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提取溶剂对何首乌肝细胞毒性的影响
目的:比较不同溶剂提取何首乌对肝细胞毒性的差异,探讨提取方式对何首乌安全性的影响.方法:制备不同提取方式的何首乌样品,均按生药量的5 g·L-1给药,以CCK-8法检测人肝细胞(L02细胞)抑制率为评价指标,考察提取溶剂,溶剂量和提取时间3个因素对何首乌肝细胞毒性的影响.同时建立何首乌的UPLC指纹图谱,采用偏小二乘法(PLS)回归分析肝细胞毒性与化学成分之间的关系.结果:建立了基于CCK-8比色的何首乌对人正常肝细胞毒性的检测方法.何首乌75％乙醇提取物的肝细胞毒性显著＞水提取(P＜0.01).进一步正交试验显示,乙醇浓度对何首乌肝细胞毒性具有显著性影响(P＜0.01),提取物肝细胞毒性顺序:50％乙醇提取物＞75％乙醇提取物＞95％乙醇提取物.通过偏小二乘法回归分析,发现了2个与毒性密切相关的色谱峰.结论:不同提取溶剂对何首乌肝细胞毒性有较大影响,50％乙醇提取物毒性强,而何首乌泡酒主要采用50度左右的白酒,提示何首乌泡酒服用的方式可能有较大肝损害风险,应予以高度重视.
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5种中药有效部位的抗肿瘤作用
目的:研究5种中药有效部位的抗肿瘤作用及机制.方法:通过细胞病变效应法(CPE)、CCK-8法(CCK-8)和肿瘤病毒抗原激活实验系统,观察5种中药有效部位对肿瘤细胞的细胞毒作用和对肿瘤病毒早期抗原表达的抑制作用.结果:5种中药有效部位在一定的剂量范围内,对Hela细胞、EC-109细胞、MCF-7细胞、Bel-7402这4种不同的肿瘤细胞株均有直接的抑制作用,但抑制率有所差异；同时对肿瘤病毒早期抗原基因的表达也均有明显的抑制作用,抑制率在71.2％-94.4％之间.结论:阻断促癌因素也是防治肿瘤的重要手段和方法.结果提示这些中药有效部位可能是通过细胞毒作用和抑制肿瘤病毒抗原表达和基因复制来达到抗肿瘤的作用.
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人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对5种抗肿瘤药物敏感性的研究
目的 检测人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对顺铂(DDP)、替尼泊甙(VM26)、尼莫斯汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)及长春新碱(VCR)5种临床常用抗肿瘤药物的敏感性,筛选脑胶质瘤化疗敏感药物.方法用含0％、10％及20％胎牛血清的DMEM培养基培养BT325胶质瘤细胞,分别在24 h、48 h、72 h、96 h、120h、144 h进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,以确定细胞生长的佳血清浓度；采用CCK-8法检测不同血浆峰浓度(PPC)5种药物对BT325胶质瘤细胞活性的影响,计算抗肿瘤药物的抑制率及IC50.结果细胞形态观察及细胞生长曲线显示含10％胎牛血清的DMEM培养基对BT325胶质瘤细胞生长较为适宜.细胞活性检测显示DDP在0.625×PPC(抑制率为51.8％)及以上浓度时可抑制BT325细胞生长,在1.25×PPC(抑制率为75.1％)及以上浓度时BT325细胞高度敏感,且有量效关系；VM26对BT325细胞抑制率均在79.6％以上,为高度敏感,剂量范围广且存在量效关系；VCR各浓度对BT325细胞抑制率为50％左右,但是与药物剂量无关；各浓度ACNU、TMZ对BT325细胞抑制率均在34％以下,无抑制作用.结论BT325胶质瘤细胞对DDP、VM26敏感,对VCR、ACNU、TMZ不敏感.
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吲哚乙酸联合辣根过氧化物酶对人SACC-2细胞的抑制作用
目的: 探讨吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用对人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-2生长抑制的影响.方法: 用不同浓度的IAA/HRP(IAA 20、40、60 、80、100 μmol/L+HRP 1.2 mg/L)与SACC-2细胞共同培养48 h后, 光镜下观察癌细胞的生长;CCK-8法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR技术检测caspase-3 mRNA水平.结果: 与阴性对照组比较, 48 h后 SACC-2细胞皱缩, 变小变圆, 空泡明显;40、60、80、100μmol/L IAA组的细胞生长抑制率明显增高(31.8%, 38.71%, 60.57%, 80.18%, 均P <0.05);半定量RT-PCR结果显示, 60、100 μmol/LIAA与1.2 mg/L HRP联合作用可上调caspase-3mRNA水平(0.835±0.019, 1.667±0.022 vs0.242±0.025, 均P <0.01).结论: IAA/HRP对人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-2生长有明显的抑制作用, 可通过激活caspase-3 mRNA的表达, 诱导凋亡.
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CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞佳检测条件的实验研究
目的：研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）佳检测条件。方法：以兔BMSCs分离、培养及扩增，经多次传代扩增，并取第4代细胞用于实验。对比CCK－8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异，研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs佳检测时间及检测波长。结果：牛膝醇提物能明显诱导兔骨髓间充质干细胞增生，对诱导兔BMSCs软骨分化具有较强的可行性。 CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs佳测试时间为加入CCK－8试剂孵育后的2小时，佳检测波长为450nm。适宜检测的细胞数量范围为2．5×103／ml～4×104／ml个。结论：CCK－8法在孵育2小时后及酶标仪450 nm波长下检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs灵敏度高。
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丹参酮ⅡA对经子痫前期患者血清刺激的人脐静脉内皮细胞的影响
目的 观察丹参酮(Tan)ⅡA对经子痫前期患者血清刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响.方法选取2010年12月至2011年4月于哈尔滨医科大学附属第一医院住院分娩的20例子痫前期患者的60份血清标本(每例患者采集3份)为研究对象.根据是否采用TanⅡA对HUVEC进行预处理,将其分为子痫前期组(n=20)、1.0mg/L TanⅡA处理组(n=20)和2.0 mg/LTanⅡA处理组(n=20).选取同期在相同医院就诊的20例正常晚孕期妇女的血清标本(每例孕妇采集1份)作为空白对照组(n=20)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).20例子痫前期患者与20例正常晚孕期妇女的年龄、孕龄等比较,差异无统计学意义(P＞0.05).倒置显微镜下观察4组HUVEC形态.采用CCK-8法测定4组HUVEC光密度(OD)值(HUVEC活力),并对结果进行统计学分析.结果 倒置显微镜下见:子痫前期组HUVEC呈损伤改变,细胞稀疏,细胞质与细胞核界限模糊,细胞质中有暗色颗粒;1.0 mg/LTanⅡA处理组和2.0 mg/L TanⅡA处理组HUVEC细胞形态呈多角形、椭圆形,排列紧密,细胞边界清楚.对4组血清标本继续培养24 h和48 h所测OD值,子痫前期组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);1.0 mg/L TanⅡA处理组、2.0 mg/L TanⅡA处理组分别与子痫前期组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05):1.0mg/1TanⅡA处理组与2.0 mg/LTanⅡA处理组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 子痫前期患者血管内皮细胞受损,导致内皮细胞活力下降,而Tan ⅡA可减轻该损伤作用.
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MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较
在细胞学实验中,MTT比色法和3H-TDR掺入法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测.因MTT法具有简便、经济、安全等特点,而被广泛使用,但其操作较繁琐,需加入DMSO溶解甲臜颗粒,且往往因溶解不全而对实验结果造成影响;而3H-TDR掺入法虽然灵敏度高、特异性强、稳定性好,但由于操作步骤多、存在放射性危害等限制了其使用.
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台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As2O3细胞毒性作用中的意义
目的 筛选三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法,并对其结果进行分析.方法 采用台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法测定不同浓度的As2O3体外作用HL-60细胞株的细胞存活率,采用单因素方差分析其与剂量-时间依赖反应的关系.结果 4.0、8.0μmol/L作用48、72 h及8.0 μmol/L作用24 h被染细胞小于5％,其余均未观察到蓝染细胞.MTT法检测在1.0～8.0 μmol/L As2O3剂量范围内培养24、48、72 h(P＜ 0.05),各组均能够抑制HL-60细胞活性.CCK-8法检测在0.5～8.0 μmol/L As2O3剂量范围内培养24、48、72 h(P＜ 0.05),各组均能够抑制HL-60细胞活性.HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低,As2O3的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应.结论 在研究As2O3的细胞毒性时,用CCK-8法优于MTT法,均比台盼蓝法更为灵敏.
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4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果
目的 研究4种细胞毒活性测定方法 对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析.方法 将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128 μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线.结果 台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01 μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24 μmol/L,.紫草素浓度分别在3.2、32 μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异.其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低.对于HL-60细胞,紫草素12.8 μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81％,台盼蓝法为96％;对于A549细胞,紫草素128 μmol/L时,MTT法测得抑制率为89％,台盼蓝法为99％.紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600nm存在重叠,大重叠峰在550～570 nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应.台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性.结论 紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法.
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大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨大黄素对人胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响.方法 人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度大黄素(10、20、40、80、160μmol/L)分别作用24、48、72 h后,应用CCK-8法检测细胞增殖,光学显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 大黄素对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性,20、40、80μmol/L大黄素作用Pane-1细胞24 h后凋亡率分别为7.1%、15.2%、21.4%.结论 大黄素可显著抑制人胰腺癌Pane-1细胞生长,大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞株的增殖抑制作用可能以诱导细胞凋亡方式为主.
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蒙古黄芪中2种具有免疫活性的可溶性粗蛋白提取工艺优选
目的 优选蒙古黄芪Astragalus membranaceus mongholicus中2种免疫活性蛋白AmPR10-16kDa和HQGP-2的佳提取工艺.方法 以蒙古黄芪中所含可溶性蛋白AmPR10-16kDa和HQGP-2二级结构的圆二色性对提取温度和提取溶剂种类进行考察;对该2种蛋白提取条件进行单因素考察,并采用L9(34)正交试验设计法,采用Image凝胶图形分析软件以AmPR10-16kDa和HQGP-2在SDS-PAGE凝胶图中的蛋白条带灰度值(峰面积)为指标,考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂(pH值)、药材粒度、提取次数对AmPR10-16kDa和HQGP-2蛋白条带灰度值的影响,从而确定AmPR10-16kDa和HQGP-2的佳提取工艺,辅以其免疫抑制率(CCK-8法)和可溶性蛋白定量测定(BCA法)作为佐证.结果 建立了蒙古黄芪中AmPR10-16kDa和HQGP-2的佳提取工艺:向药材粉末(过4号筛)5.0g中加入16倍量Tris-HC1,在温度40℃条件下恒温提取60 min,以100 r/min搅拌.蒙古黄芪蛋白质提取率为65 mg/g,且质量浓度为90 μg/mL粗蛋白的免疫抑制率为90.90％.结论优化的提取工艺能正确反映AmPR10-16kDa和HQGP-2收率的高相对量,为AmPR10-16kDa和HQGP-2的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺.
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壳聚糖/明胶/卡拉胶支架材料的细胞毒性检测研究
[目的]采用MTT和CCK-8检测壳聚糖-明胶-卡拉胶支架材料的细胞毒性,并进一步探讨该生物复合支架在牙周组织工程应用中的可行性,为后续试验提供理论依据.[方法]测定和分析在不同配比成分的支架材料浸提液:(1)壳聚糖+明胶.(2)5％卡拉胶+壳聚糖+明胶.(3)10％卡拉胶+壳聚糖+明胶.(4)15％卡拉胶+壳聚糖+明胶.以上各组份中壳聚糖与明胶的比例均为1∶1中不同组别[实验组(100％SLL、50％SLL、10％SLL、5％SLL)、阴性对照组、阳性对照组、空白对照组]中hela细胞的吸光度值,即OD值;通过计算细胞相对增值率RGR,并根据RGR值进行支架材料细胞毒性分级.[结果]MTT和CCK-8法在倒置相差显微镜下均可见实验组和阴性对照组细胞形态呈多边形,细胞增殖活跃,核分裂相明显;阳性对照组细胞胞核固缩,呈球形,部分细胞膜破裂,可见细胞溶解及细胞碎片形成.不同配比成分实验组的RGR介于93％～114％,各实验组OD均值与阴性对照组OD均值差异无统计学意义(P＞0.05),实验组和阴性对照组OD均值与阳性对照组OD均值差异均有统计学意义(P＜0.05),两种方法下同组间OD均值差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]本实验中随加入卡拉胶比例不同而分成的各组支架材料检测所得到的RGR值介于93％～114％,其细胞毒性为0级或1级,说明该支架无细胞毒性,符合生物学材料要求,在牙周组织中有良好的应用前景.
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望江南葸醌类成分的提取及抗肝癌活性研究
目的:研究望江南蒽醌类成分的提取工艺及抗肝癌活性.方法:以植物望江南为研究对象,设计了望江南蒽醌类成分的提取工艺,并采用CCK-8法观察了望江南蒽醌类各化合物体外对肝癌细胞(HepG2)的可能作用.Hoechst.33258染色实验观察了胡萝卜苷、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸对HepG2细胞凋亡的影响.结果:本文的提取工艺对望江南种子进行提取,结果分离并鉴定了7个化合物,分别为:β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、大黄素甲醚吡喃葡糖苷(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)、大黄酚(6)、大黄酸(7).其中,化合物1、2、3、5、7为首次从望江南中分离得到.胡萝卜苷、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸等望江南中蒽醌类化合物均对肝癌HepG2的具有抑制作用.不同望江南蒽醌类化合物对HepG2细胞的抑制率是不同的.大黄酸药物干预组HepG2细胞凋亡比较明显,部分细胞核浓染呈亮蓝色,出现凋亡小体.结论:望江南可能具有良好的体外抗肝癌作用,作为天然抗肿瘤植物,具有很好的发展前景和开发利用价值.
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人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清对肺脏上皮细胞氧化应激的保护作用
背景:前期研究证实人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的清除活性氧自由基的能力,且本身具有一定的抗氧化酶活性.目的:探究人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下所得上清对氧化应激损伤的肺脏上皮细胞的保护作用及其作用机制.方法:分别使用不同浓度的过氧化氢(200,400,500,600,800μmol/L)对肺脏上皮细胞A549细胞系进行6,12,24 h的氧化刺激,通过CCK-8法对肺脏上皮细胞存活率进行检测,得出存活率为50%时的过氧化氢浓度作为氧化损伤模型的适条件.用Hochest33258染色及Western Blot对模型有效性进行验证.采用无血清培养基培养胎盘胎儿侧间充质干细胞,收集P3代细胞培养上清将其作用于氧化损伤的肺脏上皮细胞,培养24 h,即上清组.同时设立损伤组(仅进行氧化损伤)和维生素C组(培养基中添加100μmol/L的维生素C).利用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测以及Western Blot检测凋亡相关蛋白及氧化应激经典信号通路Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白的表达.结果与结论:①CCK-8法检测得出,采用600μmol/L的过氧化氢对肺脏上皮细胞进行24 h的氧化刺激,A549细胞存活率为(56.41±3.31)%.Hochest33258染色及Western Blot证实模型的可靠性;②流式细胞术结果显示维生素C组和上清组氧化损伤细胞的凋亡率与损伤组细胞相比有不同程度的降低,其中上清组与损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);③Western Blot对凋亡相关蛋白的检测显示,与损伤组对比,维生素C组和上清组凋亡促进基因Bax蛋白表达减弱,凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达增强,且差异有统计学意义(P<0.05).Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白显示与损伤组对比,维生素C组和上清组Nrf2蛋白表达增强,Keap1分子表达减弱且差异有统计学意义(P<0.05);④上述结果提示,实验成功构建了肺脏上皮细胞损伤模型,且人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,能够起到减弱氧化损伤,抑制细胞凋亡的作用,其作用机制可能与激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路有关.
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CCK-8法定量检测亚甲蓝对人髓核细胞的毒性
背景:前期细胞实验研究发现亚甲蓝确实对人髓核细胞具有毒性作用,且与药物浓度呈正相关,但是其毒性的临界范围未进行研究.目的:使用CCK-8法定量测定亚甲蓝对髓核细胞毒性作用的临界范围值.方法:选取 1 例椎间盘突出症患者的术后废弃髓核组织,提取髓核细胞,培养 1 代后制作细胞悬液,分 9组接种到96孔板,空白对照只有培养基、CCK-8溶液而没有细胞;0加药对照组只有培养基、细胞和CCK-8溶液;其余7个加药组分别加入1%,0.5%,0.1%,0.05%,0.01%,0.005%,0.001%浓度的亚甲蓝干预细胞生长繁殖.在培养24,48,72,96 h后使用CCK-8法测定吸光度,计算细胞活力并观察每一组颜色变化.结果与结论:①颜色变化:0加药对照组颜色深,加药组颜色与药物浓度负相关,且0.05%、0.01%、0.005%、0.001%组颜色较深并与0加药组颜色接近;②各组吸光度值均数及细胞活力:与0加药组相比,1%组吸光度减小(P ＜ 0.05),1%与0.5%组比较差异均无显著性意义(P ＞ 0.05),0.1%组吸光度及细胞活力显著高于0.5%组,0.05%组显著高于0.1%组;③结论:亚甲蓝对人髓核细胞具有细胞毒性,毒性临界值在0.1%-0.05%之间且靠近0.05%,确切值还有待于进一步研究.
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3D打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球复合材料：构建及细胞毒性评价
背景：3D 打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球复合材料，对细胞尤其是成骨细胞生长和增殖的影响及影响程度尚缺乏可靠的生物医学证据。目的：构建3D 打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球材料，检测其细胞毒性。方法：利用3D 打印技术制备出20个孔径400μm 的多孔β-磷酸三钙材料，随机抽取其中10个负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球，作为载药支架，其余10个作为非载药支架。将以上两种支架浸提液与成骨细胞共同培养72 h，通过倒置相差显微镜观察细胞形态，采用 CCK-8法测得成骨细胞 A 值，计算细胞相对增殖率，评价支架材料的细胞毒性。结果与结论：载药支架大小适度，结构规则，孔隙均匀。培养72 h 内，载药支架浸提液中的成骨细胞呈长条形或长梭形，可见少量细胞核固缩，表现出轻微中毒表现，细胞毒性分级为1级，无明显细胞毒性。结果表明3D 打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球无明显细胞毒性。
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人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究
目的:通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用.方法:将NRK52E细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养；实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β 1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h.在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响.结果:TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P＜0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加.结论:人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程.
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CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性之佳测试条件研究
目的 研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞(RFFBs)增殖活性的佳测试条件.方法 以兔筋膜作为成纤维细胞原代培养组织,利用传代至P3的成纤维细胞,对比CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异,研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的佳检测时间及佳检测波长.结果 CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的佳检测时间为加入CCK-8试剂孵育后的4 h,佳检测波长为450 nm.结论 CCK-8法在孵育4 h后及酶标仪450 nm波长下检测兔筋膜成纤维细胞的灵敏度高.
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华蟾素注射液诱导人胰腺癌细胞阻滞于G2/M期抑制细胞增殖的实验研究
目的 通过观察华蟾素注射液(Cmobutacini)对人胰腺癌细胞株SW 1990、BxPC3细胞周期的影响以探讨其抑制肿瘤细胞增殖的作用机理.方法 采用CCK-8法检测法在不同的时间点(12h、24 h、48 h、72 h和96 h)检测华蟾素注射液对人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测对细胞周期的影响.结果 华蟾素注射液对人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3具有抑制细胞增殖的作用,并具有时间及剂量依赖性.其中对SW1990的半数抑制率浓度(IC50)为(8.92±1.98) mg/mL,对BxPC3的半数抑制率浓度(IC50)为(5.00 ±0.66)mg/mL.流式细胞术检测发现,华蟾素注射液可使人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3阻滞于的G2/M期.结论 华蟾素注射液能通过诱导人胰腺癌细胞SW1990、BxPC3阻滞于G2/M期以抑制细胞增殖,为临床应用华蟾素注射液治疗胰腺癌提供实验依据.
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弓形虫对4种肿瘤细胞增殖及凋亡的影响
用1×104个/ml～32×104个/ml6个不同浓度刚地弓形虫RH株速殖子体外分别作用于对数生长期的乳腺癌MCF-7、前列腺癌DU-145、食管癌EC-109和肺癌A549细胞(5×104/ml)24 h,运用CCK-8法测定弓形虫对上述肿瘤细胞的抑制作用,计算细胞抑制率.用1×104、2×104和4×104个/ml弓形虫速殖子体外作用于A549细胞24h后,流式细胞仪检测肿瘤抑制基因P53和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因所编码蛋白质的表达情况.结果显示,随着弓形虫速殖子浓度升高,各肿瘤细胞增殖抑制率增高,其效果与剂量呈正相关.1×104个/ml弓形虫速殖子即对MCF-7、DU-145、EC-109和A549细胞增殖有抑制作用,其抑制率分别为19.7％、4.5％、28.0％和20.8％.各实验组肿瘤细胞增殖情况与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测A549细胞凋亡,凋亡率上升,且p53蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调.
