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基于P53/P21和碱基切除修复通路的五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用研究
目的 基于P53/P21和碱基切除修复(BER)通路研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用.方法 将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1 g/kg)和高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组8只.给予普通饲料或含药饲料饲养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织.免疫荧光检测大鼠睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX及BER相关蛋白脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)和X线修复交错互补基因1(XRCC1)的表达和定位;ELISA法检测大鼠睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的量;Western blotting法检测大鼠睾丸组织中p-P53和P21蛋白的表达水平.结果 与衰老模型组相比,五子衍宗方能明显降低睾丸DNA损伤相关蛋白γ-H2AX和BER相关蛋白OGG1、APE1和XRCC1的表达水平;ELISA检测结果显示,与衰老模型组相比,五子衍宗方能显著下调8-OHdG的量;Western blotting结果显示,五子衍宗方能显著降低自然衰老大鼠睾丸-P53、P21的蛋白表达水平.结论 五子衍宗方可通过调节P53/P21和BER通路减轻自然衰老大鼠睾丸DNA损伤.
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赶黄草水提浓缩液抗衰老作用及其机制研究
目的 研究赶黄草Penthorum chinense水提浓缩液抗衰老作用及其机制.方法 以D-半乳糖制备亚急性衰老小鼠模型,采用小鼠避暗实验考察小鼠的学习记忆功能,测定脾脏指数、肝组织中单胺氧化酶(MAO)、血清中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的水平,Western blotting检测脑组织中p53、p21蛋白的表达.结果 赶黄草水提浓缩液能增强衰老模型小鼠的学习及记忆能力,增加脾脏指数,提高血清中SOD的活性,降低血清中MDA和肝脏中MAO的量,同时明显抑制脑组织中p53、p21蛋白表达,呈现一定的剂量依赖性.结论 赶黄草水提浓缩液具有明显的抗衰老作用,其机制可能与其下调衰老信号通路p53/p21的蛋白表达、增强机体免疫功能、清除自由基有关.
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过表达小窝蛋白-1对293T细胞生长的影响及机制
目的:探讨小窝蛋白-1(caveolin-1)蛋白过表达对细胞生长与增殖的影响及其机制.方法:将重组的真核表达质粒PHLCX Nflag3/小窝蛋白-1以脂质体法转染293T细胞,流式细胞仪测定细胞周期变化;Western Blotting分析P53、P21、ERK、pp-ERK蛋白表达.结果:293T细胞出现了G0/G1期阻滞;P53/P21表达增加,ERK/ppERK表达减少.结论:过表达小窝蛋白-1抑制293T细胞生长,并且这种对细胞生长抑制作用通过P53/P21与ERK信号传导通路实现的.
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应用siRNA技术下调Wnt2B抑制乳腺癌细胞恶性表型的研究
目的:通过体外实验探讨Wnt2B在乳腺癌发生发展中的作用.方法:应用免疫组织化学的方法检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中Wnt2B的表达；采用RNA干扰技术,在MCF7细胞中沉默Wnt2B的表达,并经Western blot检测其沉默效率；应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测、观察Wnt2B沉默后对MCF7细胞凋亡、细胞骨架构成的改变.同时在蛋白水平上检测沉默Wnt2B后对细胞P53/P21通路的影响.结果:Wnt2B蛋白在乳腺癌中的表达明显高于在正常乳腺组织中的表达；第2对Wnt2B siRNA(2号siRNA)对Wnt2B的沉默效果为明显；沉默Wnt2B后细胞早期凋亡率和晚期凋亡率相对于对照细胞均明显增高并伴有细胞骨架明显的改变,表现为细胞骨架溶解,正常形态消失.同时,细胞内P53及P21表达水平随Wnt2B沉默而明显下降.结论:Wnt2B基因可以改变乳腺癌细胞的凋亡水平和骨架结构,在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,为乳腺癌的治疗提供了新的靶点.
