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刺参粘多糖对人胰腺癌细胞株SW1990增殖的抑制作用
刺参粘多糖(stichopus japonicus acid muco-polysaccharide,SJAMP)是从中国刺参体壁中提炼出来的一类多糖类物质.该物质成分恒定,结构简单,易于克服空间位阻,增加了对黏膜上皮的穿透能力,容易被吸收.初步研究证实[1-4],刺参粘多糖具有广谱的抗肿瘤活性,能抑制肝癌、宫颈癌等恶性肿瘤细胞的增殖,诱导细胞分化.本研究观察SJAMP对胰腺癌细胞SW1990增殖、凋亡的影响,探讨其可能机制.
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类Smac小分子SmacN7对人胰腺癌细胞株SW1990凋亡影响的观察
目的:观察外源性类Smac小分子SmacN7对人胰腺癌细胞株SW1990凋亡的影响,以期找到治疗胰腺癌的新方法.方法:使用固相多肽合成技术(SPPS)和反相高效液相层析法(RP-HPLC)制备SmacN7；Heochst 33342染色法观察SW1990分别与PBS液和500 ng/mL TRAIL、500 μg/mL SmacN7作用24 h的细胞凋亡形态；流式细胞术(FCM)检测SW1990分别与500 μg/mL SmacN7和500 ng/mL TRAIL作用24 h的细胞凋亡率(CAR)并观察细胞周期分布；四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测SW1990分别与50、100、200和500 μg/mL SmacN7作用24、48和72 h的细胞生长抑制率(CGIR)；MTT法检测500μg/mL SmacN7分别与200、500、1 000和2 500 ng/mL TRAIL或10、20、40和60 μmol/L吉西他滨(GEM)联用,与SW1990作用24 h的CGIR.结果:SmacN7纯度≥95％,相对分子质量3 278.08,质谱鉴定结果与预期结果完全一致.SW1990与500 μg/mL SmacN7作用24h和与500 ng/mL TRAIL作用24 h细胞形态变化类似,细胞体积和细胞核增大,轻度肿胀,细胞变为短梭形,细胞核呈亮蓝色,分叶或碎片状,边缘集中,且数目更多；细胞周期均显示G0/G1期阻滞,S期比例下降,细胞生长变缓；CAR分别为5.64％和15.30％.SW1990分别与50、100、200和500 μg/mL SmacN7作用24、48和72 h,CGIR不同,且随SmacN7浓度增加和作用时间延长,CGIR升高,P＜0.05;500 μg/mL SmacN7分别联合200、500、1 000和2 500 ng/mL TRAIL,与SW1990作用24 h,SW1990的CGIR为18.11％、37.67％、42.63％和67.60％；分别联合10、20、40和60 μmol/L GEM与SW1990作用24 h,SW1990的CGIR分别为17.65％、31.85％、40.11％和74.99％.两组均随TRAIL和GEM浓度的增加,SW1990的CGIR升高.结论:SmacN7能促使SW1990凋亡,且有浓度和作用时间依赖性.其作用机制与XIAP表达量降低,细胞色素C和Caspase-3活性裂解片段p17表达量升高有关.SmacN7有可能成为治疗胰腺癌的新方法.
关键词： 胰腺肿瘤 类Smac小分子SmacN7 SW1990 凋亡 -
普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的影响及其联合顺铂的抗瘤作用
目的 探讨普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的作用及其联合顺铂对该细胞增殖的影响.方法 采用MTT比色法检测普伐他汀对SW1990细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪测定细胞的周期分布和凋亡率.顺铂、普伐他汀联合顺铂作用细胞48 h后,采用MTT法测定各处理组的OD值,并计算相互作用指数(cI).结果 1、5、10、15、25 μmol/L普伐他汀作用于SW1990细胞24～72 h,随着药物浓度增加和作用时间延长,处理组OD值不同程度下降(P＜0.05),生长抑制率逐渐增大.0、5、15、25 μmol/L普伐他汀处理细胞48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞逐渐减少,凋亡率由(2.74±0.92)％增加至(27.85±1.56)％.普伐他汀联合顺铂作用细胞后,两者的CI值均＜1.结论 普伐他汀具有抑制胰腺癌细胞SW1990增殖和诱导该细胞凋亡的作用,并可阻滞细胞周期于G1期.普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞具有协同抗瘤作用.
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鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究
目的：初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性，为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠，共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组，每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9％氯化钠注射液（10 mL/kg，NS，Biw，ip ×8），阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择（50 mg/kg，qw，ip ×4），鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体（10 mg/kg，Biw，ip ×8）共4周或（2 mg/kg，Biw，ip ×8）共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠（10 mg/kg，Biw，iv ×8）肿瘤生长缓慢，瘤体明显小于模型对照组，并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏，有大量淋巴细胞浸润，肿瘤细胞明显坏死，细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体（10 mg/kg，Biw，iv ×8）能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长，使瘤组织坏死、结构破坏。
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热疗对SW1990胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制
目的:探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其可能的作用机制.方法:分别用不同浓度吉西他滨(0,5,10,20,30 μM)作用于SW1990细胞不同时间(24,48,72小时)及30 μM吉西他滨作用24h联合热疗43℃1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况.采用Western blot方法检测细胞内E-cadherin蛋白和剪切的Notch1蛋白的表达.结果:①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖(P＜0.05),并呈浓度和时间依赖性.吉西他滨作用前24 h给予43℃1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW 1990细胞的抑制作用(P＜0.05)②吉西他滨作用SW1990细胞24小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合能够逆转此种形态学变化.③吉西他滨作用24小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、Cleaved Notch1的蛋白表达上调,热疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin蛋白表达下调、并下调Cleaved Notch1蛋白表达的上调.结论:热疗预处理显著逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株SW1990细胞的EMT现象,其机制可能与Notch信号通路有关.
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吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌细胞株SW1990体外增殖抑制效应的实验研究
目的:通过体外实验,探讨吉西他滨(GEM)白蛋白纳米粒对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖的抑制效应.方法:以人胰腺癌细胞株SW1990为研究对象,分为5个给药组:110 nm GEM纳米粒组、406 nm GEM纳米粒组、单纯GEM组、空白纳米粒组和无药对照组;运用MTT法检测给药后48 h和72 h的增殖抑制率.结果:MTT试验检测提示110 nm GEM-NP, 406 nm-GEM-NP和GEM均具有显著的细胞抑制作用,且72 h后406 nm-GEM-NP的细胞抑制率在50μg·mL-1GEM浓度时,超过了单纯GEM(P<0.05),表明其有显著的药物缓释作用;空白纳米粒对细胞抑制轻微,且不具有时间和浓度依赖性.结论:GEM白蛋白纳米粒,特别是406 nm-GEM-NP,对人胰腺癌细胞株SW1990具有显著的体外细胞增殖抑制作用,并且生物相容性良好.
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华蟾素注射液诱导人胰腺癌细胞阻滞于G2/M期抑制细胞增殖的实验研究
目的 通过观察华蟾素注射液(Cmobutacini)对人胰腺癌细胞株SW 1990、BxPC3细胞周期的影响以探讨其抑制肿瘤细胞增殖的作用机理.方法 采用CCK-8法检测法在不同的时间点(12h、24 h、48 h、72 h和96 h)检测华蟾素注射液对人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测对细胞周期的影响.结果 华蟾素注射液对人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3具有抑制细胞增殖的作用,并具有时间及剂量依赖性.其中对SW1990的半数抑制率浓度(IC50)为(8.92±1.98) mg/mL,对BxPC3的半数抑制率浓度(IC50)为(5.00 ±0.66)mg/mL.流式细胞术检测发现,华蟾素注射液可使人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3阻滞于的G2/M期.结论 华蟾素注射液能通过诱导人胰腺癌细胞SW1990、BxPC3阻滞于G2/M期以抑制细胞增殖,为临床应用华蟾素注射液治疗胰腺癌提供实验依据.
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普伐他汀对人胰腺癌细胞 SW1990增殖的抑制作用及其机制
目的：探讨普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990增殖的抑制作用及其机制。方法分别用含普伐他汀0、1、5、10、15、20、25、50μmol／L的RPMI1640培养基培养人胰腺癌细胞SW1990，24、48、72、96 h后采用MTT比色法检测细胞抑制率，以观察普伐他汀对SW1990细胞增殖的影响。48 h后采用流式细胞仪测定细胞周期分布并测算细胞增殖指数（ PI），以观察0、5、10、20μmol／L普伐他汀对SW1990细胞周期分布和凋亡的影响，光学显微镜下观察细胞形态学改变，流式细胞仪及间接免疫荧光技术分析普伐他汀作用后SW1990细胞p21Ras、细胞周期蛋白激酶4（CDK4）、Bax蛋白表达的变化。结果普伐他汀（1、5、10、15、20、25、50μmol／L）对SW1990细胞具有抑制增殖的作用，有明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系（P均＜0．05）。普伐他汀作用SW1990细胞后，有明显的细胞形态学改变。0、5、10、20μmol／L普伐他汀作用SW1990细胞48 h后，随药物浓度增大， G0／G1期细胞逐渐增多；S期和G2／M期细胞则逐渐减少（P均＜0．05）。0、5、10、20μmol／L普伐他汀处理细胞48 h后，出现典型的亚二倍体凋亡峰，依普伐他汀浓度增大而逐渐升高；细胞凋亡率分别为1．06％、6．24％、12．46％、17．21％。0、5、10、20μmol／L普伐他汀处理SW1990细胞48 h后，p21Ras、CDK4的荧光指数FI值随处理浓度增大而逐渐降低；Bax的FI值则随处理浓度增大而逐渐升高（P均＜0．05）。结论普伐他汀可通过下调p21Ras、CDK4蛋白的表达和上调Bax蛋白的表达而发挥其抑制胰腺癌细胞SW1990增殖、诱导该细胞凋亡的作用。
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Mcl-1和多药耐药蛋白基因在胰腺癌耐药细胞株中表达研究
目的 探讨淋巴瘤细胞株的Mcl-1和多药耐药蛋白(multi-drug resistance protein,MRP)基因在吉西他滨诱导的胰腺癌耐药细胞株PANC-1、SW1990中的表达情况,及其与胰腺癌耐药的关系.方法 胰腺癌细胞株PANC-1(PANC-1组)和SW1990(SW1990组),采用吉西他滨浓度递增法持续诱导建立耐药细胞株PANC-1/GZ(PANC-1/GZ组)和SW1990/GZ(SW1990/GZ组),采用MTT法测定4组细胞在1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L吉西他滨作用24 h后半数致死量(median lethal dose,LDs0),采用透射电镜技术观察吉西他滨诱导12h后细胞线粒体内部结构改变情况,采用流式细胞技术检测4组细胞在5.64 mg/L吉西他滨作用12h后线粒体膜电位情况,采用RT-PCR检测4组细胞在5.64 mg/L吉西他滨作用12h后Mcl-1和MRP mRNA表达情况,采用流式细胞仪分析PANC-1/GZ组和SW1990/GZ组Mcl-1和MRP基因敲除前、后线粒体膜电位变化情况.结果 随吉西他滨浓度增加和作用时间延长,PANC-1/GZ组和SW1990/GZ组细胞存活率高于PANC-1组和SW1990组(P＜0.05);PANC-1/GZ组和SW1990/GZ组细胞Mcl-1 mRNA(0.780±0.008、0.840±0.006)和MRP mRNA(0.870±0.005、0.920±0.012)表达水平均明显高于PANC-1组(0.580±0.008、0.530±0.010)和SW1990组(0.390±0.005、0.420±0.003) (P＜0.05);Mcl-1表达水平与MRP呈正相关(r=0.872,P=0.034);透射电镜下PANC-1组和SW1990组胰腺癌细胞线粒体内部结构发生剧烈改变;5.64 mg/L吉西他滨作用12 h后,PANC-1组和SW1990组线粒体膜势能[(45.86±3.38)％、(39.40±2.25)％]明显高于PANC-1/GZ组[(14.52±0.92)％]和SW1990/GZ组[(22.56±2.28)％](P＜0.05);PANC-1/GZ组和SW1990/GZ组细胞Mcl-1和MRP基因敲除后线粒体膜电位[(34.09±1.32)％、(42.06±2.85)％]明显高于基因敲除前[(14.52±0.92)％、(22.56±2.28)％](P＜0.05).结论 胰腺癌耐药细胞株PANC-1/GZ和SW1990/GZ中Mcl-1和MRPmRNA呈高表达,其作用机制与线粒体的凋亡信号通路相关.
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普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其机制研究
目的：探讨普伐他汀（Pravastatin）对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养人胰腺癌细胞SW1990，给予不同浓度（0，5，10，20μmol·L-1）普伐他汀处理，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞凋亡情况及p21Ras、Bcl-2、Bax蛋白表达，RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA水平。结果普伐他汀处理SW1990细胞后，细胞增殖受抑而凋亡增加，p21Ras、Bcl-2的蛋白表达降低而Bax的表达增高，Bcl-2 mRNA水平降低而Bax mRNA水平增高。结论普伐他汀可抑制胰腺癌细胞SW1990增殖并诱导其凋亡，其诱导凋亡机制可能是下调p21Ras、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。
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谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系体外增殖的影响
目的:研究谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系的增殖、凋亡及细胞毒性的影响及其可能的作用机制.方法:在体外用不同浓度的谷氨酸与人SW1990胰腺癌细胞作用后,用MTT比色法、BrdUrd渗入法和LDH法检测SW1990胰腺癌细胞的增殖能力、细胞分裂和死亡情况,并用激光共聚焦显微镜测定胞浆内游离钙离子浓度.结果:谷氨酸可以呈剂量依赖性地促进SW1990胰腺癌细胞的增殖(P<0.01),谷氨酸可以促进胰腺癌肿瘤细胞的分裂,减少其死亡(P<0.01),并且可以呈剂量依赖性地增加胞浆内游离钙离子浓度(P<0.01).结论:谷氨酸可以促进肿瘤细胞的增殖,此作用可能是通过促进细胞的分裂、减少其死亡而实现的,且可能是通过增加胞浆内游离钙离子浓度介导的.
