首页 > 文献资料
-
清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制
目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制.方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组.其中空白组给予含2％ FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预.应用噻唑蓝(tetrazolium salt eolorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平.结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P＜0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P＜0.01).加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P＜0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P＜0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P＜0.01).结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关.
-
安胎协定方对离体人早孕绒毛滋养细胞增殖活力及ERK1/2信号通路的影响
目的:观察不同浓度的安胎协定方含药血清对离体人早孕绒毛滋养细胞HTR-8细胞增殖活力及ERK1/2信号通路的影响,探究其维持妊娠机制.方法:雌性SD大鼠灌胃制备空白血清和各组含药血清.将HTR-8细胞分为5组:空白对照组,地屈孕酮组,中药高、中、低剂量组(5％、10％、20％含药血清).MTT法检测24、48、72h的吸光度,表示细胞增殖活力,免疫组化法检测48h细胞EGF、EGRR及ERK1/2表达含量.结果:与空白对照组比较,除中药低剂量组外,其余各组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量均显著升高 (P<0.05);与地屈孕酮组比较,中药低剂量组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量显著降低(P<0.05);与中药低剂量组比较,中药中、高剂量组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量显著升高(P<0.05).结论:安胎协定方可改善绒毛滋养细胞增殖活力,避免增殖过度以维持妊娠,可能是通过适度上调细胞内EGF及EGFR的含量表达,促进ERK1/2磷酸化而实现的.
关键词： 安胎协定方 绒毛滋养细胞 细胞增殖活力 细胞外信号调节蛋白激酶 -
朝医加味麻黄定喘汤在小鼠哮喘模型中对ERK信号通路的影响
目的:探讨加味麻黄定喘汤对哮喘小鼠气道炎症和Thl/Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制.方法:雄性BALB/c小鼠32只随机分成4组,即正常组、模型组和加味麻黄定喘汤低、高剂量组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13及γ-干扰素(IFN-γ)含量,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变.免疫组化法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在肺内表达.结果:模型组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平升高,IFN-γ水平降低,与正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).加味麻黄定喘汤低、高剂量组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL4、IL-5、IL-13水平降低,IFN-γ水平明显上升,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).加味麻黄定喘汤能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,加味麻黄定喘汤低、高剂量组之间比较,有显著性差异(P＜0.05).模型组ERK在肺内表达较正常组增强,加味麻黄定喘汤低、高剂量组肺组织中ERK的蛋白质印迹表达均较模型组明显下降(P＜0.05).结论:加味麻黄定喘汤对哮喘小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制ERK磷酸化,调节IL-4/IFN-γ平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关.
-
捏脊疗法对颈椎病模型大鼠纤维环细胞影响的实验研究
目的:探讨捏脊对大鼠动静力失衡颈椎病模型纤维环细胞的影响.方法:将SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、捏脊组和莫比可组.治疗1月后取材,运用免疫组化测基质金属蛋白酶-l(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、蛋白激酶B(Akt)表达的变化.结果:与空白组比较,模型组MMP-1、MMP-3阳性表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,捏脊组MMP-1、MMP-3显著降低(P＜0.05);与空白组比较,模型组Akt、ERK1/2明显降低(P＜0.05);与模型组比较,捏脊组Akt、ERK1/2阳性细胞数升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:捏脊疗法可以下调退变椎间盘纤维环细胞MMP-1、MMP-3及上调纤维环细胞中Akt、ERK1/2蛋白表达,从而改善颈椎间盘退变.
-
BRAP对LPS诱导的人气道上皮细胞系黏液高分泌的影响
目的 探讨蛙皮素受体激活蛋白(BRAP)对脂多糖(uS)诱导的气道黏液高分泌的影响及相关作用机制.方法 体外培养人气道上皮HBE16细胞,转染已构建好的pEGFP-N1-BRAP,以空质粒载体作为对照,给予LPS刺激,同时分别以ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125、P38抑制剂SB203580干预.观察细胞内活性氧(ROS)含量、黏蛋白(MUC)5AC表达和核因子-κB(NF-κB)活性以及细胞活力的变化.结果 转染pEGFP-N1-BRAP后ROS明显减少(P＜0.01);同单纯LPS刺激相比,MUC5AC蛋白含量和mRNA水平在转染pEGFP-N1-BRAP后明显降低(P＜0.01),NF-κB活性亦呈相同趋势(P＜0.05);在U0126组,MUC5AC的表达较转染重组质粒组显著降低(P＜0.01),NF-κB活性也显著下调(P＜0.05).结论 BRAP可以通过ROS/ERK/MAPK信号通路阻止胞质内NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成.
-
ERK促进大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞Smad7表达
研究表明,在多种细胞,转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad与细胞外信号调节蛋白激酶(extra cellalar signal regulated protein,ERK)信号传导通路可在多个环节存在相互调节[1].但在血管平滑肌细胞(vascu-lar smooth muscle cells,VSMCs),这两条通路是否存在类似关系,作为抑制性分子Smad7的作用目前还不清楚.本研究观察大鼠胸主动脉VSMCs内ERK通路对Smad7蛋白及其mRNA表达的影响.
-
癌基因p21ras、raf和细胞外信号调节蛋白激酶参与刺激Jurkat细胞产生TNF-β和IL-2
目的明确p21ras-细胞外信号调节蛋白激酶(the extracellular signal-regulated protein kinase, ERK)系列是否参与调节Jurkat细胞产生TNF-β和IL-2。方法用负向突变基因p21ras(ras17N或ras15A)，raf-1(raf1～130)及ERK1(erk1K71R)或活性结构p21ras(H-ras61L)和raf(raf22W)转染细胞，以PMA/PHA刺激细胞，ELISA法检测细胞因子。结果 PMA/PHA刺激细胞产生较正常对照细胞约2倍的TNF-β和IL-2(P<0.001)。负向突变基因去除了PMA/PHA增加细胞因子分泌的作用。活性突变基因本身不影响TNF-β和IL-2产生，但明显增强细胞对PMA/PHA的应答(P<0.05)。结论 p21ras-ERK系列在调节Jurkat细胞在PMA/PHA刺激下产生TNF-β和IL-2中起重要的作用。
关键词： 细胞外信号调节蛋白激酶 肿瘤坏死因子 白细胞介素2 -
脊髓背角ERK/MAPK通路在髓核致炎大鼠神经根炎性痛维持中的作用
目的:观察脊髓背角磷酸化ERK(pERK)在髓核致炎大鼠神经根炎性痛进程中的表达变化,及硬膜外腔注射ERK通路抑制剂U0126对大鼠机械性痛阈的影响.方法:成年雄性SD大鼠56只,随机分为3组:Blank组(13只)、Sham组(13只)、手术模型组(NP组,30只),检测所有大鼠术前1d,术后1、4、7、14、21d和28 d的50％机械痛缩足阈值(50％ MwT).Blank组和Sham组于术后7d及NP组于术后1、4、7、14、21d取大鼠腰段脊髓背角,应用Western blot方法检测各时点pERK蛋白含量.另一成年雄性SD大鼠80只,随机分为blank组(13只),sham组(13只),NP组(13只),DMSO组(13只)和U0126组(28只),DMSO组、U0126组分别于术后第6天单次硬膜外腔注射10％ DMSO 50 μl和10 μg/50 μ1U0126.给药前和给药后多个时点均进行疼痛行为学测定.Blank、Sham和NP组于术后第6d取腰段脊髓背角,DMSO组于给药后6h取材,U0126组于给药后2、4、6、24h取材,通过免疫组化技术观察脊髓背角pERK阳性产物.结果:与Sham组相比,髓核致炎性神经根痛大鼠腰段脊髓背角pERK在术后1、4、7、14和21 d多个时点表达均增加(P＜0.05).术后第6d单次硬膜外腔给予U0126后4h髓核致痛大鼠的50％MWT明显提高(P＜0.05),持续至给药后8h,同时伴有脊髓背角pERK表达减少(P＜0.05).结论:腰段脊髓背角pERK在髓核致炎性神经根痛进程中表达增加,给予ERK通路抑制剂U0126可缓解痛觉过敏,脊髓背角ERK/MAPK通路在髓核致炎大鼠神经根炎性痛维持中起重要作用.
关键词： 细胞外信号调节蛋白激酶 神经根炎性痛 硬膜外腔注射 髓核 -
ERK通路对胃癌细胞顺铂敏感性的调节作用
目的:研究在人胃癌细胞中,细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路对人胃癌细胞顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法测定顺铂对两种胃癌细胞MGC-803、BGC-823的增殖抑制影响,测定PD98059作用BGC-823细胞后顺铂对细胞的增殖抑制影响.Western blot方法检测MGC-803、BGC-823细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π(glutathione S-transferases π,GGST-π)蛋白的表达;及PD98059作用BGC-823细胞24 h后BGC-823细胞中p-ERK、GsT-π蛋白的表达.结果:顺铂作用两种胃癌细胞7 2 h后.MGC-803,BGC-823细胞的IC50值分别为0.71和1.21 mg/L,且MGC-803细胞的增殖率明显低于BGC-823细胞的增殖率(P<0.05).MGC-803细胞顺铂的敏感性高于BGC-823细胞.MGC-803细胞不表达GST-π蛋白,BGC-823细胞强表达GST-兀蛋白.20 μmol/LPD98059作用BGC-823细胞24 h后,p-ERK蛋白表达明显下调,GST-π蛋白表达亦明显下调.20 μmol/L PD98059作用BGC-823细胞24 h后,加入顺铂培养48 h,BGC-823+PD98059组增殖率明显低于对照组,BGC-823细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:下调胃癌细胞GST-π蛋白的表达可增强其对顺铂的敏感性;抑制胃癌细胞中ERK通路的活化,可以降低其细胞内GST-π蛋白表达;ERK通路通过调节人胃癌细胞GST-π基因表达影响其对顺铂的敏感性.
关键词： 胃癌 细胞外信号调节蛋白激酶 耐药 谷胱甘肽-S-转移酶π -
细胞外信号调节蛋白激酶在人胃癌细胞Fas介导的凋亡信号通路中的作用
目的分析在胃癌细胞系SGC-7901中,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在Fas介导的信号通路中的表达及其作用,探讨该信号通路与胃癌发生和发展的关系.方法利用同位素标记法和特异性识别磷酸化ERK抗体进行Western印迹杂交,检测Fas抗体孵育不同时间点胃癌细胞ERK的活性;利用流式细胞术检测胃癌细胞在各处理因素作用下细胞凋亡情况.结果经抗Fas抗体处理后,胃癌细胞中ERK活性升高,在30 min时达高峰;在MEK1抑制剂PD98059作用下,ERK活性明显下降.抑制剂预处理组sub-G1细胞占30.5%±2.6%,单纯抗Fas抗体处理组sub-G1细胞占3.1%±0.2%,对照组为3.0%±0.1%.结论在胃癌细胞中,抗Fas抗体可介导ERK活性的升高,导致细胞对Fas介导的凋亡信号脱敏;MEK1抑制剂可使胃癌细胞对Fas介导的凋亡信号敏感;胃癌细胞通过Fas介导的ERK的活化,逃逸免疫监视,持续生长.
关键词： 胃肿瘤 Fas受体 细胞外信号调节蛋白激酶 信号转导 凋亡 -
小强度跑台运动对阿尔茨海默病转基因小鼠海马BDNF/ERK/CREB基因和蛋白表达的影响
目的:探讨小强度跑台运动对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)转基因小鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK) 1/2和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白及基因表达的影响.方法:实验动物分为野生型小鼠对照组(WtC)、野生型小鼠运动组(WtE)、转基因小鼠对照组(TgC)、转基因小鼠运动组(TgE).运动组小鼠进行5个月小强度跑台训练,每天以5m/min的速度开始运动5 min,后以8m/min的速度持续运动5 min,后以11 m/min的速度持续运动20 min,共运动30 min.运动训练结束后,检测各组小鼠海马BDNF、ERK1/2和CREB蛋白及基因表达情况.结果:与WtC组比较,TgC组小鼠海马组织中BDNF基因和蛋白表达明显增加(P＜0.05).TgE组小鼠海马BDNF基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P＜0.05);TgC组ERK1/2基因和蛋白表达水平明显高于WtC组(P＜0.05),但磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达明显低于WtC组(P＜0.05),TgE组ERK1/2基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P＜0.05),p-ERK1/2蛋白表达TgE组明显高于TgC组(P＜0.05);CREB基因和蛋白表达与ERK1/2基因和蛋白表达趋势一致,TgC组明显高于WtC组(P＜0.05),磷酸化CREB(P-CREB)蛋白表达TgC组明显低于WtC组(P＜0.05),TgE组CREB基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P＜0.05),P-CREB蛋白表达TgE组明显高于TgC组(P＜0.05).结论:长期小强度跑台运动减少APP/PS1转基因小鼠BDNF代偿性合成增加.ERK/CREB参与调节跑台运动对APP/PS1转基因小鼠学习和记忆损害的保护作用.
-
MPP+抑制PC12细胞BDNF表达
研究Mpp+( 1-methyl-4-phenylpyridinium)对PC12细胞的毒性作用及机制,采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting检测蛋白变化及双荧光素酶报告基因系统检测转录因子活性.结果表明,MPP+能够显著抑制细胞存活率,且呈剂量依赖性;而且MPP+能够降低PC12细胞神经营养因子BDNF(brain-derived neurotrophic factor)的蛋白水平,并能够抑制ERK(extracellular signal-regulatedproteininase)的磷酸化,而对CaMKⅡ活性无影响,同时能够显著抑制BDNF的转录因子CREB(cAMP response element binding protein)的磷酸化,并抑制其转录活性.因此Mpp+可能通过抑制ERK活性而抑制其下游转录因子CREB的活性,终导致BDNF的表达减弱.
-
光甘草定对MPTP致帕金森病小鼠海马区ERK信号通路的影响
目的 探讨中药光甘草定(GLA)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)海马区细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路影响机制.方法 40只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型(MPTP)组、模型+光甘草定(MPTP+ GLA)组、模型+左旋多巴(MPTP+ LD)组,每组10只.采用腹腔注射MPTP(20 mg/kg)的方法制备小鼠PD模型,对照组注射同等剂量的生理盐水,MPTP+ GLA组将光甘草定灌胃(50 mg/kg),MPTP+ LD组左旋多巴灌胃(40 mg/kg),观察各组小鼠行为学变化并进行Y型电迷宫测试,检测海马区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18 (IL-18)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化;免疫组化法测定海马中酪氨酸羟化酶(TH),ERK蛋白表达情况;Western印迹法检测海马中TH和ERK蛋白表达的变化.结果 MPTP组小鼠出现PD典型行为学表现,学习与记忆能力显著低于对照组;与对照组比较,MPTP组海马组织中TNF-α、IL-18、MDA含量均明显升高(P＜0.05),而SOD含量明显降低;与MPTP组比较,MPTP+ GLA组海马组织中TNF-α、IL-18、MDA含量均明显降低,而SOD含量明显增高[(TNF-α(μg/L):84.04±18.66比106.53±28.54;IL-18(μg/L):42.34±6.01比58.42±8.39;MDA(nmol/mg蛋白):2.64±0.52比3.78 ±0.31;SOD(U/mg蛋白):93.45±9.59比77.83±8.98)].免疫组化结果显示:与对照组比较,MPTP组TH蛋白表达减少而p-ERK蛋白表达明显增加;而MPTP+GLA组和MPTP+ LD组较MPTP组比较,TH蛋白表达增加,p-ERK表达明显减少.Western印迹检测结果显示:与对照组比较,MPTP组海马组织中TH蛋白表达减少而p-ERK蛋白表达明显增加;而MPTP+ GLA组和MPTP+ LD组较MPTP组比较,TH蛋白表达增加,p-ERK表达明显受到抑制.结论 传统中药光甘草定通过抑制ERK信号通路、抗氧化、减轻炎症等发挥对MPTP致PD小鼠学习记忆能力的保护作用.
关键词： 帕金森病 光甘草定 左旋多巴 细胞外信号调节蛋白激酶 酪氨酸羟化酶 -
光甘草定抑制p38MAPK/ERK信号通路减轻脂多糖致大鼠肺损伤的实验观察
目的 探讨中药光甘草定(Glabridin,GLA)对脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠的保护作用及可能机制.方法 32只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组(LPS组)、光甘草定(GLA)组、乌司他丁(UTI)组,每组8只.采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)的方法制备大鼠ARDS模型,对照组注射同等剂量的生理盐水,GLA组将光甘草定灌胃(30 mg/kg),UTI组腹腔注射乌司他丁(20000U/kg),12 h后各组大鼠留肺组织及血浆标本.计算肺组织湿/干质量(Wet/Dry,W/D)比值;光镜下观察肺组织病理改变;用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测各组血浆中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)含量,检测各组肺匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(N0)含量;免疫组织化学法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达情况;Western印迹法检测肺组织中磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及磷酸化ERK(pERK)蛋白表达的变化.结果 光镜下观察对照组肺组织结构完整,肺泡腔清晰;LPS组肺泡壁增厚,渗出明显,肺组织出现损伤性变化,GLA组及UTI组病理改变较LPS组明显减轻.与对照组比较,LPS组肺组织W/D比值,血浆TNF-α、IL-18含量,肺匀浆MDA、NO含量均明显升高(P＜0.05),而血浆SOD含量明显降低;与LPS组比较,GLA组肺组织W/D比值,血浆TNF-α、IL-18含量,肺匀浆MDA、NO含量均明显降低,而血浆SOD含量明显增高[(TNF-α(μg/L):51.7±10.3比105.7±30.5,IL-18(μg/L):37.9±13.9比49.2±14.5,MDA(nmol/mg蛋白(prot):2.87±0.62比3.81±0.42,NO(μmol/L):18.96±0.79比28.58±2.51,SOD (U/mgprot):115.5±15.2比75.9±14.0)];免疫组化结果显示:与对照组比较,LPS组p-p38MAPK、pERK蛋白在胞核表达均明显增加,而GLA组与UTI组较LPS组表达明显减少;Western印迹检测结果显示:与对照组比较,LPS组肺组织p-p38MAPK蛋白表达明显增高,而GLA及UTI干预组蛋白表达明显受抑制.结论 传统中药光甘草定通过抑制p38MAPK/ERK信号通路、抗氧化作用而减轻炎症,发挥对LPS致大鼠ARDS的保护作用.
-
bFGF促进肝癌Bel-7402细胞增殖的信号转导机制
目的:分析肝癌细胞系Bel-7402中Ras-Raf-ERK1/2途径介导的bFGF对细胞周期素E(cyclin E)表达及细胞增殖的影响,以探讨肝癌细胞增殖的信号转导机制.方法:bFGF处理后用流式细胞术检测细胞增殖情况;Western印迹检测ERK1/2激酶的活化;RT-RCR方法检测cyclin E的基因表达.结果:FCM结果表明bFGF诱导细胞进入S期(27.49%±0.72%→42.45%±1.06%);bFGF时、量效依赖性地诱导Bel-7402细胞ERK1/2活性增高和cyclin E mRNA表达.25ng/ml bFGF作用Bel-7402细胞10min ERK1/2活性达高峰为对照组的3.84倍,作用8h后cyclin E mRNA表达达高峰为对照组的5.15倍;MEK1抑制剂PD98059可抑制bFGF的这些作用.结论:Ras-RafERK1/2途径介导bFGF对cyclin E mRNA表达的诱导进而促进Bel-7402细胞的细胞周期进程,在肝癌增殖过程中bFGF信号转导发挥了重要的作用.
关键词： 肝癌 碱性成纤维细胞生长因子 细胞外信号调节蛋白激酶 细胞周期素E 信号转导 -
细胞外信号调节激酶在大鼠胰腺纤维化中作用的研究
目的 研究细胞外信号调节激酶(ERK1/ERK2)在大鼠胰腺纤维化中的作用.方法 通过对大鼠胰管内注射2%三硝基苯磺酸(TNBS)的方法 制备大鼠胰腺纤维化模型.采用免疫组化技术检测第四周胰腺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板衍化生长因子(PDGF)、磷酸化细胞外信号调节激酶1、2(P-ERK1/P-ERK2)的含量.结果 PDGF、P-ERK1/P-ERK2、α-SMA在模型组的表达均强于对照组(P<0.01).α-SMA与PDGF、P-ERK1、P-ERK2定量分析成正相关(P<0.05).结论 ERK1/ERK2信号传导通路在慢性胰腺炎发生纤维化过程中具有重要作用.
关键词： 细胞外信号调节蛋白激酶 胰腺炎 纤雏化 大鼠 -
MAPK 在介导人肺泡巨噬细胞模型噬菌中的作用
目的：探讨 MAPK 信号传导途径在介导人肺泡巨噬细胞吞噬细菌中的作用。方法使用 Ficoll-Hypaque 密度梯度法将外周血单核细胞分离自13名健康志愿者外周血,经2μg/L 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子诱导培养12 d 成单核细胞源性巨噬细胞(GM-M?),即肺泡巨噬细胞研究替代细胞模型。用共聚焦荧光显微镜检测 GM-M?吞噬荧光标记的金黄色葡萄球菌；使用多功能酶标仪检测p38 MAPK、ERK、JNK 特异性抑制剂对 GM-M?吞噬金黄色葡萄球菌量的影响。以细胞吞噬抑制剂细胞松弛素 D 为阳性对照。结果 GM-M?吞噬金黄色葡萄球菌呈时间依赖,4 h 后呈逐渐饱和状态。以吞噬反应4 h 为观测终点,共聚焦荧光显微镜检测显示绝大部分金黄色葡萄球菌均被吞噬进细胞内。使用细胞松弛素 D 后,GM-M?对金黄色葡萄球菌的吞噬几乎全部被抑制,其荧光值为(4259±869)RFU；p38αMAPK 特异性抑制剂 GW856553随着浓度的升高可抑制 GM-M?对金黄色葡萄球菌的吞噬,并呈浓度依赖性：浓度为10-6 mol/L 时荧光值为(18290±5491)RFU,浓度为10-5 mol/L 时荧光值为(16802±6440)RFU,与空白对照[(19489±5450)RFU]相比差异均有统计学意义。而ERK 抑制剂 UO126和 JNK 抑制剂 SP600125在各实验浓度下(10-8~10-5 mol/L)均对 GM-M?吞噬金黄色葡萄球菌无影响。结论 p38 MAPK 途径可能参与了介导人肺泡巨噬细胞对细菌的吞噬作用,而ERK 及 JNK 信号传导途径与此无关。
-
慢性低氧对肺动脉高压大鼠肺血管ERK 1/2、p38MAPK表达的影响
目的：通过建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,研究慢性低氧对大鼠肺血管细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38MAPK蛋白表达的影响。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,应用免疫组织化学技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达水平。结果①RVSP 和 RV/(LV+S)比值较正常对照组明显增加(P<0.05),低氧后3 d、7 d、14 d和21 d后大鼠肺血管明显增厚；②ERK1/2、p38MAPK蛋白广泛分布于肺血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞中,且随着低氧时间的延长,ERK1/2、p38MAPK蛋白表达量增加。结论 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达量的上调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。
-
肝纤维化患者“益肝康”药物血清对HSCs胞浆游离钙的影响
目的 探讨经用慢性乙型肝炎患者制备的“益肝康”药物血清对血管紧张素Ⅱ介导的HSCs胞浆游离钙变化的影响.方法 采用体外HSCs株培养技术.患者血清分为A组:服用“益肝康”前；B组:服用“益肝康”后.药物血清的制备:15例观察对象服药前采静脉血5ml,然后给予“益肝康”150 ml,2次/d,疗程7d时作为观察终点.服用“益肝康”前后,均于晨起外周静脉取血.采用盲法,用上述10％药物血清培养HSCs24 h,再将经药物血清预处理的HSCs及对照组细胞负载Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测Ca2+i.结果 经“益肝康”药物血清预处理HSCs后均可明显减低细胞Ca2+i,荧光强度相对值与经服药前患者血清预处理HSCs组结果相比,Ca2+i下降达52.37％,两者相比有显著性差异（P＜0.01）.给予Ang-Ⅱ(1.1×10-7mol/L)刺激HSCs,经“益肝康”药物血清预处理的HSCs,细胞Ca2+i荧光强度变化百分数明显减低,同经服药前患者血清预处理HSCs组结果相比,下降达90.50％,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 来自慢性乙型肝炎患者的”益肝康“药物血清具有抑制HSCs胞浆内游离钙水平升高的作用.
-
铝对大鼠海马ERK蛋白及mRNA表达影响
目的 研究慢性铝中毒对大鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白及mRNA表达水平的变化,探讨铝中毒对学习记忆机制的影响.方法 选择断乳后Wistar大鼠,用不同浓度AlCl3的水饲养3个月.测量大鼠海马长时程增强(LTP),用改良的Takai法测定丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的变化,蛋白印迹(Western blotting)方法检测ERK1/2的蛋白含量,RT-PCR方法检测ERK2的mRNA表达.结果 (1)各染铝组MAPK活性降低且与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)ERK1/2蛋白表达的比较:①ERK2在大鼠海马中的蛋白含量高于ERK1;②染铝组ERK1/2非磷酸水平与对照组比较均有所下降(P＜0.05),但染铝组之间差异无统计学意义(P＞0.05);③染铝组ERK1/2磷酸化水平与对照组的比较均有下降(P＜0.05),染铝组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).(3)染铝组ERK2的mRNA表达与对照组比较明显降低,但染铝组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性铝中毒不仅影响大鼠海马中ERK2的mRNA表达水平,同时也影响ERK1/2的蛋白表达水平的降低,造成有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的下降,损害LTP的形成,从而影响学习记忆功能下降.
关键词： 铝 长时程增强 细胞外信号调节蛋白激酶 学习与记忆 海马
