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吴茱萸碱激活结肠癌细胞自噬抑制其增殖的研究
目的 探讨吴茱萸碱(evodiamine,Evo)对结肠癌HCT-116细胞自噬、增殖的影响及其可能的分子机制.方法 CCK-8法检测Evo对HCT-116细胞增殖的影响;Evo(3、6μmol/L)处理48 h后,MDC法检测细胞内自噬小泡的数量,DHE法检测细胞内活性氧(ROS)的量,Western blotting法检测细胞自噬相关蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达;Evo(6 μnnol/L)分别与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK共同作用48h后,Western blotting法检测细胞内自噬及凋亡相关蛋白的表达.结果 与对照组比较,Evo对HCT-116细胞呈现浓度依赖性的增殖抑制作用;Evo(3、6μmol/L)使HCT-116细胞内的ROS量升高、自噬小泡数量增加、自噬相关蛋白LC3表达增加、p62表达降低、p-AMPK及mTOR表达增加;Evo与自噬抑制剂联合给药后,细胞内LC3蛋白表达减少,而有活性的Caspase-3表达增加,Evo与凋亡抑制剂联合给药后,细胞内LC3表达增加,而有活性的Capase-3表达被抑制.结论 Evo能够通过AMPK/mTOR通路激活自噬、抑制HCT-116细胞增殖,且细胞自噬与凋亡呈现互补作用.
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脂联素通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及细胞外基质退变
目的:探讨脂联素(adiponectin,APN)对氧化应激下大鼠髓核细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)退变的保护作用及相关机制.方法:原代培养SD大鼠髓核细胞,CCK-8法检测细胞活力,以确定APN的适保护浓度.将细胞分为对照组、H2O2组、APN+H2O2组及Compound C+APN+H2O2组,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CleavedCaspase-3、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)及带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)等蛋白的表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)、蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的mRNA水平,Western blot评估5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平.结果:1μg/mL APN对200 μmol/LH2O2所致的细胞毒性起佳拮抗作用.APN预处理显著抑制H2O2诱导的髓核细胞凋亡.相应地,Bax/Bcl-2比值及Cleaved Caspase-3表达的增加也被APN抑制.尽管对ADAMTS-5无明显抑制作用,APN降低了H2O2诱导的MMP-13的表达.此外,H2O2对COL2A1及ACAN转录的抑制作用也被APN显著缓解.APN还促进AMPK磷酸化并抑制mTOR磷酸化,而AMPK抑制剂Compound C显著减轻了APN对mTOR磷酸化的抑制作用.APN对凋亡、分解代谢的抑制作用及其对合成代谢的促进作用也均被Compound C逆转.结论:APN通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及ECM退变.
关键词： 脂联素 髓核细胞 凋亡 细胞外基质退变 AMPK/mTOR通路 -
生酮饮食抑制人肺癌裸鼠皮下移植瘤生长及其机制研究
目的:研究生酮饮食对人肺癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法:20只雌性BALB/C裸鼠皮下注射人肺癌A549细胞,随机均分为标准饮食组(SD组)和生酮饮食组(KD组).1个月后,测量体重、瘤重、肿瘤体积;检测血糖和血酮体;对肿瘤、肺、肝脏、脑和心采用HE染色;IHC检测肿瘤组织中Ki-67、AMPK、p-AMPK和p-mTOR蛋白表达.结果:两组体重无显著差异(P＞0.05);第10、25、30天KD组肿瘤体积明显变小(P＜0.05),其中第25天尤其显著(P＜0.01),抑瘤率为36％;与SD组相比,第30天KD组血糖降低(P＜0.05);第10、20、30天KD组血酮上调(P＜0.05),其中第20、30天更为显著(P＜0.01);HE染色显示KD组肿瘤组织坏死面积显著增加,其他脏器无明显差异;免疫组化结果显示KD组肿瘤组织Ki-67和p-mTOR蛋白表达下降(P＜0.05),p-AMPK表达上调(P＜0.01),而AMPK蛋白表达无明显差异.结论:生酮饮食可明显抑制人肺癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其抗癌作用可能与AMPK/mTOR信号通路的激活有关.
关键词： 肺肿瘤 生酮饮食 AMPK/mTOR通路
