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中医药治疗白癜风作用机制的相关研究进展
近十年,中医药方法治疗白癜风取得的疗效备受瞩目;有关中医药治疗白癜风的作用机制研究日益增加,在相关领域取得了一定的研究成果;本文集有关中医药治疗白癜风作用机制相关研究从研究对象、黑素细胞的数量及活性、酪氨酸酶的活性、炎症因子、自身免疫、氧化应激反应及信号通路等层面进行综述,望帮助研究者进一步探索中医药治疗白癜风的作用机制,指导临床用药,终致患者满意疗效.
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岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移
目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制.方法:分别用25,55,85 mg·L-1岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组.获得25,55,85 mg·L-1 JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基.利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L-1 JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组.分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化.结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P＜0.01),HUVEC增殖显著降低(P ＜0.01);25,55,85 mg·L-1 JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P＜0.01).与MCF-7比较,25,55,85 mg·L-1 JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/mTOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子.结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/mTOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性.
关键词： 岩大戟内酯B MCF-7乳腺癌细胞 人脐静脉血管内皮细胞 增殖 迁移 Akt信号通路 -
雷公藤红素通过影响Akt信号通路和整合素表达抑制肺癌细胞的转移
雷公藤红素是从传统中药雷公藤中提取分离得到的一种醌甲基三萜,具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等药理活性.该实验就雷公藤红素对肺癌细胞黏附、迁移及侵袭的影响进行了研究.用划痕实验测定不同浓度雷公藤红素对肺癌细胞迁移的影响;用Transwell实验测定不同浓度雷公藤红素对肺癌细胞侵袭的影响;用RT-PCR及Western blot实验检测不同浓度的雷公藤红素对肺癌细胞中整合素家族及Akt信号通路的影响.实验结果表明:雷公藤红素以剂量依赖的方式抑制肺癌细胞的黏附、迁移及侵袭,抑制整合素β3,β4,αv的表达,以及抑制Akt信号通路中磷酸化Akt,GSK-3β,c-Raf,PDK1的表达.因此,该研究暗示雷公藤红素能通过抑制Akt信号通路和整合素的表达来抑制肺癌细胞的转移.
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奥氮平对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用及机制
目的 探讨第2代抗精神病药物(SGA)奥氮平(olanzapine)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外脂肪分化的影响及其作用机制.方法 培养小鼠BMSCs,MTT法检测不同浓度奥氮平对BMSCs增殖的影响;通过油红O染色观察细胞形态,Western blotting检测脂肪分化标志基因蛋白αP2和C/EBPβ的表达,Real-time PCR检测成脂相关基因Leptin、C/EBPα和TNF-α的mRNA表达情况;同时Western blotting检测Akt信号通路上下游相关分子的表达水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt特异性阻断剂对小鼠BMSCs脂肪分化的影响.结果 MTT法结果显示,20μmol/L奥氮平对BMSCs的毒性小;油红O染色可见加入奥氮平的细胞内脂肪滴明显多于对照组;Western blotting结果显示,αP2和C/EBPβ的表达水平较对照组上升了36％(P＜0.01)和25％ (P ＜0.05);Real-time PCR结果显示,Leptin、C/EBPα和TNF-α的表达水平较对照组分别上升68％(P＜0.001)、79％ (P ＜0.01)和60％ (P ＜0.01),均具有统计学意义;Western blotting检测结果显示,p-Akt的含量明显高于对照组,磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-31β)的表达随着p-Akt表达的增加逐渐减少;加入PI3K/Akt特异性阻断剂(LY294002)后αP2和C/EBP1β的表达受到抑制,细胞中的脂肪滴也明显减少.结论 奥氮平可能通过促使PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平升高来促进小鼠BMSCs的脂肪分化.
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Galectin-1在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 检测膀胱癌细胞中半乳糖凝聚素1(Gal-1)的表达是否异常,并通过慢病毒干扰技术敲除膀胱癌细胞中Gal-1的表达后,检测肿瘤细胞的增殖能力与迁移能力有无改变.方法 用荧光实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)技术分别检测膀胱癌细胞与正常膀胱上皮细胞相比,Gal-1的表达在mRNA水平以及蛋白水平有无区别.再利用RNA干扰慢病毒敲除膀胱癌细胞内Gal-1的表达后,通过WST-1试剂盒以及transwell迁移实验检测膀胱癌细胞的增殖和迁移能力有无发生改变.后再应用Western Blot技术检测敲除Gal-1的表达后AKT、P38、JNK三条通路的激活水平有无发生改变.结果 膀胱癌细胞内的Gal-1的表达水平与正常膀胱上皮细胞相比,无论在mRNA水平还是在蛋白水平均明显上调.敲除Gal-1的表达后肿瘤细胞的增殖能力未发生明显改变,但迁移能力明显下调.敲除Gal-1的表达后,AKT信号通路的磷酸化水平明显下降.结论 Gal-1在膀胱癌细胞中表达明显上调,并且与膀胱癌细胞的迁移能力密切相关.Gal-1可能通过改变AKT信号通路的激活水平从而调控了膀胱癌细胞的迁移能力.
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miR-29下调AKT信号通路中多个基因的表达
目的 AKT信号通路在心力衰竭的病理机制中扮演重要角色,本研究旨在筛选调节AKT信号通路的microRNA,为进一步研究microRNA在心力衰竭发生发展中的作用奠定基础.方法 首先用GeneSet Enrichment Analysis方法及Targetscan和RNAhybrid软件寻找可能调节AKT信号通路的microRNA,然后用双荧光素酶报告系统验证microRNA对AKT信号通路基因3′-UTR的调节作用.结果 Gene Set Enrichment Analysis分析提示:miR-15/16、miR-21、miR-29、miR-103、miR-126、miR-128、miR-129、miR-200和miR-493共9个microRNA家族可能调节AKT信号通路;利用Targetscan和RNAhybrid软件反向验证以上9个候选microRNAs,miR-29与AKT信号通路中的10个基因(TGFβ3、HDGF、VEGF、LEP、PDGFRB、PIK3RI、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A)的3′-UTR杂交分值较高,进一步实验验证发现TGFβ3、VEGF、LEP、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A都是miR-29的靶基因.结论 AKT信号通路中的多个基因都是miR-29的靶基因,可受到miR-29的负调节作用.
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多囊卵巢综合征患者感染病原菌分布与对AKT通路蛋白的影响研究
目的：分析多囊卵巢综合征患者原菌分布，探讨感染患者血清中 PI3K、AKT信号转导通路蛋白的表达变化，为临床治疗提供参考依据。方法选择医院2009年1月－2014年6月诊治的160例多囊卵巢综合征感染患者为感染组，另选择120例多囊卵巢综合征未感染患者为未感染组，同期选择健康体检者120名为对照组；比较3组受试人员临床指标，数据采用SPSS 19．0软件进行统计分析。结果160例感染患者中共分离出病原菌160株，以革兰阴性菌为主，共100株占62．5％，感染组患者血清中PTEN、AKT、PI3K及瘦素、胰岛素样生长因子和NFκB蛋白水平明显升高（P＜0．01）。结论多囊卵巢综合征患者感染病原菌以革兰阴性菌为主，且感染后患者血清中AKT通路被激活。
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Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响研究
目的 探讨Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及对AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响.方法 采用RT-PCR及Western Blot检测胃癌组织和癌旁组织中Gab2的表达.培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别用Gab2小干扰RNA(Gab2-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h.应用Western Blot检测细胞中Gab2、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达的变化,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力.结果 胃癌组织中Gab2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P﹤0.01);Gab2-siRNA组Gab2蛋白表达水平明显低于对照组(P﹤0.01);siRNA-NC组细胞的存活率、凋亡率、迁移数及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);Gab2-siRNA组细胞的AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),细胞的存活率、迁移数及p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P﹤0.01),细胞凋亡率及Bax蛋白表达明显高于对照组(P﹤0.01).结论 Gab2在胃癌组织高表达,沉默Gab2的表达能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移,并通过调节Bax、Bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,其可能的机制与AKT信号通路的调控有关.
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AKT信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK阳性肺癌细胞凋亡迁移中的作用及机制研究
目的 探讨AKT信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK阳性肺癌细胞凋亡迁移中的作用及机制研究.方法 培养人肺癌细胞株H2228,CCK8实验检测20、40、80、160、320、640 nmol/L的克唑替尼作用于细胞48 h后对细胞增殖的影响,计算半抑制浓度(IC50);300 nmol/L克唑替尼处理细胞24、48、72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移数;Western Blot检测Bcl-xL、Bcl-2、Bim、AKT、p-AKT蛋白表达.结果 克唑替尼能明显抑制人肺癌细胞株H2228增殖(P﹤0.01),根据IC50值选择300 nmol/L克唑替尼为研究对象;克唑替尼能明显促进细胞凋亡,抑制细胞迁移(P﹤0.01);克唑替尼能下调Bcl-xL、Bcl-2、p-AKT蛋白表达,上调Bim蛋白表达(P﹤0.01).AKT蛋白表达水平在克唑替尼作用的各个时间点间比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 克唑替尼通过AKT信号通路抑制人肺癌细胞株H2228迁移,并通过调节Bcl-xL、Bcl-2、Bim蛋白表达促进细胞凋亡.
关键词： 克唑替尼 Akt信号通路 EML4-ALK阳性肺癌 凋亡 迁移 -
抑制Akt通路提高视网膜母细胞瘤对卡铂敏感性的实验研究
目的 探讨抑制Akt信号通路活性能否提高视网膜母细胞瘤(RB)SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性.设计 实验研究.研究对象SO-Rb50细胞株.方法 CCK-8法检测卡铂作用于细胞的IC50值;蛋白印迹法检测Akt、p-Akt、caspase 3、bax、p21蛋白在药物作用前后表达量的改变;流式细胞仪法检测药物作用前后细胞周期的改变.主要指标 IC50值,蛋白表达量,细胞周期中各期细胞百分比.结果 卡铂作用于SO-Rb50细胞48小时的IC50值为(30.1±5.9)mg/L;分别用5μM和10μM的LY294002抑制细胞Akt信号通路的活性后,卡铂作用于SO-Rb50细胞的IC50值分别为(16.3±0.83)mg/L和(8.64±0.11)mg/L.用卡铂(30mg/L)、LY294002(5 μM和10 μM)单独或联合作用于SO-Rb50细胞48 h后,细胞Akt活性随LY294002浓度的增加而降低,caspase-3蛋白生成增加,bax蛋白生成增加,p21蛋白在卡铂作用下生成显著增加;LY294002对细胞周期的进程无明显影响,卡铂使G0/G1期细胞百分比从(57.89±2.16)％下降至(12.11±2.87)％,G2/M期细胞从(0.34±0.34)％增加至(43.62±11.01)％,S期细胞无明显变化;两种药物联合作用并未改变卡铂对细胞周期的影响.结论 抑制Akt信号通路可提高SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性,抑制Akt信号通路可能是提高RB化疗疗效的一个靶点.
关键词： 视网膜母细胞瘤/药物疗法 卡铂 Akt信号通路 -
苯丙胺对大鼠额叶皮质AKT信号通路调控分子的影响
目的:探讨苯丙胺对额叶皮质部位AKT信号通路上游信号分子的影响.方法:选取健康雄性成年SD大鼠50只,分为空白组、生理盐水组和苯丙胺(AMPH)组.用旷场(open field)系统测试大鼠的行为学变化,用Western blot分析AKT信号通路上游信号分子的变化,用免疫组织化学观察相应分子阳性细胞的变化.结果:注射苯丙胺后大鼠活动度增加,且出现刻板行为.AMPH组大鼠额叶皮质pmTOR含量比空白组及生理盐水组减少,且pmTOR阳性细胞的数量也相应减少,而pPP2A和PHLPP没有显著性变化.结论:苯丙胺抑制AKT信号通路可能与减少pmTOR的表达密切相关.
关键词： 苯丙胺 Akt信号通路 额叶皮质 Western blot 免疫组织化学 -
磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt信号通路与脑缺血再灌注损伤
缺血性脑卒中具有发病率、复发率、致残率及病死率高的特点.脑缺血再灌注损伤的防治一直是神经病学领域的重点,有关其相关机制的研究是当今亟待解决的问题,而缺血半暗带的神经细胞凋亡更是研究的热点.脑缺血再灌注后既启动了凋亡信号通路,也激活了抗凋亡信号通路,两者的动态平衡决定了细胞损伤的终转归.近来大量研究表明,磷脂酰肌醇3-激酶( phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt(简称PI3K-Akt)信号通路在一系列上游或旁路信号分子的影响下,作用于下游的信号分子,在脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡过程中发挥着重要的作用.
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土荆皮酸对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探讨土荆皮酸对肺癌细胞系A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 体外培养的A549细胞,用不同浓度的土荆皮酸(0、4、8、16、32 μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对A549细胞增殖的影响;土荆皮酸(0、4、8、16 μmol/L)处理A549细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,分光光度计检测Casepase-3相对活性,Western blot法检测PTEN、Akt、p-Akt的表达.结果 土荆皮酸能有效抑制A549细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性(P＜ 0.05);土荆皮酸作用A549细胞48 h后,细胞凋亡率从14.8％上升至37.7％,显著高于对照组(土荆皮酸0 μmol/L) (P＜ 0.05);流式细胞仪检测结果显示,土荆皮酸能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换;Casepase-3相对活性显著增加(P＜0.05);土荆皮酸可上调PTEN表达并抑制p-Akt的表达(P＜0.05).结论 土荆皮酸可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与上调PTEN并抑制Akt信号通路,继而阻滞细胞周期并激活线粒体凋亡途径相关.
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小檗碱对大鼠自体原位肝脏移植肾脏损伤的影响
目的：探讨小檗碱对大鼠自体原位肝脏移植引起的肾脏损伤的保护作用及Akt信号通路在该过程中的作用。方法：健康雄性SD大鼠24只，随机分为假手术组（S组）、自体原位肝脏移植组(AT组）、自体原位肝脏移植模型+小檗碱处理组（BBR组），每组8只。 S组接受麻醉后仅开腹，游离肝脏周围血管及韧带，关腹。 AT组采用自体肝脏移植模型。 BBR组大鼠术前连续灌胃7 d[200 mg/(kg·d）]，手术操作同AT组。分别于再灌注8 h经下腔静脉取血，留取肾脏组织，比较各组之间的肾脏功能（BUN、Cr)，肾脏组织形态学变化，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），p-Akt蛋白表达水平和凋亡细胞计数结果。结果：AT和BBR组BUN、Cr、MDA水平，p-Akt蛋白表达水平和凋亡细胞计数均高于S组。 AT组BUN、Cr、MDA水平和凋亡细胞计数均高于BBR组，p-Akt蛋白表达水平低于BBR组。AT和BBR组肾脏组织SOD水平均低于S组，AT组较BBR组降低更明显。S组肾脏组织形态结构未见异常，AT组和BBR组损伤明显，BBR组损伤较AT组减轻。结论：小檗碱可能通过激活Akt信号通路抑制大鼠自体原位肝脏移植引起的肾小管上皮细胞凋亡。
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IRS-2 siRNA对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响及其分子机制
目的 观察胰岛素受体底物2(IRS-2)siRNA对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响,探讨其分子机制. 方法 应用siRNA干扰IRS-2表达,将G401细胞分为空白对照组、阴性对照组和IRS-2 siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA,IRS-2 siRNA组转染IRS-2特异性siRNA.MTT法检测IRS-2对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响,流式细胞术分析IRS-2 siRNA对细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测IRS-2 siRNA对p-Akt、Akt、CDK2和Cyclin A2表达的影响.结果 与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组G401细胞的IRS-2 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P＜0.01),IRS-2 siRNA抑制肾母细胞瘤G401细胞增殖;与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组G401 S期细胞数量显著增加(P＜0.01),G2/M期细胞数量显著减少(P＜0.01),IRS-2 siRNA组G401细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P＜0.01);与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组p-Akt、CDK2和Cyclin A2在蛋白水平的表达均下调(P＜0.01). 结论 IRS-2通过激活Akt信号通路,调控CDK2和Cyclin A2的表达,进而促进肾母细胞瘤G401细胞增殖.
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冬凌草甲素通过抑制Akt通路诱导人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞凋亡
目的:观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前歹列腺癌细胞DU145细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法:体外培养的DU145细胞,用不同浓度冬凌草甲素(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对DU145细胞增殖的影响;冬凌草甲素(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理DU145细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Westem blot法检测Akt、p-Akt、p-GSK-3β、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况.结果:冬凌草甲素对DU145细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;DU145细胞经冬凌草甲素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达降低.结论:冬凌草甲素可通过抑制DU145细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2有关.
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Smad1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞迁移能力的影响研究
目的:研究Smad1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞迁移能力的影响.方法:提取收集的胃腺癌组织及对应的癌旁组织中的蛋白,Western blot检测Smad1的表达水平.以胃腺癌细胞HGC-27为研究对象,细胞转染过表达Smad1的载体(p-EGFP-C1/Smad1)和Smad1小干扰RNA(Smad1 siRNA),同时转染p-EGFP-C1和siRNA control为对照.细胞划痕实验检测细胞迁移能力.Western blot检测细胞中MMP-9、MMP-2、p-Akt、Akt的表达水平.Akt信号通路抑制剂LY294002(20 μg/ml)作用于胃腺癌细胞HGC-27,MTIT检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.Western blot检测MMP-9、MMP-2、p-Akt、Akt蛋白表达水平.结果:胃腺癌组织中Smad1的水平明显低于癌旁组织(P＜0.01).p-EGFP-C1/Smad1组细胞存活率和迁移率均明显低于p-EGFP-C1组(P＜0.01).Smad1 siRNA组细胞存活率和迁移率均明显高于siRNAcontrol组(P＜0.01).p-EGFP-C1、p-EGFP-C1/Smad1、siRNA control、Smad1 siRNA组细胞中Akt蛋白表达水平没有变化.p-EGFP-C1/Smad1组细胞MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平明显低于p-EGFP-C1组(P＜0.01).Smad1 siRNA组细胞MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平明显高于siRNA control(P＜0.01).胃腺癌细胞与Akt信号通路抑制剂作用后细胞增殖和迁移趋势与p-EGFP-C1/Smad1组一致.结论:Smad1在胃腺癌组织中低表达.Smad1能够抑制胃腺癌细胞增殖和迁移,作用机制与Akt信号通路有关.
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下调动脉粥样硬化斑块中TRPC5的表达对人巨噬细胞凋亡的影响及机制研究
目的:探讨动脉粥样硬化病变时瞬时受体电位通道5(TRPC5)基因表达对人巨噬细胞凋亡的影响.方法:建立小鼠动脉粥样硬化模型,通过RT-PCR检测动脉粥样硬化斑块TRPC5基因表达;将巨噬细胞分为对照组、NC组、ox-LDL组、TRPC5-siRNA组和TRPC5-siRNA+ox-LDL组,细胞处理24 h后Western blot检测各组细胞中TRPC5的蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖及凋亡;Western blot检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)及丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路AKT及磷酸化的AKT的蛋白表达.结果:成功建立动脉粥样硬化模型.TRPC5基因在动脉粥样硬化组中的表达显著高于对照组(P<0.05);与对照组比较,TRPC5-siRNA组TRPC5、Caspase3的表达及细胞凋亡率显著降低,细胞增殖及p-AKT表达显著升高,ox-LDL组TRPC5、Caspase3的表达及细胞凋亡率显著升高,细胞增殖及p-AKT表达显著降低(P<0.05);TRPC5-siRNA+ox-LDL组TRPC5、Caspase3的表达及细胞凋亡率显著低于ox-LDL组,高于TRPC5-siRNA组,细胞增殖及p-AKT表达显著高于ox-LDL组,低于TRPC5-siRNA组(P<0.05);AKT在各组间表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:TRPC5基因在动脉粥样硬化斑块中表达升高,下调TRPC5表达可减弱ox-LDL对巨噬细胞增殖的抑制作用和凋亡的促进作用,机制与AKT信号通路有关.
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四溴苯三唑对人结肠癌SW480细胞凋亡的诱导作用及其机制
目的:探讨4,5,6,7-四溴苯三唑(TBB)对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用,并初步探讨其可能的作用机制.方法:选取处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞,将其分为对照组(给予0μmol·L-1 TBB)和实验组(给予1、3、10、30和100μmol·L-1 TBB).采用MTT比色法检测SW480细胞存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测SW480细胞凋亡率及细胞中活性氧(ROS)水平,采用Western blotting法检测细胞中抗凋亡蛋白p-Akt、Bcl-2和促凋亡蛋白Bad、pro-caspase-9及cleaved-caspase-3表达水平.结果:MTT法检测,与对照组比较,实验组SW480细胞存活率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测,随着处理时间的增加,与对照组比较,TBB作用3、6、12和24 h时SW480细胞凋亡率明显高于作用0 h时(P<0.05);流式细胞术检测,TBB作用3、6、12和24 h时结肠癌SW480细胞中ROS水平高于作用0 h时(P<0.05);Western blotting法检测,SW480细胞中抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达水平逐渐降低,促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3表达水平逐渐升高,pro-caspase-9蛋白表达水平逐渐降低,与对照组(0 h)比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:TBB对体外培养的人结肠癌SW480细胞有明显的杀伤作用,可诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Akt活性或促进细胞中ROS产生有关.
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四溴苯三唑对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制
目的:探讨四溴苯三唑(TBB)对人宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用,阐明其对相关信号转导通路的作用机制.方法:选取处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,将其分为对照组(未给予TBB)和实验组(给予TBB).采用MTT比色法检测HeLa细胞存活率,采用倒置显微镜观察人宫颈癌HeLa细胞形态表现,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞中凋亡相关蛋白p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3和Pro-caspase-3表达水平.结果:MTT法检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞存活率明显降低(P<0.01),且呈浓度依赖性;倒置显微镜下观察,实验组HeLa细胞出现体积缩小、细胞核皱缩等细胞凋亡的形态变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法和流式细胞术检测,与对照组比较,实验组各时间段(3、6、12和24 h)细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);Western blotting检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞中抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达水平逐渐降低,促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3表达水平逐渐升高,Pro-caspase-3表达水平逐渐降低(P<0.05或P<0.01).结论:TBB可能通过抑制Akt信号通路的活性进而有效促进HeLa细胞凋亡.
关键词： 四溴苯三唑 宫颈肿瘤HeLa细胞 细胞凋亡 Akt信号通路
