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天津市再生水有机提取物雌激素效应研究
目的研究天津市某再生水厂各处理单元水体的雌激素效应.方法采用反相C-18固相萃取柱提取各处理单元水样中目标物质,采用MCF-7细胞(人乳腺癌细胞)增殖试验和基因重组酵母试验检测水样有机提取物的雌激素效应.
关键词： 细胞增殖试验 MCF-7乳腺癌细胞 基因重组酵母试验 再生水 雌激素效应 -
岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移
目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制.方法:分别用25,55,85 mg·L-1岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组.获得25,55,85 mg·L-1 JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基.利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L-1 JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组.分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化.结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P＜0.01),HUVEC增殖显著降低(P ＜0.01);25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P＜0.01).与MCF-7比较,25,55,85 mg·L-1 JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/mTOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子.结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/mTOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性.
关键词： 岩大戟内酯B MCF-7乳腺癌细胞 人脐静脉血管内皮细胞 增殖 迁移 Akt信号通路 -
慢病毒介导高表达OTUD7B对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为影响
目的 去泛素化酶OTUD7B与肿瘤的发生、发展密切相关.为了明确OTUD7B在乳腺癌中所发挥的作用,实验利用慢病毒构建高表达OTUD7B载体感染MCF-7乳腺癌细胞后对其生物学行为的影响.方法 构建带有绿色荧光蛋白标签的人OTUD7B表达质粒的慢病毒(pEGFP-hOTUD7B)及对照(pEGFP-CI)感染MCF-7乳腺癌细胞;于荧光倒置显微镜下观察病毒转染效果及应用蛋白质印迹法及免疫组化法检测OTUD7B的表达水平;MTS法检测实验组(pEGFP-hOTUD7B)、阴性对照组(pEGFP-CI)和正常对照组对MCF-7乳腺癌细胞增殖能力的影响;应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 感染病毒后于荧光倒置显微镜下观察病毒感染效率,可见病毒感染成功.应用蛋白质印迹法检测病毒感染率并找出适病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI),当MOI=30时,实验组、阴性对照组和正常对照组灰度值分别为3.81±0.08、2.12±0.078和2.05±0.15,差异有统计学意义,F=402.03,P<0.001.应用免疫组化法可见感染OTUD7B表达水平.MTS法结果显示,实验组、阴性对照组和正常对照组细胞24 h A值分别为0.36±0.08、0.56±0.25和0.69±0.17,F=11.819,P<0.001;48 h A值分别为0.65±0.17、1.45±0.48和1.82±0.63,F=23.752,P<0.001;在72 h A值分别为0.73±0.21、1.58±0.63和1.99±0.27,F=35.563,P<0.001.细胞划痕试验显示,24 h后实验组组迁移率为(7.7±0.91)%,阴性对照组和正常对照组迁移率分别为(13.4±1.52)%和(12.1±1.32)%,F=49.36,P<0.001,48 h后实验组迁移率为(12.4±1.29)%,阴性对照组及正常对照组迁移率分别为(32.9±1.71)%和(31.8±1.59)%,F=504.50,P<0.001.流式细胞仪检测细胞凋亡结果提示,实验组与阴性对照组及正常对照组相比明显使细胞阻滞在G0/G1期,促进其凋亡,FG0/G1期=425.102,FS期=135.063,均P<0.001.结论 成功构建了能够高表达OTUD7B的慢病毒载体,明显抑制了MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移,并促进了其凋亡.
关键词： MCF-7乳腺癌细胞 OTUD7B 慢病毒感染 增殖 迁移 -
紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的蛋白质组研究
目的 研究紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的分子机制.方法 以100 nmol/L紫杉醇作用MCF-7细胞24h后提取细胞总蛋白,利用蛋白质组技术,对紫杉醇诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后的细胞蛋白进行二维电泳图谱分析,通过质谱鉴定差异蛋白质.结果 通过对凋亡前后的蛋白质组二维电泳图谱分析,找到了17个差异较大的蛋白质,其中6个蛋白质通过质谱得到了鉴定,它们是烯醇化酶、细胞核氯离子通道蛋白、角蛋白8、核糖体蛋白S12、galectin-1和Hint.结论 通过蛋白质组技术,发现了在紫杉醇诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡前后发生变化的6种蛋白质;这些差异蛋白质在紫杉醇诱导细胞凋亡中发挥一定的作用.
关键词： 紫杉醇 MCF-7乳腺癌细胞 凋亡 蛋白质组 -
白藜芦醇抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖的机制研究
目的:研究白藜芦醇对MCF-7乳腺癌细胞抑制效应及其作用机制.方法:以人MCF-7乳腺癌细胞株为研究对象,利用MTT方法研究白藜芦醇抑制MCF-7乳腺癌细胞的生物学效应;观察在ERK1/2抑制剂PD98059预处理情况下,白藜芦醇抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖效应的改变;利用免疫印迹方法观察白藜芦醇对MCF-7乳腺癌细胞中ERK1/2与AKT信号分子的蛋白表达.结果:白藜芦醇能够明显降低MCF-7乳腺癌细胞增殖能力,该作用呈一定的浓度依赖性关系.在ERK1/2抑制剂PD98059预处理情况下,白藜芦醇对MCF-7乳腺癌细胞增殖抑制效应能明显抑制,PD98059可明显减轻该效应.同时,白藜芦醇明显增加p-ERK1/2蛋白表达,降低p-AKT表达水平,但对ERK1/2与AKT蛋白表达无改变.结论:白藜芦醇能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖,该效应与白藜芦醇对ERK1/2及AKT信号途径的调节有关.
关键词： 白藜芦醇 MCF-7乳腺癌细胞 增殖 ERK1/2 AKT -
他莫昔芬对人乳腺癌细胞(MCF-7)周期进程的影响
目的:通过不同浓度的他莫昔芬(TAM)对体外培养的MCF-7细胞周期进程的影响,探讨TAM治疗乳腺癌的作用机制.以便为MCF-7细胞同步化后,再应用化疗药物,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法:采用人乳腺癌细胞MCF-7体外培养,加入不同浓度的TAM(即0.1nm,10nm,100nm和1μm)培养一定时间后,检测其细胞周期各时相的变化.结果:发现随TAM浓度的增高,MCF-7细胞G0/G1期不断增高.结论:TAM可抑制MCF-7细胞周期进程.TAM浓度在1μm时,89.6%的MCF-7细胞集中在G0/G1期.
关键词： MCF-7乳腺癌细胞 他莫昔芬(TAM) -
pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒的构建及在MCF-7乳腺癌细胞中的转染
目的 构建pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒,并进行鉴定.为进一步研究Smad3在抑制乳腺癌生长机制中起到的作用提供实验基础.方法 利用RT-PCR方法从MCF-7乳腺癌细胞中获得cDNA,应用PCR方法扩增、提取 Smad3的基因片段,酶切后与pEGFP-C3真核表达载体连接,构建pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功.将构建的质粒瞬时转染至MCF-7乳腺癌细胞中,通过荧光倒置显微镜观察、RT-PCR技术及Westen blot技术鉴定转染是否成功.结果本实验成功构建了pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒.结论 pEGFP-C3/Smad3真核表达质粒瞬时转染到MCF-7细胞中,可使Smad3在基因与蛋白水平的表达显著上调.
关键词： EGFP smad3 真核表达载体 MCF-7乳腺癌细胞 -
汉黄芩素抑制胰岛素样生长因子-1对乳腺癌细胞增殖与雌激素受体α表达的促进作用和鸡胚尿囊膜的血管生成
本文旨在探讨汉黄芩素体外抗乳腺癌作用与胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor-1,IGF-1)通路和雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)的关系,及其对鸡胚尿囊膜血管生成的影响.用IGF-1、汉黄芩素或ERα抑制剂ICI182780单独或联合处理人乳腺癌MCF-7细胞,用MTT比色法检测细胞增殖情况,用Western blot方法检测ERα蛋白和p-Akt蛋白表达的变化；另外,采用孵育6日龄的鸡胚制备绒毛尿囊膜(chorioallantoie membrane,CAM)模型检测不同浓度汉黄芩素对新生血管抑制作用.结果显示,汉黄芩素和ICI182780均能显著抑制IGF-1的促细胞增殖作用.与IGF-1单独处理的细胞相比,汉黄芩素与IGF-1共同处理的细胞内ERα和p-Akt蛋白的表达水平显著降低;但与IGF-1和ICI182780共同处理的细胞相比无显著差异.另外,不同浓度的汉黄芩素对鸡胚CAM的血管生成均有显著的抑制作用.以上结果提示,汉黄苓素以ERα依赖方式抑制IGF-1介导的PI3K-Akt信号通路,抑制乳腺癌细胞增殖,并对鸡胚CAM新生血管的生成有明显的抑制作用.
关键词： 汉黄芩素 MCF-7乳腺癌细胞 胰岛素样生长因子-1 雌激素受体α -
低分子季铵化壳聚糖对乳腺癌细胞作用的研究
目的研究低分子季铵化壳聚糖对MCF-7乳腺癌细胞的作用,探讨其抑制肿瘤的作用机理.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测低分子季铵化壳聚糖对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响,采用端粒酶试剂盒考察其对端粒酶的影响.结果低分子季铵化壳聚糖可抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长,作用于细胞周期G1期,抑制端粒酶活性.结论低分子季铵化壳聚糖能够诱导MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,具有一定的抑瘤作用.
关键词： 低分子季铵化壳聚糖 MCF-7乳腺癌细胞 细胞凋亡 -
环境类雌激素双酚A通过上调Snail蛋白表达促进MCF-7乳腺癌细胞迁移
目的:探讨外源性双酚A(BPA)调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制.方法:通过划痕实验和Transwell实验检测MCF-7乳腺癌细胞迁移能力,并以黏附实验反向辅助验证;通过质粒转染干扰Snail蛋白表达水平,进一步研究外源性BPA调控MCF-7乳腺癌细胞迁移的分子机制.结果:外源性BPA能上调细胞中Snail的表达水平,从而下调E-cadherin的表达并促进MCF-7乳腺癌细胞迁移;siRNA干扰Snail表达后MCF-7乳腺癌细胞迁移减慢.此外,BPA刺激能降低MCF-7乳腺癌细胞黏附能力.结论:外源性BPA可通过上调Snail表达水平,促进MCF-7乳腺癌细胞的迁移,为进一步阐明乳腺癌细胞侵袭与转移的分子调控机制提供了新线索.
关键词： 双酚A Snail E-cadherin MCF-7乳腺癌细胞 迁移 -
苦瓜皂苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响
目的 研究苦瓜皂苷抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用及其诱导凋亡的机制.方法 采用MTT法观察苦瓜皂苷对MCF-7细胞的生长抑制作用；HE染色观察皂苷作用后癌细胞的形态学变化；免疫荧光染色检测Bcl-2的阳性表达率变化；流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率.结果 MTT法得到苦瓜皂苷与MCF-7细胞生长抑制率之间存在浓度依赖关系,半数致死量IC50为159.02 mg/L；HE染色观察到经苦瓜皂苷作用24h后的MCF-7细胞出现典型的凋亡形态学特征；免疫荧光检测到苦瓜皂苷作用细胞24h后,Bcl-2的阳性表达率为22.35％,远小于对照组75.61％；流式细胞术表明苦瓜皂苷处理细胞后,S期细胞数明显增加,细胞周期被阻滞在S期,随着皂苷作用时间的延长细胞凋亡率增加.结论 苦瓜皂苷可抑制体外培养MCF-7细胞乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与细胞凋亡机制有关.
关键词： 苦瓜皂苷 MCF-7乳腺癌细胞 增殖 细胞凋亡 -
MCF-7乳腺癌细胞的国内研究进展
通过综合近五年国内对MCF-7乳腺癌细胞研究的情况，总结近期研究成果，从而为未来乳腺癌的研究和治疗的提供参考。
关键词： MCF-7乳腺癌细胞 国内研究 进展 -
甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究
目的:研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法:采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;western blot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达.结果:甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖.甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率高可达(68.40±4.87)%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3.结论:甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关.
关键词： 甲异靛 MCF-7乳腺癌细胞 凋亡 -
干扰素-γ、干扰素-α2b二者联合应用诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及机制
目的:研究干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、干扰素-α2b(Interferon-α2b,IFN-α2b)二者联合应用对MCF-7乳腺癌细胞的诱导凋亡作用,并探讨其诱导凋亡作用的机制.方法:通过流式细胞仪(FCM)检测处理后细胞凋亡情况及Fas/FasL蛋白表达情况.结果:MCF-7乳腺癌细胞处理后凋亡细胞百分率增加,并且随着处理时间的延长,凋亡细胞百分率有增加趋势,差异显著,有统计学意义(p<0.05);FasL的表达增加,并且随着处理时间的延长,FasL的表达有增加趋势,差异显著,有统计学意义(p<0.05),Fa s的表达实验组与对照组无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05).结论:干扰素-γ、干扰素-α2b二者联合应用可诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡,作用机制可能与通过上调FasL蛋白的表达,加强Fas/FasL之间的交联及使Fas/FasL亟路敏感性增加有关.
