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黄芩素对绒毛滋养细胞侵袭的影响
目的:通过研究黄芩素对人类早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo的增殖活力、侵袭能力的影响,探讨中药黄芩作用于滋养细胞侵袭相关疾病的可能作用机制.方法:体外培养早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞,以不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.5,1μmol·L-)黄芩素作用于细胞,设黄芩素0 μmol· L-为空白组,采用细胞增殖、毒性活力实验法(cell counting kit-8,CCK-8)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞增殖活力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞侵袭作用的影响.提取黄芩素处理后的细胞总RNA,蛋白,分别运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滋养细胞侵袭相关的重要因素-基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9的mRNA,蛋白表达水平;收集细胞上清,培养基采用明胶酶谱法检测黄芩素对MMP-2,MMP-9的分泌及酶活性的影响.结果:与空白组比较,0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L-1黄芩素能明显诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力(P＜0.05),且侵袭率对剂量呈依耐性增长.0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L-1黄芩素可明显上调MMP-9蛋白和mRNA表达水平,增强其酶活性(P＜0.05).结论:黄芩素能诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力,可能是通过增强MMP-9 mRNA和蛋白表达及酶活性来发挥作用.
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安胎协定方对离体人早孕绒毛滋养细胞增殖活力及ERK1/2信号通路的影响
目的:观察不同浓度的安胎协定方含药血清对离体人早孕绒毛滋养细胞HTR-8细胞增殖活力及ERK1/2信号通路的影响,探究其维持妊娠机制.方法:雌性SD大鼠灌胃制备空白血清和各组含药血清.将HTR-8细胞分为5组:空白对照组,地屈孕酮组,中药高、中、低剂量组(5％、10％、20％含药血清).MTT法检测24、48、72h的吸光度,表示细胞增殖活力,免疫组化法检测48h细胞EGF、EGRR及ERK1/2表达含量.结果:与空白对照组比较,除中药低剂量组外,其余各组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量均显著升高 (P<0.05);与地屈孕酮组比较,中药低剂量组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量显著降低(P<0.05);与中药低剂量组比较,中药中、高剂量组3个时间段的吸光度及48h细胞EGF、EGFR、ERK1/2含量显著升高(P<0.05).结论:安胎协定方可改善绒毛滋养细胞增殖活力,避免增殖过度以维持妊娠,可能是通过适度上调细胞内EGF及EGFR的含量表达,促进ERK1/2磷酸化而实现的.
关键词： 安胎协定方 绒毛滋养细胞 细胞增殖活力 细胞外信号调节蛋白激酶 -
烯菌酮对小鼠前列腺癌细胞增殖及其脂质过氧化物含量和抗氧化物酶活性的影响
为研究烯菌酮对小鼠前列腺癌(RM-1)细胞增殖及其脂质过氧化物和抗氧化物酶的影响,实验采用了四唑盐法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)榆测了RM-1细胞增殖活力,采用比色法测定了其细胞内抗氧化物酶活性和脂质过氧化物(Maleic Dialdehyde,MDA)含量的改变.结果 表明,0.01 μmoL/L、1 μmol/L和100 μmol/L三个浓度的烯菌酮作用24和48 h,RM-1细胞增殖活力均明显低于对照组.100 μmol/L烯菌酮作用48 h,小鼠前列腺癌细胞中脂质过氧化物含量明显高于对照组及0.01 μmoL/L和1 μmol/L两个浓度组.烯菌酮作用24、48和72 h,RM-1细胞中总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性随烯菌酮浓度增加而增加,具有浓度依赖性.0.01 μmol/L、1 μmol/L和100 μmoL/L烯菌酮作用24 h时,RM-1细胞中过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性明显低于对照组,但随着烯菌酮浓度增加,CAT活性明显增加.100 μmol/L烯菌酮作用48和72 h时,RM-1细胞中CAT活性明显高于其他三组.这说明,烯菌酮能抑制RM-1细胞增殖活力,促进其细胞内脂质过氧化物的含量和抗氧化物酶的活性.
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鱼藤素对小鼠小胶质细胞 BV-2影响的实验研究
目的：研究放射增敏剂鱼藤素对小鼠小胶质细胞BV-2的影响。方法 BV-2细胞以5×104／mL密度接种到细胞培养板中，加入8个不同浓度鱼藤素干预48 h后测定细胞增殖活力。在加入1×10-6 mol／L鱼藤素后6个时间点上测定细胞增殖活力。1×10-8 mol／L鱼藤素干预48 h，测定上清液中NO水平。结果5×104／mL BV-2细胞以含10％胎牛血清DMEM培养基培养，第48 h达到细胞生长曲线的峰值。在0～1×10-5 mol／L剂量范围内，1×10-6、1×10-5 mol／L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞的增殖活力显著降低；1×10-6 mol／L鱼藤素加入后第24、48、72 h等3个时间点上BV-2细胞增殖活力明显降低。1×10-8 mol／L鱼藤素干预48 h后BV-2细胞上清液NO水平提高。结论鱼藤素在一定的浓度时激活小胶质细胞，更高浓度时将导致小胶质细胞损伤甚至死亡。
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CCK-8法与Alamar blue法对RKO细胞株增殖活力测试条件的对比分析
目的 以RKO细胞株为增殖活力测试的研究对象,比较CCK-8法与Alamar blue法在检测中波长、孵育时间、细胞密度等方面的差异性.方法 取体外培养对数生长期的RKO细胞株,分别比较两者在不同检测波长(380、430、480、530、580、630 nm)、不同孵育时间(1、2、3、4、5、6 h)、不同细胞密度(2×104、5×103、1.25×103 CUF·mL-1)下所测的光密度值(OD值),并比较两者在相同条件下同一标本重复检测时的平衡性.结果 ALamar blue法在不同细胞密度中的佳检测波长皆为580 nm,而CCK-8法的佳检测波长会随着细胞密度的变化而有所改变;1～6 h时,CCK-8法适合的孵育时间在1h以后Alamar blue为2h以后,且CCK-8法的灵敏度、平衡性都强于Alamar blue法.结论 CCK-8法在细胞增殖活力检测中的灵敏性、平衡性、快捷性等都略强于ALamar blue法.
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不同浓度辣椒素对缺氧复氧后A549细胞凋亡的影响
目的 探讨不同浓度辣椒素对A549细胞缺氧复氧后增殖活力和凋亡率的影响.方法 将培养的A549细胞随机分为7组:正常培养组(control组);缺氧36h复氧24h组(HR组),用5种不同浓度(0.25μM组,2.5μM,25μM,250μM,2500μM)辣椒素处理后缺氧复氧组(cap0.25+HR组、cap2.5+ HR组、cap25+HR组、cap250+HR组、cap2500+HR组).除了control组,各组A549细胞于含有1％O2、94％ N2、5％CO2的培养箱中培养36h,然后置于普通培养箱中复氧培养24h,建立细胞缺氧复氧模型,辣椒素处理组根据各种浓度在缺氧前给予辣椒素.使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活力.收集control组、HR组、cap25+ HR组、cap250+ HR组细胞,用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞仪检测凋亡率.结果 与HR组比较,cap2.5+HR组、cap25+HR组、cap250+HR组细胞增殖活力增加(P＜0.05),cap2500+ HR组细胞增殖活力降低(P＜0.05).与HR组比较,缺氧前给予辣椒素的A549细胞缺氧复氧后凋亡率降低(P＜0.05),高浓度(250μM)保护作用更明显.结论 一定浓度范围内辣椒素可提高缺氧复氧A549细胞增殖活力,并抑制其凋亡.
