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4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果
目的 研究4种细胞毒活性测定方法 对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析.方法 将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128 μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线.结果 台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01 μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24 μmol/L,.紫草素浓度分别在3.2、32 μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异.其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低.对于HL-60细胞,紫草素12.8 μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81％,台盼蓝法为96％;对于A549细胞,紫草素128 μmol/L时,MTT法测得抑制率为89％,台盼蓝法为99％.紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600nm存在重叠,大重叠峰在550～570 nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应.台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性.结论 紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法.
