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转基因水稻中标记基因hpt表达行为的研究
目的探讨转sck基因水稻中标记基因hpt的表达行为.方法对经潮霉素抗性筛选的转基因水稻4个生长发育时期、不同组织的hpt基因进行PCR检测;提取4个生长发育时期PCR检测阳性植株的叶片总RNA,以hpt基因片断为探针进行Northern blot分析,并对不同生长时期的叶片和成熟期的茎部、根部、种子进行双夹心ELISA检测,以同种非转基因水稻M86相应时期的相应部位作阴性对照.结果转基因水稻不同生长时期、不同组织中均能扩出特异的hpt(832bp)片段;Northern blot结果显示,在4个生长发育时期的hpt基因在转录水平均有表达,但是表达水平较低,且不同生长发育时期之间无明显差别;ELISA检测结果显示HPT蛋白在4个生长时期的叶片和成熟期的茎部和根部均有表达,种子中HPT蛋白的含量不超过负对照,不能被检测.结论不同生长发育时期的叶片中hpt基因在转录水平和翻译水平表达均能稳定表达.成熟的种子中不舍有可检测水平的HPT蛋白.
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特异性嵌合抗原受体的T细胞肿瘤免疫治疗相关专利申请状况分析与研发进展
1989年,Eshhar研究小组首次提出将针对肿瘤抗原单克隆抗体的可变区和T细胞受体(T cell receptor,TCR)的亚基融为一体,重定向T细胞的免疫反应.表达特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的T细胞以抗原依赖、非MHC限制的方式结合肿瘤抗原,启动并活化下游级联反应,特异性杀伤肿瘤[1].这一尝试开启了嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T immunotherapy)的序幕.该疗法的一般程序是将患者的免疫T细胞在体外通过生物技术改造,采用B细胞的抗体基因和T细胞表面受体基因结合,用载体导入患者的免疫T细胞,从而使T细胞具有靶向性,令其识别肿瘤细胞表面的抗原,然后把T细胞输回给患者,达到识别、杀死肿瘤细胞的治疗效果.
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RNA干扰技术沉默survivin基因对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3生物学行为的影响
survivin基因是凋亡抑制蛋白家族(IAP)成员之一,具有肿瘤组织表达特异性,与肿瘤化疗耐药相关,已有研究证明,survivin基因在卵巢肿瘤组织高表达,与肿瘤的恶性程度及预后密切相关[1].RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中.
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survivin基因表达与妇科肿瘤关系的研究进展
凋亡抑制基因survivin发现于1997年,是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中相对分子质量小的成员,与效应细胞蛋白酶受体1(EPR-1)关系密切,其结构独特,组织分布有明显的特征性.在100多种肿瘤特异性表达基因中,其表达特异性居第三,是肿瘤发生、发展中的枢纽基因,并与肿瘤放、化疗中的耐药密切相关.本文着重综述survivin基因的表达与妇科肿瘤关系的研究进展.
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淋巴管标志物和胃癌新生淋巴管
淋巴管标志物淋巴管系统是循环系统的辅助组成部分,在维持体液平衡、新陈代谢、免疫反应以及肿瘤转移方面具有重要的功能.淋巴管和血管的区分有赖于特异性的标志物.理想的淋巴管标志物应具备以下特点:①在淋巴管内皮细胞特异性地表达(阳性标志物)或不表达(阴性标志物),而不是依赖于其在淋巴管和血管的表达量差异;②表达或不表达于各级淋巴管内皮细胞;③表达特异性在病理状态下不会发生改变;④在组织学水平易于检测,且在标本处理过程中较为稳定;⑤利用该标志物在电镜水平也能可靠地将两种脉管加以区分.迄今为止,完全符合以上标准的淋巴管标志物尚未发现,但一些相对特异性的标志物已广泛应用于淋巴管生物学及淋巴管肿瘤学的研究中,目前发现的淋巴管标志物主要有以下几种:
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miRNA与听觉系统发育研究进展
Micro RNA( miRNA)是由基因编码的一类长度22~25个核苷酸的内源性单链非编码小分子RNA,在生物进化过程中高度保守,具有时空表达特异性、细胞和组织特异性,通过与靶mRNA的3’端非翻译区特异性结合,在转录后水平对靶mRNA进行降解或抑制[1-2],影响基因转录和mRNA的稳定性,调控遗传信息的表达.因此,转录后抑制是miRNA的主要作用模式.
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血管内皮炎症与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是由于不同血管床发生局灶性复合病变而引起的一种慢性、全身性、弥漫性[1]复杂的炎症性过程.早期AS是由于多种相关刺激包括氧化的脂质、细胞因子或血流涡流引起血管内皮的激活.活化的内皮表达特异性的黏附受体及细胞因子,从而促进白细胞向血管壁聚焦,这同时也成为加速血块形成的因素[2].
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凋亡相关基因PNAS-2 siRNA质粒表达载体的构建、鉴定及转染后筛选方法的选择
硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2(apoptosis-related protein)表达显著降低[1,2].Busch等[3]认为PANS-2基因与细胞增殖有关.我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者白血病细胞及NB4细胞PNAS-2基因表达特异性下调,且呈时间依赖性而K562和U937细胞则无此较应[4].为了进一步研究封闭该基因后对细胞凋亡的影响,我们扩增其5'端未知序列,构建了PNAS-2 siRNA质粒表达载体并转染U937细胞,筛选、纯化转染细胞后检测U937细胞凋亡的变化以初步了解PNAS-2的作用.
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扁桃体切除术治疗银屑病的研究进展
银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,遗传因素和环境因素在其发病过程中起重要作用。相比较正常个体,银屑病患者更易引发咽喉疼痛,已有研究充分证明链球菌感染可以引起点滴状银屑病发病,特别对于儿童及青少年,其也可引起脓疱型银屑病或加重斑块型银屑病。现在研究认为银屑病皮肤损伤是由皮肤特异性T淋巴细胞的异常反应造成的,得出链球菌等细菌超抗原能选择性激活表达特异性T细胞受体VT细胞,使之增殖,终诱导细胞因子释放引起银屑病。本文探讨扁桃体感染与银屑病之间的可能联系机制,同时论述扁桃体切除术治疗银屑病的适用性。
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细胞移植示踪技术的研究进展
细胞移植替代疗法已成为现代医学中发展为迅速的领域之一,移植细胞在宿主体内的存活、增殖、迁移和分布也自然受到人们的极大关注.目前移植细胞的示踪方法可归纳为5类:(1)利用荧光染料标记细胞,如Hoechst33342/33258、DAPI、PKH26和DiI等;(2)改变细胞基因,使其表达特异性的标志物,如绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶等;(3)选用雄性供体和雌性宿主,利用Y染色体作为标志物;(4)用5-溴脱氧尿苷等胸腺嘧啶类似物来标记分裂细胞;(5)采用超顺磁氧化铁作为磁共振对比剂活体示踪移植细胞.近年来,上述细胞标记技术均有很大进展,特别是荧光染料、转基因标记、磁共振示踪三方面进展为迅速.
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心血管疾病相关 microRNA 的研究进展
MicroRNA( miRNA)是一类内源性的、长度约为20~24个核苷酸的非编码单链RNA,由发夹结构的单链RNA前体(约70~90个碱基大小)经过Dicer酶加工后生成。主要通过与靶mRNA的3′端非翻译序列结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制,从而调控靶基因的表达。据推测,miR-NA调节着人类三分之一的基因,由于miRNA存在的广泛性和多样性,提示miRNA可能有非常广泛多样的生物学功能, miRNA调节人体多种生理病理活动,如生长发育、细胞增殖和凋亡分化等。 miRNA与心血管疾病密切相关,心肌及相关组织中的miRNA参与心血管疾病的多种病理过程。 miR-NA是多细胞生物中众多基因调控分子中的一种,越来越多的miRNA及其功能被发现,使得miRNA指导基因调控的重要性备受关注[1]。1993年,由Lee等研究人员利用遗传分析的方法在秀丽新小杆线虫( C.elegans)中发现了能时序调控胚胎后期发育的lin-4,lin-4不编码蛋白质,而是编码一种小片段的RNA。然而,当时并未引起研究者太大的注意,因为没有发现其他类似于lin-4的基因,也没有发现类似的不编码蛋白的RNA。直到7年之后,Reinhart等在2000年发现了另一个非编码RNA-let-7,它在调控线虫由幼虫L3期向成虫发育的过程中起重要的调控作用。随后的一年里,随着生物基因学的迅速发展,许多科研人员又相继在线虫、果蝇、斑马鱼和水稻等真核生物和细胞中找到这类的小分子RNA,并将这些具有时空表达特异性的非编码小分子RNA命名为miRNA。至此, miRNA迅速成为生命科学界研究的焦点,对其形成、作用机制和功能的研究很快全面开展起来。
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癌/睾丸抗原基因研究进展
癌/睾丸抗原(Cancer/Testis Antigen,CTA)基因在正常睾丸组织的生殖细胞和多种不同组织类型的癌细胞中特异表达,在其它正常组织不表达或表达水平较低,并且在癌症患者中有抗原性免疫反应,认为是一类理想的肿瘤疫苗靶分子.现已发现90个癌/睾丸抗原基因,分属于45个基因家族.本文综述了CTA基因的特性及其应用基础研究进展.