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芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究
目的 探讨芍药苷对Fas配体(FasL)诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响.方法 采用1月龄SD大鼠(雌雄不拘)的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养.传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型.实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体(FasL)诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预.Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平.结果 药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组(P＜0.01),药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组(P＜0.01).结论 芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率.
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桂枝加葛根汤对椎间盘纤维环细胞蛋白多糖表达的影响
目的:探讨颈椎病的发病机制及桂枝加葛根汤防治该病的作用机制.方法:采用自制桂枝加葛根汤大鼠含药血清,对培养的椎间盘纤维环细胞进行不同浓度的药物干预,利用荧光定量PCR检测椎间盘纤维环中主要蛋白多糖Aggrecan mRNA的表达变化情况.结果:中、高剂量组Aggrecan mRNA表达的Ct值明显高于空白组(P＜0.05),低剂量组Ct值与空白组比较无明显差异,而高剂量组Ct值明显高于中剂量组(P＜0.05).结论:中、高剂量组桂枝加葛根汤大鼠含药血清能增强纤维环细胞Aggrecan mRNA的表达,高剂量组效果为明显.桂枝加葛根汤从转录水平上影响纤维环细胞蛋白多糖的产生.
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葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响
目的:观察不同浓度葛根素对白细胞介素-1β(IL-1 β)诱导的大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡率及凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因与胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的影响.方法:对大鼠颈椎间盘纤维环细胞进行体外培养3代,鉴定成功后分为5组:对照组,模型组,葛根素低、中、高浓度组.除对照组外,其余4组均给予10ng/mL IL-1 β诱导细胞凋亡,同时葛根素低、中、高浓度组分别予以125、250、500μmol/L的葛根素进行干预,24h后用流式细胞仪检测各组纤维环细胞凋亡率,Western blot检测凋亡调控基因Caspase-3和Bcl-2蛋白表达.结果:葛根素能抑制IL-1β诱导的椎间盘纤维环细胞凋亡.Caspase-3蛋白表达水平比较:与对照组比较,模型组显著升高(P＜0.05);与模型组比较,3个给药组均显著降低(P＜0.01,P＜0.05),且随着葛根素浓度的提高表达减弱,葛根素高浓度组与葛根素低、中浓度组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).3个给药组Bcl-2蛋白表达水平均显著高于对照组和模型组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:一定浓度葛根素能够有效地抑制大鼠颈椎间盘纤维环细胞的凋亡,其途径可能是通过上调抗凋亡因子Bcl-2,下调促凋亡因子Caspase-3蛋白的表达.
关键词： 葛根素 纤维环细胞 白细胞介素-1β B淋巴细胞瘤-2基因 胱天蛋白酶-3 -
捏脊疗法对颈椎病模型大鼠纤维环细胞影响的实验研究
目的:探讨捏脊对大鼠动静力失衡颈椎病模型纤维环细胞的影响.方法:将SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、捏脊组和莫比可组.治疗1月后取材,运用免疫组化测基质金属蛋白酶-l(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、蛋白激酶B(Akt)表达的变化.结果:与空白组比较,模型组MMP-1、MMP-3阳性表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,捏脊组MMP-1、MMP-3显著降低(P＜0.05);与空白组比较,模型组Akt、ERK1/2明显降低(P＜0.05);与模型组比较,捏脊组Akt、ERK1/2阳性细胞数升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:捏脊疗法可以下调退变椎间盘纤维环细胞MMP-1、MMP-3及上调纤维环细胞中Akt、ERK1/2蛋白表达,从而改善颈椎间盘退变.
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细胞生物学治疗方法在椎间盘退行性病变方面的研究
在近几年几种以细胞为基础的治疗来刺激椎间盘再生过程得到倡议：造血干细胞（ haematopoietic stem cells HSC ）、胎儿脊柱细胞（ fetal spine cells ）、永生性髓核细胞系（ immor-talized NP－cell lines ）、自体椎间盘软骨细胞（ autologous IVD chondrocytes ）、胚胎干细胞（ embryonic stem cells SC ），诱导性多能行胚胎干细胞（ induced pluripotent SC ）、嗅觉胚胎干细胞（ olfactory SC ）和来源于骨髓或脐带血的细胞的MSC已经被证明具有促进椎间盘再生／修复的潜力。髓核祖细胞（从髓核中单独分离得到的大约具有1％的比率）可分化为软骨形成细胞和神经源性细胞系，表明具有促进椎间盘再生的潜力［1］。除了椎间盘再生之外，祖细胞可能起到保护性作用。在调节椎间盘的炎症方面，在体外共同培养的纤维环细胞与巨噬细胞中研究发现家兔髓核祖细胞被证明可降低促炎性细胞：IL－6、IL－8以及iNOS的表达水平［99］。对于椎间盘再生而言，MSC为主要的具有吸引力的替代细胞类型，部分是因为它们能够做为自体移植物。在犬类动物模型的研究中，MSCs能够增加Ⅱ型胶原的表达同时降低椎间盘内细胞凋亡的数量。在家兔模型中， MSCs能够在椎间盘中保持24周左右。但是移植性MSCs的数量为关键。犬类动物模型中，每个椎间盘含有的MSCs细胞数量非常关键，每个椎间盘中会有106个MSCs为理想，因为105个MSCs可导致细胞的生存能力下降，而107个MSCs可诱导细胞凋亡。除了MSCs的多种分化能力之外其与免疫调节相关的作用已经得到证明。 MSCs在炎症中的作用是建立在它们作为细胞因子释放工厂直接与损伤细胞相互作用的积极作用［2］。在一项小鼠的肺损伤模型中研究中，MSCs被发现可分泌IL－1Ra或在小鼠梗死模型中产生有能力的抗炎症蛋白：TNF－α刺激基因／蛋白6（ TNF－αstimulated gene／protein 6 TSG－6）。有趣的是在全身性应用MSCs之后，TSG－6也被鉴定为大鼠角膜损伤模型中的关键因子。将MSCs移植入小猪、兔、犬椎间盘后，在FaS配体（其他的免疫特免位点发现的一种蛋白质）表达重新恢复，表明MSCs可能分化为细胞表达FasL，也可能刺激新生的髓核细胞产生这种FasL，这样会促成在退变性椎间盘中免疫特免位点的恢复。
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相关生长因子和细胞因子对延缓和逆转椎间盘变性的研究进展
椎间盘变性(disc degeneration,DD)是骨科常见病和多发病,常并发腰痛和椎间盘突出.随着年龄增长而反复发作并逐渐加重.可导致劳动能力丧失.椎间盘是一个较为复杂的生物整体,具有非常独特的解剖和生理特征,大体分为纤维环(annulus fibrosus,AF),髓核(nucleus pulposus,NP)和终板(end plates,EP).它呈现低细胞密度,包括纤维环细胞、髓核细胞以及可能存在的骨祖细胞.引起椎间盘退变的因素包括机械负荷、遗传因素和营养作用等,这些因素通过影响椎间盘细胞的活力及生物合成能力,再加上应力作用,促使了椎间盘退变的发生和发展.目前没有特别有效的治疗方法来阻止变性和渐进过程,因此寻找一种更符合生理、能够使组织再生的方法才能从根本上解决椎间盘退变的问题.近年来关于对各种调节分子包括生长因子、细胞因子等在椎间盘内的产生和相互作用,以及他们在椎间盘变性中的作用的研究日趋增多.近年新发现的骨生长蛋白-1应用于临床来促进变性的椎间盘组织恢复的可能性研究也日见报道.本文对相关的生长因子和细胞因子对延缓和逆转椎间盘变性的相关研究进行系统综述.
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亚甲蓝对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨不同浓度亚甲蓝对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖及凋亡的影响.方法:取3月龄清洁级SD大鼠尾椎椎间盘纤维环,采用胶原酶及胰酶序贯消化法获得纤维环细胞并进行体外扩增培养,镜下观察细胞生长情况.将第3代纤维环细胞分为对照组(不施加亚甲蓝干预)及不同浓度亚甲蓝干预组,分别为低浓度组(2μg/ml)、中浓度组(20μg/ml)及高浓度组(200μg/ml),干预后2h、4h、6h、12h、24h及72h通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (easpase-3)试剂盒检测caspase-3活性,RT-PCR及Western Blot检测I型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、caspase-3、凋亡调节蛋白bcl-xl及bax的mRNA及蛋白表达.结果:原代纤维环细胞早期可形成细胞集落并向四周克隆生长,速度较慢,14d后达到80％～90％融合.传代后细胞生长速度明显加快,细胞多呈梭形,并有伪足伸出.亚甲蓝干预后可以显著抑制纤维环细胞增殖,促进纤维环细胞凋亡,中、高浓度组细胞凋亡率分别为74.95％及90.09％,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);且随亚甲蓝浓度增加,抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用越明显,不同浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);RT-PCR及Western Blot结果显示,亚甲蓝干预后Ⅰ型胶原、TGF-β1、bFGF、TIMP-1及bcl-xl表达显著降低,而caspase-3及bax表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);且随亚甲蓝浓度增加,抑制作用越明显,不同浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:亚甲蓝以浓度依赖性方式抑制纤维环细胞增殖及促进细胞凋亡,其促进细胞凋亡的机制可能与bcl-xl/bax途径有关;同时亚甲蓝以浓度依赖性方式抑制纤维环细胞分泌细胞外基质,其机制可能与TIMP-1促进细胞外基质降解有关.
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骨形态发生蛋白-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展
椎间盘退行性疾病(degenerative disc disease,DDD)是临床常见病.近年来,应用生长因子、细胞及基因等生物技术和手段治疗DDD引起了广泛关注.其中,骨形态发生蛋白-7(bone morphogenefic proteins,BMP-7)由于其对软骨细胞、纤维环细胞及髓核细胞合成代谢具有显著促进作用,已成为国内外众多学者的研究热点[1].笔者就BMP-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展做一综述.
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人纤维环细胞与骨髓间充质干细胞Transwell共培养研究
目的 探讨人的纤维环(AF)细胞与骨髓间充质千细胞(BMSCs)在Transwell共培养后,对AF细胞的细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及BMSCs是否具有向AF细胞分化的能力.方法 分别对5例年龄在40岁以下脊柱手术患者的纤维环组织和骨髓标本进行分离、培养AF细胞和BMSCS,分别吸取第三代的AF细胞和BMSCs,按1∶1的细胞比例分别植于Transwell共培养系统中,下室植入BMSCs,上室植入AF细胞.并且建立3个细胞培养组,即BMSCs与AF细胞共培养组(实验组),BMSCs单独培养组和AF细胞单独培养组作为对照组.培养3周后,运用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化；分别用HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和流式细胞仪对两种细胞鉴定；运用荧光定量PCR法检测各细胞培养组蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达变化.结果 两种细胞在分离培养后经过鉴定确定为AF细胞和BMSCs.在倒置相差显微镜观察下,共培养组中AF细胞和BMSCs在细胞增殖数量和速度上均高于各自的单独培养组；共培养组中AF细胞和BMSCs 的蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达均较各自的单独培养组高(P＜0.05).结论 通过BMSCs与AF细胞Transwell共培养,BMSCs可以促进AF细胞增值和细胞外基质的合成；同时通过共培养,BMSCs具有向AF细胞分化的可能.
关键词： 纤维环细胞 骨髓间充质干细胞 Transwell共培养 人 -
体外培养人退变髓核与纤维环细胞增殖能力的研究
目的 探讨体外培养的人退变髓核与纤维环细胞的增殖能力,比较2种退变细胞体外培养中所表现的不同生物学行为,为椎间盘退变疾病的预防与治疗提供新的理论依据.方法 采集临床腰椎间盘突出症患者手术取材的椎间盘组织标本,病理学诊断评估其退变程度,酶消化法原代培养髓核与纤维环细胞,并鉴定.每例病例的髓核细胞与纤维环细胞分别体外培养至第5代,各代次细胞传代接种密度控制为1×105个.同条件培养48 h后,观察每一代细胞的形态学变化,同时应用流式细胞仪检测2种细胞的增殖能力.结果 体外培养的退变髓核与纤维环细胞生长状态良好.随着体外传代的进行,退变髓核与纤维环细胞S期细胞百分比和增殖指数(PI)均呈上升趋势,髓核细胞PI值于第3代时达到峰值,而纤维环细胞PI值于第5代时高；且第2～4代的退变髓核细胞的增殖活性均高于退变纤维环的增殖活性(P＜0.05).结论 体外培养的人退变髓核与纤维环细胞有着不同的增殖特点,髓核与纤维环细胞对体内退变微环境有着不同的响应机制,并影响着整个椎间盘退变的进展.
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循环牵张应力对人退变纤维环细胞增殖的影响
目的 探讨不同水平循环牵张应力对人退变椎间盘细胞增殖的影响.方法 取1例29岁手术切除的腰椎间盘突出患者的椎间盘,通过病理学方法评价其退变程度,酶消化法分离椎间盘纤维环细胞.选取P3代细胞,利用ElectroForce 3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,以3h为固定时间点对其进行不同水平的频率为0.25 Hz的周期性牵张应力刺激,设置形变量分别为0、5％、10％、15％和20％,应用流式细胞术检测不同应力刺激下纤维环细胞的增殖率变化情况,观察并探讨不同循环牵张应力对体外培养的人体退变椎间盘细胞的影响.结果 随着牵张应力的增加,纤维环细胞S期细胞比例和增殖指数(PI)呈缓慢上升趋势,15％时达到峰值,之后开始下降.结论 体外培养的人退变椎间盘纤维环细胞的增殖活性与受力大小有关且存在细胞增殖的适应力条件；超过此应力范围,其增殖活性将会降低.
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牵张微应变对人退变髓核与纤维环细胞增殖的影响
目的:探讨循环牵张微应变对体外培养的人退变髓核与纤维环细胞增殖的影响.方法:人退变椎间盘组织来源于1例29岁腰椎间盘突出症患者的手术取材,病理学诊断评估其退变程度,无菌条件下酶消化法分别原代培养髓核与纤维环细胞,并对细胞系进行鉴定.将第3代细胞接种于硅橡胶膜载体上,利用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,对其施加频率为0.25 Hz,应变为0με、5万με、10万με和15万με的加载3h,应用流式细胞仪检测不同微应变环境下2种细胞的增殖活性.结果:退变髓核与纤维环细胞应力加载后生长状态良好.随着微应变的增加,髓核细胞S期细胞比例在10万με、15万με时均高于纤维环细胞,差异有统计学意义(P＜0.01)；纤维环细胞增殖指数(PI)在各微应变加载组均高于髓核细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:微应变刺激对人退变髓核与纤维环细胞的增殖总体效应是一致的,但相同的微应变刺激对纤维环细胞增殖的促进效应明显高于髓核细胞.
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循环牵张应力下BMSCs非接触共培养对人退变纤维环细胞增殖及蛋白表达的影响
目的 比较不同大小循环牵张应力对共培养状态下人退变纤维环细胞增殖与蛋白表达的影响.方法 取手术摘除的腰椎间盘突出症患者椎间盘,病理学方法对其退变程度进行分级,选取其中退变纤维环组织.酶消化法分离纤维环细胞,选取P3代细胞,与术中获得的骨髓基质干细胞(BMSCs)进行非接触式共培养.利用ElectroForce3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应器系统,以3 h为固定时间点对其进行不同大小的频率为0.25 Hz的周期性牵张应力刺激,设置形变量分别为0、5%、10%、15%和20%,同时设定无共培养的纤维环细胞为对照组.应用流式细胞仪检测不同应力刺激下2种纤维环细胞的增殖情况,Real-Time PCR方法检测人退变纤维环细胞对蛋白多糖和Ⅰ型胶原的表达情况.结果 在相同应变刺激下,共培养组细胞的细胞增殖指数(PI)值、S期细胞比例、Ⅰ型胶原、蛋白多糖的表达量均高于对照组(P<0.05).退变组细胞PI值、S期细胞比例、Ⅰ型胶原、蛋白多糖的表达量高值出现在10%形变刺激下,而共培养组上述指标中除S期细胞比例峰值出现在10%形变刺激下以外,其余各指标峰值均出现在15%形变刺激下.结论 BMSCs的非接触共培养对人退变纤维环细胞增殖及蛋白表达存在正向调节作用,且该调节作用受到力学环境的影响.
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淫羊藿苷对兔椎间盘纤维环细胞生物学特性的影响
目的:研究淫羊藿苷(ICA)持续给药延缓兔椎间盘纤维环细胞退变的可能性. 方法:分离培养兔椎间盘纤维环细胞并传至第1代,调整细胞密度后部分细胞作为P0组铺板后待测;剩余细胞分为空白组(15%FBS培养液培养)与ICA组(含ICA的15%FBS培养液培养,ICA浓度10-5M),该部分细胞持续培养至第3代时检测. 通过MTT法检测细胞增殖、荧光定量PCR检测蛋白多糖表达、流式细胞仪检测细胞周期来评价淫羊藿苷对纤维环细胞生物学特性的影响. 结果:与空白组比较,其余两组的细胞增殖、蛋白多糖表达、S期细胞比例均明显增高(P<0.05).结论:第3代纤维环细胞已发生退变,淫羊藿苷持续给药可以延缓椎间盘纤维环细胞退变.
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胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠纤维环细胞体外增殖活性影响的量效关系
背景:近年来体外椎问盘髓核和纤维环组织细胞培养技术的建立,特别是软骨组织工程研究的不断深入及自体椎间盘细胞移植修复髓核缺损动物实验的初步成功,为退变椎间盘的形态结构与生理功能的完伞再生修复带来了希望.目的:通过对椎间盘纤维环细胞的培养,观察胰岛索样生长因子Ⅰ对大鼠纤维环细胞体外增殖活性的影响及量效和时效关系.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-01在山西医科大学寄生虫实验室完成.材料:清洁级1月龄Wistar系大鼠30只,雌雄不限.方法:体外分离培养大鼠纤维环细胞.剂量-效应实验:在培养的细胞中分别加入由含体积分数为0.01或0.1的小牛血清HAMF-12配制成的不同浓度的胰岛素样生长因子Ⅰ(0.1,1.0,10,100 μg/L).以不加生长闪子做对照,培养72 h.时间-效应实验:在培养的细胞中分别加入含有佳效应浓度胰岛素样生长因子Ⅰ体积分数为0.1的小牛血清+F12培养液,分组为对照组和100 μg/L的胰岛素样生长因子Ⅰ组,分别培养1,3,5,7d.主要观察指标:①苏木精-伊红、甲苯胺蓝、免疫细胞化学染色分析细胞的生物学特性.②噻唑蓝比色法观察胰岛素样生长因子Ⅰ在体积分数为0.01和0.1的血清浓度下对大鼠纤维环细胞体外增殖的调节作用及其剂量、时间与作用效果的关系.结果:苏木精-伊红染色细胞多为梭形,有伪足伸出,细胞核为圆形或椭圆形;甲苯胺蓝染色,胞浆为深蓝色;免疫细胞学方法检测表明纤维环细胞有Ⅰ型胶原表达:在体积分数为0.1的血清条件下,胰岛素样生长因子I能提高细胞的增殖活性,并且在有效浓度范围内呈剂量效应关系.结论:胰岛素样生长因子Ⅰ能促进大鼠纤维环细胞的体外增殖,其效应在一定范围内与剂量和时间呈正相关.
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大鼠椎间盘纤维环细胞的培养和鉴定
背景:许多学者认为椎间盘退变必有其细胞学改变,而探讨椎间盘退变机制必须有可靠的细胞模型.目的;尝试建立大鼠椎间盘纤维环细胞体外培养体系,并对其表型进行鉴定.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的随机分组实验,于2005-09/2006-05在解放军第三军医大学新桥医院实验中心完成.材料:清洁级1月龄SD大鼠30只,体质量100g左右,雌雄不拘.方法:采用酶消化法分离大鼠椎间盘纤维环细胞,进行单层培养.主要观察指标:观察其形态结构和生物学特性,通过甲苯胺蓝、免疫细胞化学和碱性磷酸酶染色等方法对其细胞表型进行鉴定.结果:成功进行细胞单层培养,细胞形态为圆形或多角形,胞质含有大量的粗面内质网;原代细胞生长较慢,第2代细胞生长加快;细胞具有甲苯胺蓝异染性;有Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的阳性表达;细胞碱性磷酸酶染色阳性.结论:采用酶消化法可成功培养大鼠椎间盘纤维环细胞,表型鉴定符合纤维环细胞特征.
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壳聚糖支架复合重组人成骨蛋白1对体外培养兔髓核和纤维环细胞蛋白聚糖合成的影响
成骨蛋白1有效刺激软骨细胞蛋白聚糖和胶原蛋白合成已被证实,椎问盘内注射成骨蛋白1可增加椎间盘高度也在动物模型中得到证实.目的:体外评价重组人成骨蛋白1对培养于壳聚糖凝胶中的兔椎间盘细胞增殖和蛋向聚精合成的作用.设计、.时间及地点:成组设计,实验于2007-08/2008-02在北京军区总医院骨科实验室完成.材料:清洁级4月龄日本大耳兔5只.重组人成骨蛋白1为Sigma分装.医用级壳聚糖,脱乙酰度95.11%,黏度155 mPa·s.Mr870 000,由北京纵横洋洲医药生物科技有限公司提供.方法:无菌条件下取日本大耳兔椎间盘10个,分离其髓核和纤维环细胞并接种于自制壳聚糖凝胶支架,在培养液中加入重组人成骨蛋白1,并分为3组:对照组(无重组人成骨蚩白1)、100 μg/L重组人成骨蛋白1组、200 μg/L重组人成骨蛋白1组.主要观察指标:培养7,14,21 d时对培养物DNA含量、蛋白聚糖合成量(35SO42-摄入量、硫酸盐黏多糖含量)进行检测.结果:100,200 μg/L重组人成骨蛋白1组的DNA含量没有减少,对照组DNA含量逐渐F降.100,200 μg/L重组人成骨蛋白1组蛋白聚糖合成量明显高于对照组,200 μg/L重组人成骨蛋白1组升高更为显著.100,200 μg/L重组人成骨蛋白1组在3个时间点均呈现上升趋势,培养14 d和21 d的差异有显著性意义(P<0.001).结论:重组人成骨蛋白1可有效促进体外培养的兔髓核和纤维环细胞增殖及蛋白聚糖合成.
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纤维环细胞的培养技术及生长因子调控
椎间盘退行性病变表现为细胞数量和细胞基质代谢如胶原、蛋白聚糖等代谢的改变.生长因子有调整细胞增殖、分化及细胞基质代谢的作用,可用于椎间盘退变的生物学治疗,其作用成为研究热点.在腰椎间盘退变阶段,纤维环损伤的修复对预防髓核疝出有重要意义.但目前有关生长因子对纤维环细胞作用的研究少于髓核细胞,有待加强.椎间盘细胞不易培养,目前其培养技术渐趋成熟,但国内涉及椎间盘细胞培养的研究偏少.文章首先介绍了国外一些成熟细胞培养技术,如单层、三维培养的对比等,其对实验有明确指导作用.其次综述了国内外目前有关生长因子对纤维环细胞增殖、基质代谢作用的研究成果,尤其是近年来的新成果,目的在于总结埘纤维环细胞有良好作用的生长因子,探讨生长因子生物学修复退变椎间盘的趋势;同时促使人们注意未进行研究的因子,扩展生长因子的研究领域.
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桂枝加葛根含药血清干预纤维环细胞的蛋白组学差异
背景：研究表明纤维环破裂是颈椎病椎间盘退变的诱发因素。课题组既往研究表明桂枝加葛根汤治疗颈椎病的疗效是肯定的，但有关桂枝加葛根汤干预纤维环细胞的差异蛋白组学研究尚未见报道。
目的：从差异蛋白组学的角度，分析桂枝加葛根汤对椎间盘纤维环细胞作用的靶位蛋白或相关蛋白。
方法：体外培养SD大鼠纤维环细胞，将传3代纤维环细胞随机分为桂枝加葛根汤组和空白组，分别加入含自制桂枝加葛根汤血清的培养液以及含生理盐水血清的培养液干预。运用同位素标记相对和绝对定量技术标记2组样本的蛋白，二维液相色谱质谱仪(2D LC-MS/MS)鉴定蛋白并进行相对定量分析。
结果与结论：以空白组作为对照，在桂枝加葛根组干预纤维环细胞后血小板衍生生长因子 A、骨形态发生蛋白2、胰岛素样生长因子1、聚集蛋白聚糖核心蛋白、转化生长因子β3、白细胞介素1β蛋白表达上调；同时碱性成纤维生长因子、Ⅰ型胶原α1链蛋白表达下调。提示桂枝加葛根汤对纤维环细胞的退变有修复作用。 -
益气化瘀方对椎间盘纤维环细胞凋亡的影响
研究益气化瘀方及其拆方药理血清对诱导凋亡椎间盘纤维环细胞凋亡率的调控情况.采用TUNNEL法和流式细胞仪技术检测不同药物作用下纤维环细胞凋亡率的变化,比较分析益气化瘀方及其拆方益气方、化瘀方药理血清,以及IGF-Ⅰ对抗-Fas抗体诱导凋亡大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡率的影响.结果显示,益气化瘀方可降低细胞凋亡指数,作用低于IGF-Ⅰ组,有显著性差异(P＜0.05).提示益气化瘀方及其拆方可以调控细胞凋亡率,调控细胞的凋亡可能是其治疗颈椎病的机理之一.
