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滇重楼皂苷对10种肿瘤细胞株的细胞毒谱及构效关系研究
滇重楼Paris polyphylla Snfith vat.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.为百合科重楼属植物的干燥根茎.重楼味苦,性微寒,有小毒,归肝经,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,用于痈疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、惊风抽搐等.已有研究表明,重楼的水、甲醇和乙醇提取物对A549(人肺癌)、MCF-7(人乳腺癌)、HT29(人结肠腺癌)、A498(人肾腺癌)、PACA-2(人胰腺癌)、PC-3(人前列腺癌)等多种人体肿瘤细胞均有抑制作用,甾体皂苷类是其主要活性成分[1].本实验将从滇重楼分离纯化得到的6种皂苷采用MTT检测方法,针对10种不同类型的肿瘤细胞株的细胞毒活性、构效关系进行了比较研究;
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人胰腺癌中miRNA的差异表达及部分功能研究
胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,具有高度侵袭性,它的预后差,患者5年生存率不到5%,因此,对于胰腺癌发病机制及其新的治疗靶点的研究,是众多学者研究的热点.miRNA是由21~25个核苷酸组成的非编码RNA,它作为一种转录后调节分子通过与靶基因的3’-UTR配对,促进mRNA的降解或抑制翻译,从而抑制其靶基因的表达.近年的研究显示,大多数肿瘤都存在miRNA表达谱的改变[1-3],差异表达的miRNA在肿瘤中起到癌基因或肿瘤抑制基因的作用[4-6].胰腺癌同样存在着miRNA表达谱的改变,但关于miRNA与胰腺癌的关系知之尚少,因此研究miRNA在胰腺癌发病机制中的作用具有重要的意义.我们采用miRNA芯片筛查胰腺癌组织与正常胰腺组织中差异表达的miRNA,结果发现了一组在胰腺癌中表达有差异的miRNA,其中上调的miRNA有18个,下调的有14个.根据我们芯片筛查的结果并结合文献报道,我们选择了在胰腺癌中表达显著下调的miR-96、miR-217和表达明显上调的miR-27a进行了功能研究,并分析了它们在胰腺癌的发生、发展过程中可能发挥的作用.
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乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导凋亡
目的:观察乏氧和缺血是否通过诱导自噬拮抗肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82(KAI1)的生长抑制作用。方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2,通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1使细胞表达KAI1蛋白,通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境,根据培养条件不同,将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组:对照组(正常培养)、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。Western blot检测细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的改变。3-MA预处理阻断自噬,共聚焦显微镜观察自噬标志颗粒GFP-LC3颗粒。采用Annexin V-FITC/PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。结果 MiaPaCa2细胞不表达KAI1蛋白,感染Ad5-KAI1后表达KAI1蛋白,乏氧和去血清均显著促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加和GFP-LC3融合质粒的增加,且均可被3-MA有效阻断。3-MA 预处理后感染Ad5-KAI1,4组细胞(含氧含血清正常培养的细胞、单纯去血清培养的细胞、单纯乏氧培养的细胞、联合去血清和乏氧培养的细胞)的Annexin V表达均显著增长,分别由70%、34%、28%和19%增至86%~90%。提示3-MA预处理可以阻断去血清和乏氧对KAI1引起的Annexin V表达增加的抑制作用。提示乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡。结论乏氧和缺血清培养细胞通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡,促进细胞生存。
关键词: 肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82(KAI1) 人胰腺癌 乏氧 去血清 自噬 -
乏氧、去血清抑制KAI1的生长抑制功能
目的:观察乏氧和缺血是否影响KAI1的生长抑制作用。方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2,通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1,使细胞表达KAI1蛋白,通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境,根据培养条件不同,将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组:对照组(正常培养)、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。用CCK8和Annexin V-FITC/ PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。结果乏氧和去血清培养细胞明显拮抗KAI1的增殖抑制和诱导凋亡作用,进而促进细胞的生存。结论乏氧和去血清拮抗KAI1的生长抑制作用。
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ZD7155对人胰腺癌抑制作用的体内研究
目的近的研究表明,血管紧张素Ⅱ1型受体在胰腺癌组织和细胞中存在高表达,本研究观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂对人胰腺癌细胞系裸鼠移植瘤模型的肿瘤抑制作用.
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血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂对人胰腺癌抑制作用的实验研究
目的血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对肿瘤的作用正日益受到关注,AngⅡ能促进肿瘤细胞增殖、肿瘤血管形成并抑制肿瘤细胞分化.
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老年人胰腺癌外科治疗178例分析
回顾性分析我院1993年1月至2003年1月间外科治疗的178例老年胰腺癌患者的临床资料,以探讨老年人胰腺癌的临床特点和外科治疗.
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抑制MMP-2表达对人胰腺癌细胞黏附和侵袭作用的影响及其机制探讨
胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制非常复杂,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)能够降解细胞外基质,与癌细胞分泌的血管生成及淋巴趋化因子一起参与浸润癌特异性的组织重塑和基底膜降解过程.本研究设计和构建带有U6启动子的MMP-2基因特异性的小干扰RNA表达质粒,将构建好的质粒转染入人胰腺癌Bxpc-3细胞株中,观察转染后癌细胞MMP-2及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA水平的变化及癌细胞本身迁移能力的变化,旨在探讨靶向MMP-2的RNA干扰抑制人胰腺癌细胞黏附和侵袭的作用及其机制.
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人源性Notch1跨膜段真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建人源性Notch1跨膜段(notch1 transmembrane domain,NTM)真核表达载体pcDNA3-NTM,并观察其在真核细胞中的表达.方法 通过反转录-聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系BxPC3细胞中获得编码Notch1跨膜段的cDNA,定向克隆至C端带flag蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内Notch1跨膜区的表达.结果 构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,将其转染HeLa细胞48 h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Notch1跨膜段的表达显著增高.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,为研究Notch信号的活化机制及其在胰腺癌发生发展中的作用奠定了基础.
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microRNA-372靶向SDC1抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭
目的 探讨microRNA-372(miR-372)靶向调控SDC1基因表达抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭的机制研究.方法 收集人胰腺癌及癌旁组织手术标本;qRT-PCR和免疫组化法检测组织中miR-372和SDC1表达;筛选miR-372表达水平高的人胰腺癌细胞系进行分组和转染,实验分成6组,即空白对照组、阴性对照组、miR-372 mimic组、miR-372 inhibitor组、siRNA-SDC1组和miR-372 inhibitor+ siRNA-SDC1组;双荧光素酶报告基因试验验证miR-372和SDC1基因的靶向关系;CCK8法、流式细胞术、划痕试验及Transwell试验分别检测各组细胞转染后增殖能力、凋亡情况、迁移及侵袭能力;qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞转染后SDC1和上皮细胞标志物E-cadherin及间质表型细胞标志物Vimentin的表达水平.结果 SDC1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.05).胰腺癌中miR-372、SDC1表达与肿瘤分化程度、转移和TNM分期显著相关(P<0.05).双荧光素酶报告基因试验结果显示SDC1是miR-372的靶基因.与空白对照组和阴性对照组比较,miR-372 mimic组和siRNA-SDC1组细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制,凋亡率增加,SDC1和Vimentin的表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(P均<0.05);而miR-372 inhibitor组的趋势与miR-372 mimic组和siRNA-SDC1相反(P均<0.05);然而,miR-372 inhibitor+ siRNA-SDC1组与空白对照组和阴性对照组比较,各项指标差异均无统计学意义.结论 miR-372可能通过靶向抑制SDC1基因表达,抑制人胰腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化.
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鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究
目的:初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性,为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠,共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组,每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液(10 mL/kg,NS,Biw,ip ×8),阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择(50 mg/kg,qw,ip ×4),鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,ip ×8)共4周或(2 mg/kg,Biw,ip ×8)共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠(10 mg/kg,Biw,iv ×8)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏,有大量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞明显坏死,细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,iv ×8)能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长,使瘤组织坏死、结构破坏。
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大蒜素对人胰腺癌PANC-1细胞株的作用及机制的研究
大蒜素是新鲜大蒜中主要生物活性成分的总称,其中主要成分为二烯丙基三硫化物(DADS).大蒜除有健胃助消化的功能,还有抗真菌、抗细菌、降血脂、降血压、抑制血小板聚集和防止动脉粥样硬化等作用.近年来,大蒜的抗肿瘤活性受到越来越多的关注,本实验采用细胞增殖试验和流式细胞术观察大蒜素对胰腺癌细胞的效应并探讨其可能机制.
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老年人胰腺癌围手术期护理
胰腺癌的发病率在不断上升,但是疗效却不甚理想,有报道胰腺癌的手术死亡率高达 10% [1],在 60岁及以上老年病人中,胰腺癌的围手术期护理工作复杂,要求高.总结我院近 2年施行的 36例胰腺癌手术的护理体会,供大家参考.
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骨桥蛋白及相关肿瘤基因表达与胰腺癌临床病理特征的关系
胰腺癌极易发生浸润、转移,预后极差,5年存活率小于5%[1].骨桥蛋白(OPN)、CD44v6、基质金属蛋白酶(MMP)-2、血管内皮生长因子(VEGF)与肿瘤的侵袭转移密切相关.我们用免疫组化法检测人胰腺癌中OPN、CD44v6、MMP-2、VEGF的表达状况,探讨它们与胰腺癌临床病理特征的关系,为寻找胰腺癌转移标志物提供线索.
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外源野生型p53正向细胞凋亡调控因子基因对人胰腺癌PC-3细胞生长的作用
p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)是新近发现的Bcl-2家族BH 3亚家族中的成员,是p53的靶基因,可被内外源性p53快速诱导,具有强大的促凋亡作用[1,2].研究发现,PUMA基因在许多肿瘤细胞系中低或不表达,转染外源性PUMA基因后,细胞凋亡被促进,动物移植瘤的生长明显受到抑制.在前期的工作中,我们检测了胰腺癌组织中PUMA表达情况发现,PUMA在肿瘤组织中的阳性表达明显低于瘤旁组织,并且肿瘤组织中细胞凋亡指数低于对照组,说明PUMA低表达引起的细胞凋亡抑制在胰腺癌的发生中起重要作用.本试验旨在观察PUMA基因转染抑制体外胰腺癌细胞的生长的效果.
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小干扰RNA沉默人胰腺癌细胞内连锁凋亡抑制因子基因表达的研究
X连锁凋亡抑制因子(X-1inked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中有效的caspases抑制剂,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡,因而在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用.研究表明,多种肿瘤细胞中XIAP呈高表达,抑制XIAP基因表达可诱导肿瘤细胞凋亡,进而抑制肿瘤生长[1,2].本研究应用近年来开展的RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),设计并合成针对XIAP编码基因的小干扰RNA(siRNA),于胰腺癌细胞BxPC-3中,观察siRNA能否产生肿瘤细胞内源性XIAP表达的转录后沉默,为胰腺癌基因沉寂疗法提供实验依据.
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人胰腺癌相关蛋白质的差异表达研究
胰腺癌5年存活率不超过5%,蛋白质组学(proteomics)的出现为寻找一种特异性高、敏感性强的胰腺癌肿瘤标志物带来了希望.蛋白质组学技术改变传统的分割式研究单个蛋白质的模式,建立全面、立体、快速的分析方法,以透视全体基因在特定细胞或组织的表达.本研究针对人正常胰腺、胰腺癌、胰腺癌旁组织,利用双向凝胶电泳(2-DE)技术以及质谱技术和生物信息学,分析胰腺组织不同生理状态下蛋白质的差异表达,旨在寻找胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物,为早期诊断奠定基础.
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SSTR亚型调变与188Re-SSA抑瘤效应相关性研究
研究小细胞肺癌的治疗学基础,探索其生长抑素受体(简称SSTR)介导的放射性核素标记的特异配体靶向治疗方案具有重要意义,下面叙述有关研究现状.1.肿瘤生长抑素受体亚型表达的研究现状.20世纪80年代前后各国学者对促生长素抑制素(简称生长抑素,SST)的多种生理、药理作用进行了深入研究,并着重研究了SST及其类似物(简称SSA)的抑瘤效应,而SST或SSA作用的实现均是通过靶细胞膜上高特异性的SSTR介导的.1992~1995年间SSTR的5种亚型(简称SSTR1~5)先后克隆成功,组成结构和功能各异的SSTR家族(SSTRs)[1].近年研究表明胺前体摄取与脱羧瘤(简称APUD瘤)及其转移灶均有SSTRs的表达,其表达密度显著超过肿瘤周围的SST靶组织,故采用SSTR1~5亚型作探针的原位杂交法可检测各类肿瘤SSTR1~5的表达模式.初步研究表明人体各类各型肿瘤表达SSTR亚型的模式各不相同[2],多数APUD瘤以表达SSTR2和(或)SSTR1为主,具有APUD瘤某些特征的小细胞肺癌(简称SCLC)也以SSTR2的表达占优势[3].文献报道SSA的抑瘤效应主要由SSTR2介导[3].近年发现人胰腺癌失去表达SSTR2的能力,若通过基因转移将SSTR2再导入该癌细胞内,即可在实验模型上获得
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人胰腺癌p16蛋白的表达及意义
p16基因是抑癌基因,其表达的p16蛋白是调节细胞周期的主要成分,我们用免疫组织化学技术,对35例原发性胰腺癌的p16蛋白表达进行研究,探讨其在胰腺癌发生、病理学特征及临床分期的关系.
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灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖抑制的实验研究
目的:观察从生物工程技术得到的灵菌红素对人胰腺癌8898细胞增殖抑制的药效学作用,并探讨其作用的部分机理.方法:用MTT法测定8898细胞的存活率和抑制率,用流式细胞仪分析细胞的周期变化和凋亡细胞的百分比,用HPLC检测人胰腺癌8898细胞内灵菌红素的浓度,用琼脂糖凝胶电泳对DNA段片化进行分析.结果:灵菌红素 5 mg·L-1的培养液中8898细胞出现凋亡早期的形态学特征,半数抑制浓度(IC50)为 30 mg·L-1.而3T3细胞却未显示出该作用.研究表明灵菌红素抑制细胞的增殖,与抑制S期细胞的DNA复制及调控细胞的增殖周期相关.同时,细胞凋亡的产生与实验药物呈正相关.HPLC结果显示,灵菌红素的药理学作用与细胞内药物浓度相关.结论:灵菌红素能有效的进入细胞内,抑制细胞的增殖,其机理与诱导细胞凋亡和调控细胞的增殖周期相关.