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Wnt2B及PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
目的 通过检测Wnt2B与PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达,分析两者与上皮性卵巢癌侵袭转移及临床病理之间的关系,以探讨两种基因在上皮性卵巢癌的表达及临床意义.方法 应用免疫组化(SP法)检测2008年1月到2013年6月在本院行手术切除的上皮性卵巢癌82例和良性卵巢上皮瘤10例患者组织中Wnt2B和PAI-1蛋白的表达情况,分析上皮性卵巢癌的年龄、组织学类型、细胞学分级、手术病理分期、肿瘤病灶大小、盆腔转移灶大小、大网膜转移、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小等临床病理因素与两个基因的表达关系;分析上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B与PAI-1的表达关系.结果 上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B的阳性表达率为12.2％(10/82),低于良性卵巢上皮瘤患者瘤组织的70％ (7/10)(P＜0.05);上皮性卵巢癌患者癌组织中PAI-1的阳性表达率为76.8％(63/82),高于良性卵巢上皮瘤患者瘤组织的20％ (2/10) (P＜0.05).PAI-1的表达与手术病理分期、细胞学分级、大网膜转移、盆腔转移灶大小有关(均P＜0.05),而与患者年龄、组织学类型、肿瘤病灶大小、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小无关(均P＞0.05);Wnt2B表达与手术病理分期、大网膜转移有关(均P＜0.05),与患者年龄、组织学类型、细胞学分级、肿瘤病灶大小、盆腔转移灶大小、淋巴结转移、远处转移、残留病灶大小无关(均P＞0.05).上皮性卵巢癌患者癌组织中Wnt2B与PAI-1的表达呈负相关(r=-0.847,P＜0.05).结论 Wnt2B在上皮性卵巢癌的发病机制中可能发挥一定的作用.PAI-1的表达与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润、转移有关.
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miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的实验研究
目的 研究miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的影响及可能机制.方法 实时定量PCR检测A2780及顺铂耐药细胞株A2780/DDP中miR-218的表达,转染miR-218 inhibitors和mimics改变A2780及A2780/DDP细胞中miR-218的表达,MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性,并分析Wnt2B蛋白表达的改变.结果 与A2780细胞相比,miR-218在A2780/DDP中的表达明显降低.A2780细胞转染miR-218 inhibitors 后,细胞对顺铂的敏感性降低,Wnt2B蛋白表达明显增强；而A2780/DDP细胞转染miR-218 mimics后,细胞对顺铂的敏感性增强,Wnt2B蛋白表达明显减少.结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂的耐药性.
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大肠癌中WIF-1和Wnt2b的表达及其临床意义
目的 过检测WIF-1与Wnt2b在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及其与大肠癌生成、侵袭转移之间的关系,探讨WIF-1与Wnt2b之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测WIF-1和Wnt2b蛋白在15例癌旁正常组织、18例大肠腺瘤和103例大肠癌组织中的表达.结果 (1)WIF-1蛋白在大肠癌中的阳性率明显低于癌旁正常组织和腺瘤;Wnt2b蛋白在大肠癌中的阳性率高于癌旁正常组织和腺瘤.(2)WIF-1在大肠癌中的表达与患者的年龄、性别、分化程度、浸润程度、淋巴转移和远处转移均无关系(P>0.05);Wnt2b在大肠癌中的表达与大肠癌的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移和远处器官转移相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别均无关(P>0.05).(3)大肠癌中WIF-1与Wnt2b的表达呈负相关(r=-0.199,P<0.05).结论 WIF-1在正常大肠组织中呈阳性表达,在大肠癌的发病机制中可能发挥一定作用;Wnt2b的表达与大肠癌的发生、侵袭转移有关,联合检测WIF-1和Wnt2b有助于大肠癌的诊断、预防和治疗.
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WNT2B对人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响
目的 观察WNT2B对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向软骨细胞分化的影响.方法 采用慢病毒载体在1例hBMSCs中过表达WNT2B基因,并将其进行成软骨细胞诱导分化,以实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测软骨细胞标志基因性别决定区Y框蛋白9(Sox-9)和Collagen Ⅱ的表达变化,在光镜下计数软骨岛的数目,定量检测软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的染色强度和肥大软骨细胞数目.结果 在hBMSCs成软骨诱导分化过程中,过表达WNT2B对Sox-9基因的表达无显著影响(P=0.564)、显著抑制CollagenⅡ基因的表达(P=0.009),显著减少软骨岛的数目[(78.833±8.796)个/孔比(32.333±4.844)个/孔,P=0.000],显著减少软骨细胞分泌硫酸化糖胺聚糖的染色强度[(80.247±4.806)个/孔比(53.165±4.723)个/孔,p=0.000],显著减少三维诱导培养形成的肥大软骨细胞数[(13.833±2.994)个/视野比(6.667±1.211)个/视野,P=0.000].结论 WNT2B可以抑制体外hBMSCs向软骨细胞的分化成熟.
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miRNA-324-3p及其靶基因WNT2B在鼻咽癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨miRNA-324-3p及其靶基因WNT2B在鼻咽癌组织中的表达和临床意义.方法:qRT-PCR技术检测rniRNA-324-3p、WNT2B mRNA的相对表达量,Western blot技术检测WNT2B蛋白在39例鼻咽癌组织及21例鼻咽非肿瘤上皮组织中的表达,分析其表达水平与鼻咽癌临床病理特征的关系.结果:在鼻咽癌组织中miRNA-324-3p的相对表达量显著下调(P＜0.01),WNT2B mRNA和蛋白的相对表达量则显著上调(均P＜0.01).鼻咽癌组织中miRNA-324-3p与WNT2B mRNA及蛋白的表达呈负相关,WNT2B mRNA与蛋白的表达呈正相关(均P＜0.05).miRNA 324-3p、WNT2B mRNA及蛋白的表达均与鼻咽癌患者T分级、临床分期及淋巴结转移密切相关(均P＜0.05),而与患者的性别、年龄无明显相关性(均P＞0.05).结论:鼻咽癌组织中miRNA-324-3p的表达下调,WNT2B的表达上调,两者可能存在相互关系,共同介导鼻咽癌的发生、发展.
关键词： 鼻咽肿瘤 miRNA-324-3p Wnt2B 基因 -
miR-218靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞转移侵袭功能
目的 研究miR-218对卵巢癌细胞A2780转移侵袭的影响及可能机制.方法 miR-218 mimics转染A2780细胞,实时定量PCR检测转染效率;对转染前后细胞进行划痕及Transwell实验,并采用Western blot分析Wnt2B蛋白表达的改变.采用双萤光素酶报告基因检测系统验证Wnt2B是否为miR-218靶基因.结果 A2780细胞转染miR-218 mimics后,细胞运动侵袭功能受到明显抑制,Wnt2B蛋白表达明显下降,其为miR-218直接作用的靶基因.结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780的转移侵袭功能.
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Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡
目的 研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用.方法 应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响.结果 相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2B siRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断.结论 Wnt2B siRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一.
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应用siRNA技术下调Wnt2B抑制乳腺癌细胞恶性表型的研究
目的:通过体外实验探讨Wnt2B在乳腺癌发生发展中的作用.方法:应用免疫组织化学的方法检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中Wnt2B的表达；采用RNA干扰技术,在MCF7细胞中沉默Wnt2B的表达,并经Western blot检测其沉默效率；应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测、观察Wnt2B沉默后对MCF7细胞凋亡、细胞骨架构成的改变.同时在蛋白水平上检测沉默Wnt2B后对细胞P53/P21通路的影响.结果:Wnt2B蛋白在乳腺癌中的表达明显高于在正常乳腺组织中的表达；第2对Wnt2B siRNA(2号siRNA)对Wnt2B的沉默效果为明显；沉默Wnt2B后细胞早期凋亡率和晚期凋亡率相对于对照细胞均明显增高并伴有细胞骨架明显的改变,表现为细胞骨架溶解,正常形态消失.同时,细胞内P53及P21表达水平随Wnt2B沉默而明显下降.结论:Wnt2B基因可以改变乳腺癌细胞的凋亡水平和骨架结构,在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用,为乳腺癌的治疗提供了新的靶点.
