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UPLC-QTOF/MS分析芫花诱导人肝细胞L02损伤的毒性物质基础
目的:研究芫花提取物诱导人肝细胞L02损伤的毒性物质基础.方法:选取人肝细胞L02作为体外实验模型,运用MTT法测定芫花提取物对细胞增殖的影响,并且采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)对芫花提取物及与L02细胞亲和后胞内化学成分进行定性分析.结果:芫花提取物对L02细胞的生长抑制呈明显的剂量依赖关系,48 h的IC50为(48.34±4.66) mg·L-1.通过UPLC-QTOF/MS鉴定的黄酮类成分主要有:芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素、5,4'-二羟基-7,3'-二甲氧基黄酮；二萜原酸酯类成分主要有:芫花酯戊、genkwanine L、芫花酯丙、芫花烯、芫花酯丁、芫花酯庚、芫花酯乙、芫花酯己、芫花酯甲.在芫花提取物亲和的L02细胞中鉴定出3'-羟基芫花素、芫花素、5,4'-二羟基-7,3'-二甲氧基黄酮、芫花酯戊、芫花烯、芫花酯丁、芫花酯乙、芫花酯甲.其中二萜原酸酯类成分芫花酯甲作用L02细胞48 h的IC50为(29.57±2.01) mg·L-1,黄酮类成分芫花素(0.1 ～ 100 mg·L-1)未发现对L02有显著的细胞毒作用.结论:芫花提取物对人肝细胞L02具有细胞毒作用,其中二萜原酸酯类成分与细胞有明显的亲和作用,并具显著的细胞毒作用,是芫花提取物中主要的活性物质.
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HPLC法测定人肝细胞LO2内外液中金丝桃苷的含量
目的:建立测定人肝细胞L02内、外液中金丝桃苷(Hyp)含量的方法.方法:以80μg·mL-1的Hyp与L02共孵育0、3、6、12、24 h后,采用高效液相色谱(HPLC)法测定细胞内、外液中金丝桃苷的含量.色谱柱为KROMASIL C18(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(45:55),柱温为30℃,流速为1.0 mL·min-1,紫外检测波长为360 nm.结果:细胞外液中Hyp的标准曲线为y=35.412X-8.586(r=0.999 9),表明Hyp检测浓度在2～200μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;细胞内液中Hyp的标准曲线为y=35.759X一7.422(r=0.999 9),表明Hyp检测浓度在0.1～10μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系.细胞外、内液中Hyp的平均回收率分别为(96.00±2.43)%、(97.18±4.62)%,平均日内RSD分别为1.98%、4.36%,平均日间RSD分别为1.75%、2.86%.样品溶液处理后室温放置22h,未处理样品溶液于一20℃放置6 d,平均RSD均＜5%.结论:本方法简单、准确、线性范围宽、灵敏度高、精密度和回收率良好,可为进一步研究Hyp的抗氧化作用与机制奠定方法学基础.
