的关系.结果:鳞癌Fas/FasL表达高于基底细胞癌;Fas/FasL阳性细胞凋亡率高于阴性细胞.结论:Fas/FasL系统与细胞凋亡密切相关,并在肿瘤侵袭中可能起重要作用.

干扰素-γ、干扰素-α2b二者联合应用诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及机制

目的:研究干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、干扰素-α2b(Interferon-α2b,IFN-α2b)二者联合应用对MCF-7乳腺癌细胞的诱导凋亡作用,并探讨其诱导凋亡作用的机制.方法:通过流式细胞仪(FCM)检测处理后细胞凋亡情况及Fas/FasL蛋白表达情况.结果:MCF-7乳腺癌细胞处理后凋亡细胞百分率增加,并且随着处理时间的延长,凋亡细胞百分率有增加趋势,差异显著,有统计学意义(p<0.05);FasL的表达增加,并且随着处理时间的延长,FasL的表达有增加趋势,差异显著,有统计学意义(p<0.05),Fa s的表达实验组与对照组无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05).结论:干扰素-γ、干扰素-α2b二者联合应用可诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡,作用机制可能与通过上调FasL蛋白的表达,加强Fas/FasL之间的交联及使Fas/FasL亟路敏感性增加有关.

三七对系膜增生型肾炎外周血T细胞亚群及Fas/FasL表达的调节及意义

[目的]研究系膜增生型肾炎患者外周血T细胞亚群及Fas/FasL表达特点,探讨三七对系膜增生型肾炎T细胞亚群及Fas/FasL表达调节的意义.[方法]将120例系膜增生型肾炎患者随机分成2组,一组以常规法治疗,一组以常规法加三七治疗.用流式细胞仪检测2组患者治疗前后外周血T细胞亚群CD2、CD4、CD8及Fas/FasL表达,同时设置正常对照组.[结果]系膜增生型肾炎患者T细胞亚群明显失衡,表现为CD4为减少,CD8增加,CD4/CD8比值显著降低,Fas/FasL显著低于正常对照组(P＜0.01).Fas/FasL的降低与CD4细胞呈正相关,(r=0.57,r=0.46,P＜0.05),与CD8细胞呈负相关(r=-0.7,r=-0.6,P＜0.05),三七组治疗后T细胞失衡明显纠正,Fas/FasL表达上调.[结论]系膜增生型肾炎T细胞亚群失衡,Fas/FasL表达低下,可能为系膜增生型肾炎发生和病变进展的免疫因素之一.三七具有诱导外周血T细胞发生凋亡的作用,通过下调过度增生的免疫活性细胞减轻系膜增生型肾炎免疫炎症的损害.

Fas/FasL、PCNA在喉癌中的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL、PCNA与喉癌的关系.方法:用免疫组化SP法检测68例喉癌(鳞状细胞癌)中Fas/FasL及PCNA的表达.结果:Fas高表达者倾向于高分化鳞癌(Ⅰ级)Ⅰ、Ⅱ期临床分期及无淋巴结转移,Fas高表达者倾向于低分化鳞癌(Ⅲ组),有淋巴结转移,PCNA高增殖频率者,倾向于低分化鳞癌(Ⅲ级)、Ⅲ、Ⅳ期临床分期及有淋巴结转移.Fas/FasL在间质淋巴细胞中的表达与喉癌的生物行为无明显相关性(P＞0.05).结论:Fas、FasL、PCNA在喉癌中的表达与其分级、临床分期、淋巴结转移密切相关:在喉癌间质淋巴细胞的表达与上述无关.PCNA可作为喉癌肿瘤进展的主要参考指标.

补肾活血中药对外阴营养不良患者 Fas/Fasl系统的研究

目的:观察补肾活血中药对外阴营养不良患者临床疗效,检测外阴营养不良病变组织中Fas、Fasl蛋白的表达,探讨补肾活血中药对外阴营养不良作用机制.方法:120例肾虚血瘀型外阴营养不良患者随机分两组,每组60例.中药组口服祛白止痒颗粒,活血止痒散外洗及消白灵软膏外涂.西药组予激素药膏外涂.观察治疗后总有效率,检测病变组织中Fas、Fasl表达.结果:中药组治疗后有效率(86.66%)明显优于西药组(55.00%),有统计学意义(P<0.05).中药组治疗后F a s蛋白表达增高,F a s l蛋白表达减少,与西药组比较有统计学意义(P<0.05).结论:补肾活血中药是治疗本病的有效方药.其作用机理可能与调整自身Fas、Fasl蛋白的表达,促进病变皮肤恢复有关.