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汉黄芩素对人肺癌A549细胞株增殖活性的影响
目的：本实验通过研究汉黄芩素对人肺癌A549细胞株增殖活性的影响，为其机制的研究及临床应用提供理论依据。方法：实验通过MTT法、生长曲线法、检测不同浓度汉黄芩素、不同作用时间对肺癌细胞增殖活性的影响，通过HE染色实验观察汉黄芩素对A549细胞形态学变化。结果：实验显示汉黄芩素对人肺癌细胞株有较强的抑制作用，当药物浓度达到10μg/mL时，增殖抑制作用明显。随着给药时间延长，细胞存活浓度递减。汉黄芩素能够改变肺癌细胞形态，用药后与对照组比较细胞变圆，体积缩小，核质深染，胞质凝集。结论：汉黄芩素能够抑制人肺癌细胞A549增殖，改变细胞的形态，将对肺癌治疗具有一定的指导意义。
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UPLC-MS/MS法同时测定感冒宁颗粒5种成分含量
目的 建立同时测定感冒宁颗粒中腺苷、绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、汉黄芩素含量的方法 .方法采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)联用技术,色谱柱为Agilent ZOBAX SB C18(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液,等度洗脱,流速0.2 ml/min,柱温35℃,进样量2μl;采用电喷雾化离子源,正负离子切换模式,多反应监测模式进行定量分析,离子源温度300℃,干燥气温度400℃,干燥气流量为20 L/min,雾化气压力55 psi,毛细管电压4000 V.结果 感冒宁颗粒中腺苷、绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、汉黄芩素检测质量浓度线性范围分别为0.20～12.80 ng(r=0.9996)、1.00～64.00 ng(r=0.9998)、0.40～25.60 ng(r=0.9996)、4.00～256.00 ng(r=0.9992)、0.20～12.8 ng(r=0.9991),线性关系良好;检测限分别为0.02、0.10、0.04、0.40、0.02 ng,定量限分别为0.04、0.20、0.08、0.80、0.04 ng;精密度、重复性、稳定性的RSD均≤3.5％;平均加样回收率在99.30％～100.75％之间,RSD为2.09％～3.17％.结论 所建立的方法简单、快速、灵敏、准确,可同时测定感冒宁颗粒中5种成分的含量,可用于感冒宁颗粒的质量控制.
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黄芩提取物多指标成分鉴定及指纹图谱的研究
目的:应用超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种活性成分及其指纹图谱同时检测的方法.方法:以ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7 μm),乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30c.结果:4种成分色谱显示分离度良好,经质谱得到各成分离子碎片,查阅相关文献均得以证实,并在同一色谱条件下检测指纹图谱,结果显示相似度良好.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于黄芩提取物的质量控制研究.
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黄芩中4种黄酮的抗肿瘤细胞株活性比较
目的:汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩苷及黄芩素是黄芩的主要成分.对前三种黄酮的抗癌活性文献有不同的报导.方法:本研究比较了4种黄酮在相同浓度下对4个肿瘤细胞株24 h及48 h存活率的影响.结果:实验结果显示,汉黄芩素对4种细胞株都有明显的抑制作用,48 h半抑制浓度分别为97.9 μM(肺腺癌A549)、15.3 μM(子宫颈癌HeLa)、147 μM(肝细胞癌HepG2)及104 μM(乳腺癌MCF-7).其相应的糖化物,汉黄芩苷对4种细胞均未显示抑制.黄芩素抑制HeLa细胞,而糖化的黄芩苷抑制HepG2,且对MCF-7显示刺激作用.结论:以上结果显示,汉黄芩素在4种主要黄芩黄酮中具有强的抑制肿瘤细胞生长效能,而其他3种黄酮的抗肿瘤作用并不一致,黄芩苷甚至促进个别肿瘤细胞株的生长.因此,黄酮抗癌作用的研究及可能的临床应用更应在单体水平进行.
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汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移
目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响.方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40 μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平.结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40 μmol·L-的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P＜0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40 μmol·L-)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P ＜0.05,P＜0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关.
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双波长HPLC同时测定防风通圣丸中7个成分的含量
目的:建立防风通圣丸中栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分的高效液相色谱测定方法.方法:采用phenomenex Luna 5u-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.1％磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速0.8 mL·min-,检测波长分别为234,254 nm.结果:栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分在相应的范围内线性关系良好,r不低于0.999 1;平均回收率97.3％～99.8％;RSD均＜2.0.结论:经方法学验证,本方法简单、快速、灵敏、准确,可用于防风通圣丸中栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分的含量测定.
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蒙古黄芪的化学成分研究
目的:研究豆科植物蒙古黄芪的醇提取物的化学成分.方法:采用各种色谱技术对蒙古黄芪化学成分进行分离纯化,并通过理化性质和各种现代波谱技术来确定其结构.结果:从蒙古黄芪醇提物中分离得到了12个化合物,分别鉴定为Jβ-谷甾醇(1),胡萝卜苷(2),芒柄花素(3),千层纸素-A(4),汉黄芩素(5),毛蕊异黄酮(6),腺嘌呤核糖核苷(7),毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(8),(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(9),黄芪皂苷Ⅱ(10),异黄芪皂苷Ⅱ(11),D-3-甲氧基-手-肌醇(12).结论:化合物3和4为首次从蒙古黄芪中分离获得.
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HPLC同时测定黄栀花口服液中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量
目的:建立同时测定黄栀花口服液(金银花、栀子、黄芩等)中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、黄芩素与汉黄芩素含量的方法.方法:采用HPLC法,Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.1％的磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速1.0 mL· min-;检测波长(0 ～ 13 min,327 nm;13 ～ 15 min,238 nm;15～45 min,280nm).结果:根据回归方程,5种成分线性范围分别为绿原酸4.096×10-3 ～1.228 8×10-1μg(r =0.999 3);栀子苷4.204×10-3～1.2612×10-1μg(r =0.999 9);黄芩苷0.1175～3.525μg(r=0.9999);黄芩素4.152×10-3 ～1.245 6×10-1 μg(r =0.999 9);汉黄芩素4.256×10-4～1.276 8×10-2 μg(r=0.999 4);平均回收率分别为绿原酸99.31％,RSD 0.8％,栀子苷99.62％,RSD 0.5％,黄芩苷99.94％,RSD1.3％,黄芩素99.64％,RSD 0.8％,汉黄芩素100.1％,RSD 1.2％.结论:该方法操作简便、准确、重复性好,可用于黄栀花口服液的质量控制.
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HPLC同时测定清热解毒胶囊中6种成分的含量
目的:建立HPLC测定清热解毒胶囊中绿原酸、栀子苷、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素含量的方法.方法:采用Eclipse XDB色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈七.4％磷酸溶液,梯度洗脱,流速0.80 mL· min-,检测波长275nm.绿原酸、栀子苷、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素与其相邻质谱峰能完全分离.结果:绿原酸、栀子苷、木犀草苷、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的线性范围分别为7.83 ～313 mg·L-1(r =0.999 9),4.30 ～ 132 mg·L-1(r=0.999 8),0.836～33.5 mg·L-1(r =0.999 7),4.36～349 mg·L-1(r=1.000 0),0.731 ～58.4 mg·L-1(r =0.999 7),0.314 ～12.6 mg·L-1(r =0.999 7).方法回收率均不低于98％.结论:该方法简便、准确、重复性好,能排除其他成分的干扰,可用于该制剂的质量控制的评价.
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UPLC同时测定银黄颗粒中4种黄酮类成分含量
目的:建立银黄颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的UPLC含量测定方法.方法:采用ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm× 50 mm,1.7 μm)；流动相甲醇-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长274 nm,柱温30℃.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为1.09 ～21.8,0.340～6.80,0.116 ～2.32,0.102～2.04 μg,加样回收率分别为100.8％(RSD 0.32％),97.1％ (RSD 0.95％),101.5％ (RSD 1.6％),98.7％(RSD 0.059％).结论:该方法简便、快速,分离效果好,可为全面控制银黄颗粒的质量提供参考.
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汉黄芩素白蛋白微球的制备及其体外释放
目的:制备汉黄芩素白蛋白微球,并考察其体外释放及稳定性.方法:以白蛋白为载体,采用乳化交联法制备汉黄芩素白蛋白微球.在单因素考察基础上,利用正交设计优化汉黄芩素白蛋白微球制备[艺,并对微球的粒径和体外释放特性进行研究.结果:制得的微球形态圆整,平均粒径(0.95±0.14) μm,平均载药量(53.58 ±3.26)％,平均包封率(62.54±3.17)％,体外释放符合Higuchi方程,Q=10.402 8 t1/2 -1.205 6(r=0.998 2).结论:本实验获得了较理想的汉黄芩素白蛋白微球,其体外释放特性符合缓释制剂特征.
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HPLC法测定痛经膏贴中黄芩苷和汉黄芩素含量研究
目的:探索HPLC测定痛经膏贴中黄芩苷和汉黄芩素含量的方法.方法:Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm 5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水-磷酸(58:42:0.05);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:278 nm.结果:黄芩苷的线性范围为(0.44～2.20)μg(γ=0.999 7),平均回收率为98.64%,RSD=1.17%;汉黄芩素的线性范围为(0.012 8～0.204 8)μg(γ=0.999 9),平均回收率为98.96%,RSD=2.08%;3批样品中黄芩苷和汉黄芩素的含量分别为7.33%、6.74%、7.29%和0.71%、0.65%、0.63%.结论:测定方法简便、准确,可同时测定痛经膏贴中黄芩苷和汉黄芩素含量.
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汉黄芩素白蛋白微球在大鼠体内的药代动力学及组织分布
目的:研究汉黄芩素白蛋白微球在大鼠体内的药动学及组织分布情况.方法:以汉黄芩素溶液为参比,用3P97软件计算大鼠尾静脉给予汉黄芩素白蛋白微球后,其在大鼠体内的药动学模型及药动学参数,用靶向效率评价其在大鼠体内的组织分布及靶向性.结果:汉黄芩素白蛋白微球在大鼠体内的药动学模型符合二室模型,主要药动学参数t1/2α=(0.550 0±0.128 2)h,t1/2β=(14.776 1±1.578 2)h,CL=(0.005 96±0.001 4) mL·h·kg-1,AUC0→∞＝(126.331 7±9.501 2) ng·h·L-1.其在肝脏,脾脏,心脏,肺脏及肾脏的靶向效率分别为2.21,2.02,0.58,0.64,0.26.结论:与汉黄芩素溶液相比,汉黄芩素白蛋白微球能提高对肝脏,脾脏的趋向性,有利于提高其治疗作用.
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葛根芩连汤中黄芩活性成分在大鼠体内的组织分布
目的:考察大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩活性成分在心、肝、胃、肺、脾、肾、小肠中分布特性.方法:采用LC-MS/MS测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素在大鼠各组织中的含量,Shiseido CAPCELL PAK C18色谱柱(2.0 mm×100 mm,5 μm),流动相0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,采用ESI正离子检测,多反应监测模式测定.按15 g·kg-1灌胃葛根芩连汤,分别于给药后2,4,6,8,12 h断颈动脉放血处死动物,立即分取心、肝、胃、肺、肾、脾、小肠7个组织处理,测定各组织中活性成分的分布情况.结果:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素的线性范围分别为6.150 ～3 077,3.030～1 515,6.170～3 085,3.140～1 569 μg·L-1,日内精密度RSD5.4％ ～11.7％,日间精密度RSD7.8％ ～11.9％,准确度RE-6.4％～7 5％,各组织中4种活性成分的提取回收率均＞75.5％,基质效应可忽略,大鼠肝脏组织中4种活性成分在放置4℃保存24h,-20℃冰箱内反复冻融1,3次及-70℃冰箱内保存4周条件下稳定性良好.结论:活性成分在各组织中浓度差异较大,大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素主要分布于肝脏、胃及小肠中,其次为肾、心、肺、脾.
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黄芩药材中主要黄酮类成分含量测定及指纹图谱研究
目的:建立不同产地黄芩药材指纹图谱,并测定主要黄酮类成分的含量来评价药材质量.方法:采用岛津SHIMADZU VP-ODS柱(250mm × 4.6mm,5μm),以0.1%枸橼酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长为276nm及200nm-400nm,应用二极管阵列检测器检测.所得不同样品的指纹图谱用相似度评价软件进行分析.结果:确定了17个共有峰,建立了黄芩药材的指纹图谱.但各主要成分的含量有较大的差异,其中沂源县的扦插黄芩中的黄芩苷含量高.高达18.32%;东北野生黄芩中的黄芩素和汉黄芩素含量高,分别为2.31%和0.73%.结论:此方法简单、准确、重复性好,峰的分离度较好,可作为黄芩质量控制的方法.
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高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量
目的 建立同时测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素含量的高效液相色谱法.方法 采用VP-ODS C18 色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.2%,磷酸溶液梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:278 nm.结果 绿原酸在0.44～6.60 μg范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率为97.0%;黄芩苷在0.52～6.18 μg范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率为98.98%;连翘苷在0.20～2.04μg范围内线性关系良好(r=0.9993),平均回收率为103.55%;汉黄芩素在0.13～1.76 μg范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率为96.49%.结论 本方法简便可行、准确、快速,可用于双黄连口服液中上述4种成分的含量测定.
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高效液相色谱-电化学检测法测定黄芩中3种有效成分的含量
目的:建立同时测定黄芩中有效成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的HPLC-ECD检测法.方法:采用kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)进行分离,Waters2465电化学检测器进行检测,检测电位为+800 mV vs.ISAAC(in-situ silver/silver chloride),流动相为H2O-THE-H3PO4(80:10:0.2)与CH3OH等体积混合洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,进样体积10 μL.结果与结论:黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在下列范围内,有良好的线性:0.045 6～1.14 μg(r=0.999 6),0.013～0.325 μg(r=1.000 0),和0.009 5～0.047 5 μg(r=0.999 9).平均回收率(n=5)分别为97.9%(RSD 2.3%),97.2%(RSD 3.3%)和103.5%(RSD 3.5%).测定了14个不同种源、9个不同产地黄芩中有效成分的含量,对黄芩品质进行了评价.
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高效液相色谱法测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量
目的:测定不同产地黄芩中黄酮类化合物的含量,以评价其道地性.方法: 高效液相色谱法(HPLC). 结果: 17个产地25份样品中黄芩苷含量变化在6%～19%、汉黄芩苷在2%～8%、黄芩素在0.1%～1.6%、黄芩新素在0.01%～0.2%、汉黄芩素在0.01%～0.3%,粘毛黄芩素、木蝴蝶素为痕迹量或未检出. 结论: 单纯以黄芩苷的含量来评价其质量是不够的,建议将黄芩苷与汉黄芩苷的含量比值在3以下、黄芩苷与黄芩素、黄芩苷与汉黄芩素的含量比值在20～50等参数列为质量控制指标.
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缙云黄芩HPLC指纹图谱的建立及其不同部位活性成分含量研究
目的:建立重庆特有药用植物缙云黄芩HPLC指纹图谱,对其根、茎、叶中4种主要的黄酮类活性成分进行分离、含量测定和比较研究.方法:采用梯度洗脱方法进行色谱分离和含量测定,记录10个种群缙云黄芩指纹图谱,采用国家药典委"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"建立指纹图谱共有模式.结果:建立了同时分离和测定4种活性成分的梯度洗脱程序;缙云黄芩指纹图谱14个共有峰分离度良好、保留时间稳定、重现性好;供试样品间相似度较高;4种活性成分总量多少依次为根>茎>叶,尤其是黄芩苷在根中的积累量达茎中的5倍以上.结论:本研究建立的色谱指纹图谱分析方法稳定、可靠,能为缙云黄芩种源的宏观分析、探明其遗传变异模式及其保护和合理开发利用等提供重要的理论依据.
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汉黄芩素抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的实验研究
目的:研究汉黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和增殖的影响,同时观察汉黄芩素对MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,进一步探讨其分子作用机制.方法:MTT法检测汉黄芩素对MDA-MB-231细胞生长的影响;Ki-67法检测汉黄芩素对细胞增殖的影响;划痕实验、黏附试验和侵袭小室法检测对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测对增殖和转移相关蛋白及相关信号通路的影响.结果:汉黄芩素能明显抑制MDA-MB-231细胞生长和增殖;低浓度情况下明显抑制乳腺癌细胞的迁移、黏附和侵袭能力;汉黄芩素有效抑制MDA-MB-231细胞Survivin,Bcl-2,ICAM-1,MMP-2,MMP-9蛋白的表达.结论:汉黄芩素明显抑制乳腺癌细胞生长和增殖,并抑制MDA-MB-231细胞迁移、黏附、侵袭,其对MDA-MB-231细胞的侵袭和黏附影响可能与其降低ICAM-1,MMP-2,MMP-9表达有关.
