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建立稳定抑制死亡相关蛋白激酶表达的细胞系
目的 筛选稳定抑制DAPK表达的PC12细胞系,并观察这些细胞系的生长特性.方法 设计、合成4条RNA干扰序列,连接到pDsRed1-N1-U6质粒载体上,扩增后提取质粒转染到PC12细胞,并同时转染1株空载质粒作为对照,然后通过G418筛选细胞克隆,建立稳定增殖细胞系,再通过Western blot筛选为有效的干扰序列,后用MTT、流式细胞术等检测转染细胞系的生长特性.结果 4条干扰序列均已成功转染并筛选出单克隆细胞系,Westem blot实验结果证实,4条干扰序列中有3条对DAPK的表达有明显的抑制作用,其中以第2条干扰序列的抑制效果为明显.结论 成功建立稳定增殖和抑制DAPK表达的细胞系.
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干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖
目前研究表明,CyclinD1、CDK4参与细胞周期G1/S期的转换,在多种恶性肿痛中存在CyclinD1、CDK4表达增加,并且 CyclinD1、CDK4的表达水平与肿瘤的恶性程度成正相关[1].鉴于RNA干扰技术可以明显地抑制靶基因的表达,同时CyclinD1和CDK4在细胞周期调控中的重要作用,本研究选择以CyclinD1、CDK4为靶点进行了RNA干扰,观察其对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用.
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RNA干扰技术治疗恶性肿瘤的靶点选择和靶向导入
一、RNA干扰技术的简介RNA干扰(siRNA)是指小分子双链RNA抑制同源序列的基因表达的现象,是生物进化过程中保留下来的机制.
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问:RNA干扰技术研究基因功能时,应注意哪些问题?
关键词: 干扰技术 -
RNA干扰技术与消化系肿瘤的基因治疗
将靶基因序列同源的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)导入细胞可以抑制某些基因的表达,即RNA干扰(RNA interference,RNAi).RNAi是机体中普遍存在的机制,起到负责基因的表达和调控的作用.由于RNAi能够高效特异地抑制基因表达,RNAi技术在研究基因功能、遗传规律、信号转导机制等多个领域迅速展开.作为一项崭新的技术,RNAi在肿瘤的基因治疗方面具有非常广阔的前景.本文就近年来RNAi技术在消化系肿瘤的基因治疗中的运用作一综述.
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应用核糖核酸干扰技术抑制环氧合酶2的表达
环氧合酶(COX)是前列腺素(PG)生物合成的限速酶.COX有两种异构体,COX-1与生理性PG合成有关;COX-2生理状态下呈低水平表达,多种炎性细胞因子刺激后诱导其表达增高,产生PG,参与气道的炎症反应[1].
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基因治疗靶向方法的研究进展
靶向基因治疗是指将目的基因通过载体系统导入机体,并特异性地在靶组织细胞中以可调控的方式表达,达到治疗疾病的作用而不影响其他正常细胞、组织或器官的功能.自1990年第1例基因治疗应用以来,基因治疗技术已在遗传、代谢病和肿瘤等领域取得了较快的研究进展.但迄今为止,基因治疗的安全性和有效性仍是有待突破的"瓶颈".其中,基因治疗的靶向性是安全有效地进行基因治疗的技术关键和研究热点.目前应用于基因治疗的靶向方法主要有:基因的靶向转移、靶向表达、原位修复和RNA干扰技术定点整合等.为此,现就有关问题进行综述.
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siRNA介导的血管内皮生长因子基因沉默对膀胱癌T24细胞增殖的影响
我们应用RNA干扰技术,以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点,对人膀胱癌T24细胞进行研究,初步探讨VEGF特异性小干扰RNA(siRNA)作为膀胱癌基因治疗手段的可能.现报告如下.
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应用RNA干扰技术沉默STAT3基因对裸鼠种植入乳腺癌的影响
本研究通过应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默转录信号传导子与激活子3基因(signal transducers and activaters of transcription 3,STAT3),研究其对人乳腺癌裸鼠移植模型中肿瘤细胞生长的影响.
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RNA干扰技术在普通外科的应用及发展前景
分子医学理论的延伸和实验技术的创新极大地促进了外科学的发展,外科学界普遍认为外科手段辅以基因表达干预是治疗复杂性外科疾患的理想方案.RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术正是作为一种有效的基因表达干预手段在生物学及基础医学中脱颖而出,
杂志将其列为2002年度科技突破之首,肯定了其用于基因治疗的有效性,由此推动了RNAi技术向普通外科的渗透.目前,科研人员已经将RNAi技术应用于抗病毒、抗肿瘤、器官移植方面研究,取得了可喜的成果,现综述如下. -
RNA干扰技术沉默survivin基因对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3生物学行为的影响
survivin基因是凋亡抑制蛋白家族(IAP)成员之一,具有肿瘤组织表达特异性,与肿瘤化疗耐药相关,已有研究证明,survivin基因在卵巢肿瘤组织高表达,与肿瘤的恶性程度及预后密切相关[1].RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中.
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RNA干扰技术抑制TM4SF9基因的表达对绒毛膜癌细胞生物学行为的影响
绒毛膜癌(绒癌)是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤,恶性程度高,其危害主要在于转移发生早且广泛[1],如能早期提供有效、客观判断滋养细胞侵袭力的指标或标志物,则对临床工作有重大的指导意义.
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应用RNA干扰技术研究survivin基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的调节作用
survivin基因是近年来发现的在大多数肿瘤组织中高表达的基因,具有调控细胞周期和细胞凋亡的双重作用,与肿瘤的发生密切相关,抑制其功能将有助于肿瘤的治疗[1].RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA在转录后水平特异性地抑制基因表达的一项技术,是研究基因功能和基因治疗的有力工具[2].本研究应用RNAi技术,将自行设计和构建包含有针对survivin基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA)的重组质粒转染入子宫内膜癌细胞,以观察阻断survivin基因表达对细胞增殖和细胞周期的影响.
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短发夹状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇敏感性的研究
RNA干扰(RNAi)技术是运用双链RNA引发的转录后水平基因沉默机制[1],特异性抑制靶基因转录,进而下调相应蛋白表达水平及功能.新近的RNAi技术,是利用DNA载体直接在体内表达短发夹状RNA(shRNA),特异性封闭相应的靶基因mRNA,抑制mRNA的翻译.与早期的RNA干扰技术相比,该方法的特异性和干扰效率均有较大提高,已广泛应用于多种研究领域.利用RANi技术特异地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,使这些基因保持在沉默或休眠状态,从而使肿瘤细胞增殖速度减慢,凋亡加快,显示了RNAi技术用于肿瘤基因治疗的可行性和有效性.
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癌症靶向治疗的新进展
癌症治疗,关键在于"靶向".癌症本身就是"靶标",各种生物治疗方法必须遵循"有的放矢",高效、准确地命中癌靶标,在杀伤癌细胞的同时基本上不或很少损伤正常组织细胞.实现癌症靶向治疗的方法主要有靶向基因--病毒治疗、抗体治疗、RNA干扰技术、肿瘤干细胞、小分子靶向药物和纳米技术等.
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RNA干扰技术失活Rad51基因增加肿瘤细胞放射敏感性的研究
目的 研究RNA干扰技术(RNAi)能否失活Rad51基因,从而使肿瘤细胞的放射敏感性增加.方法 应用Psilencer U6-1.0质粒为载体在人纤维肉瘤HT1080细胞内表达短链干扰RNA(siRNA).RNAi效应在蛋白水平用Western blot方法评价;在细胞水平用成克隆分析及放射诱导的凋亡来评价.结果 所选3个靶序列均起到失活Rad51的作用,放射诱导的Rad51高表达也能被RNAi抑制.成克隆分析表明实验组存活分数在照射2、4、6、8 Gy后,分别是对照组的80.5%、78.6%、69.0%、57.7%(P=0.020);实验组放射诱导的凋亡在放射后0、6、18、24、48 h分别是对照组的1.03、1.43、1.19、1.29、1.33倍(P=0.017).结论 RNAi技术能够使内源性Rad51基因及放射诱导的Rad51高表达失活,从而使人纤维肉瘤HT1080细胞放射敏感性增加;RNAi技术是一种新的研究基因功能和放射增敏的方法.
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RNA干扰技术可有选择地使致病基因“沉默"等
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RNA干扰技术及其在胰腺癌研究中的应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指一些小的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)通过特异性降解与其同源的RNA而高效地阻断体内特定基因表达的现象.到目前为止,RNAi现象已经被发现广泛存在于植物、线虫、果蝇、哺乳动物等多种生物体细胞中,使这些生物能够抵御病毒的感染、阻断转座子的作用等.
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基于RNAi的肿瘤基因治疗研究
·RNA干扰技术与应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的"基因沉默".
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siRNA技术抑制流感病毒的应用新研究进展
流感的流行长期以来给世界人民的身心健康、生命安全和财产等都带来了严重的威胁和巨大的损失,而流感病毒表面抗原容易变异的特性导致使用疫苗预防流感效果欠佳,目前应用的抗流感药物不良反应较大,易产生抗药性.近年来,RNA 干扰技术在抗病毒感染方面显示出广阔的前景.合适的siRNA 片段对于抑制流感病毒的复制有巨大的潜能,虽然RNA 干扰技术还存在如特异性和组织分布性等关键性问题使之尚未用作临床治疗流感的方法,但其对于抑制呼吸道病毒感染其中包括抑制流感病毒的感染确实具有巨大潜能.