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FCM检测标记细胞凋亡方法的建立及应用
采用流式细胞仪(FCM)测定BXSB狼疮鼠发病组、正常对照组和中药治疗组的脾脏组织中CD4+、CD19+细胞凋亡的水平,结果显示,BXSB狼疮鼠发病组CD4+、CD19+细胞凋亡水平显著高于正常对照组和中药治疗组(P<0.05).此法需样本量少,操作简便,结果可靠,可在临床及科研中推广使用.
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量子点:新的荧光标记物质
随着人类基因组计划的完成,细胞蛋白组学、细胞图谱蛋白组学要求对细胞亚区、亚结构的蛋白组成及其相互作用网络进行动力学分析,而荧光图像技术是进行这一研究的重要手段.有机荧光染料易于淬灭,瞬时即逝,无法对标记细胞进行长期的追踪及观察标记分子的动力学过程.荧光蛋白标记可以克服上述困难,但需使用基因工程技术制备可表达融合蛋白的质粒,进行细胞培养、基因转染等一系列操作,非一般实验室所能完成,而且,如要同时标记细胞中的不同蛋白则需构建多种含不同特性荧光蛋白的融合质粒,更增加了实验难度.近出现的纳米晶体(nanocrystals)即半导体微粒--量子点(quantum dots)标记技术,以其独特的优点引起人们极大注意.
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脊髓损伤常用药物对神经干细胞增殖影响的试验研究
脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)严重影响人类健康和生存质量,是人类急需解决的医学难题之一[1]。对于脊髓损伤的治疗,除手术之外,多应用激素,神经节苷酯,促红细胞生成素等西药治疗。我国中药有近2000年的历史,资源丰富,在这些中药中可能有大量的能够促进干细胞增殖、分化的药物[2]。黄芪、红花均是具有活血化淤,通脉养心、抗凝、扩血管、改善微循环、抗氧化等功效的中药,二者也被应用于治疗脊髓损伤。本试验旨在研究常用西药促红细胞生成素(EPO),神经节苷酯(GM-1)及常用中药黄芪,红花对脊髓源性神经干细胞增殖的影响,为脊髓损伤的药物治疗提供参考。的特有标志物Nestin,在荧光显微镜下,标记细胞为圆形,显明亮的橙红色荧光。同时表达BrdU,在荧光显微镜下,标记细胞为圆形,显明亮的绿荧光。荧光合成图像可见2种荧光同时表达。
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活体染料羧基荧光素乙酰乙酸标记视网膜色素上皮细胞的体外研究
视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPECs)的退化导致视网膜感觉层的继发性改变,甚至产生视力丧失.RPECs的移植治疗仍是临床和研究的热点[1].其中,移植细胞的标记始终是移植研究的一个难题[2].活体染料羧基荧光素乙酰乙酸[5-(and-6)-carboxyfluresceindiacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE]初是用于研究淋巴细胞增殖[3],具有染色好、阳性率高、观察结果直观可靠、并可长期追踪标记细胞等优点,现已被应用于标记血细胞,并成功的用于移植细胞的定位及标记[4,5].我们首次将此染料用于标记RPECs,深入探究此标记方法的可行性及优点,为今后RPECs移植研究开辟了广阔的前景.
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超顺磁氧化铁标记神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠模型的研究
多潜能的神经干细胞(NSC)已经成为修复中枢神经系统损伤的细胞替代物,为神经系统疾病的治疗提供了一种新的途径[1].虽然已有大量的动物实验证实NSC移植能够有效地治疗帕金森病[2,3],但临床应用存在许多问题[4].目前仍缺乏有效的监测手段在体观察NSC移植后的情况.而在多种成像方式中,磁共振能同时提供近细胞级(约25~50 μm)分辨率的影像,通过示踪移植磁化标记细胞可以了解其在宿主活体内的分布[5].我们利用超顺磁氧化铁(SPIO)标记NSC,对帕金森病大鼠进行脑内移植治疗,应用磁共振成像观察移植后NSC的分布和迁徙情况.
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酶标细胞在新生儿溶血病检测中的应用
新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病(简称H D N)。新生儿溶血病起源于胎儿从父亲方面继承了一些母亲没有的红细胞抗原,这些抗原可能遭受母亲免疫抗体的攻击,从而使胎儿红细胞遭到破坏,出现新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大,甚至胎儿、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症[1]。我实验室在微柱凝胶卡检测中,运用了酶标记细胞,经比较使该试验的灵敏度得以提高,现报告如下。
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侵袭性非霍奇金淋巴瘤治疗的进展
侵袭性非霍奇金淋巴瘤(Aggressive NonHodgkin's Lymphomas)常见为弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤非特指型、间变性大细胞淋巴瘤(T细胞/无标记细胞)原发系统型及原发皮肤型、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤、肠病型肠T细胞淋巴瘤、肝脾γδ T细胞淋巴瘤和皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤等.
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神经元识别标签或帮助阐明大脑神经回路
人类的大脑是由神经元的复杂回路组成的,而神经元是一类可以通过电化学信号来传递信息的细胞,类似于电脑的网络一样,神经元回路必须以特殊的方式互相连接才能够正常发挥作用,但在人类大脑中数以亿万计的神经元如何进行连接呢?而且神经元如何同正确的细胞进行连接?长期以来科学家们不断搜寻可以标记细胞形成连接的标签识别。
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超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗兔急性胰腺炎的磁共振活体示踪
重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是由各种原因引起胰酶被激活,导致胰腺组织自身消化、水肿、出血和坏死的炎症反应,常继发感染性腹膜炎、休克、全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征等严重并发症,预后极差[1].目前的治疗措施主要是对症治疗、支持治疗、预防胰腺感染和坏死,疗效仍不佳.近年来,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植治疗急性胰腺炎的实验研究[2]认为MSCs可分化为有功能的胰腺干细胞,对损伤的胰腺进行修复,为治疗重症SAP提供了一种薪的思路和手段,而细胞移植后在活体内示踪成为随之而来的研究难点.近年来,随着超顺磁性氧化铁(SPIO)纳米颗粒标记细胞技术的成熟,磁共振成像(MRI)活体示踪SPIO标记细胞成为新的研究热点[3].本实验拟采用SHO标记兔MSCs并移植入SAP模型兔行MRI扫描,探讨干细胞移植治疗SAP过程中,MRI活体示踪移植干细胞的可行性.
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羰化青类荧光剂在神经示踪中的应用进展
逆行示踪是神经解剖学和神经生物学研究领域的常用方法之一,常用的示踪剂还有HRP、WGA-HRP、CTB、EB等,其中DiI细胞毒性小,不影响被标记细胞的存活、生长和发育;在组织的液相中不扩散,能特异性的标记神经元的胞体和突起,可沿神经纤维进行顺行和逆行扩散;结合状态稳定,能获得持久的染色效果;对神经元没有显著的毒性作用.因此,DiI越来越多地应用于神经科学研究领域[1].
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异种神经移植后再生神经纤维的HRP逆行运输
成年青紫蓝兔一侧胫神经于窝上部切除5 mm,移植入8 mm长,经反复冰冻、融解5次的成年狗胫神经,将兔胫神经的近、远断端与植入的狗神经缝合。术后2、3、4、5、6周,将HRP注入距远端吻合部15 mm处的远段胫神经,动物存活4 d。于神经移植术后4、5、6周,在兔的L7、S1,2脊髓前角观察到HRP标记细胞。标记细胞为多极形、梭形;L7、S1,2脊神经节也观察到大、中、小型标记细胞。标记细胞数量随着神经移植术后存活期的延长而增加。术后2、3周兔的脊髓前角和脊神经节未见标记细胞。表明宿主的再生神经纤维能通过异种神经而长入远端;再生后的神经纤维已恢复了轴浆流;HRP能被逆行运输至神经元胞体;脊髓前角和脊神经节分别出现标记细胞,说明再生神经纤维中运动纤维和感觉纤维兼有之。
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细胞移植示踪技术的研究进展
细胞移植替代疗法已成为现代医学中发展为迅速的领域之一,移植细胞在宿主体内的存活、增殖、迁移和分布也自然受到人们的极大关注.目前移植细胞的示踪方法可归纳为5类:(1)利用荧光染料标记细胞,如Hoechst33342/33258、DAPI、PKH26和DiI等;(2)改变细胞基因,使其表达特异性的标志物,如绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶等;(3)选用雄性供体和雌性宿主,利用Y染色体作为标志物;(4)用5-溴脱氧尿苷等胸腺嘧啶类似物来标记分裂细胞;(5)采用超顺磁氧化铁作为磁共振对比剂活体示踪移植细胞.近年来,上述细胞标记技术均有很大进展,特别是荧光染料、转基因标记、磁共振示踪三方面进展为迅速.
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DAPI标记的骨髓间充质干细胞体内外示踪实验研究
目的:研究随着时间延长,DAPI标记间充质干细胞(MSCs)的标记率变化.方法:分离培养纯化成年大鼠骨髓MSCs, DAPI标记,不同时点荧光显微镜观察,计算MSCs中DAPI阳性率.将标记的MSCs移植到缺血下肢模型动物骨骼肌中,不同时点取材,冰冻切片,观察移植细胞.结果:标记当天,荧光镜下MSCs胞核呈明亮蓝色荧光,标记率接近100%,随着培养时间延长,标记率逐渐下降.移植1周和2周组织切片中,可见密集移植MSCs,3周以后,可检出的DAPI阳性细胞明显减少.结论:DAPI短期标记细胞效率很高,但标记率随着时间延长而迅速下降.
关键词: MSCs 4 6-联脒-2-苯基吲哚 标记细胞 大鼠 -
肢体缺血-再灌注大鼠脑的损伤性变化及损伤机制的研究
目的:局部器官缺血-再灌注(ischemia-reperfusion, I-R)是引发多器官功能衰竭的原因之一,但其发生机制尚不完全清楚.肢体I-R对脑的影响更鲜见报道.方法:本研究通过夹闭大鼠腹主动脉末端复制盆腔与后肢I-R动物模型,缺血4 h,再灌2、4、6、12、24 h后取脑.另设假手术及单纯缺血两个对照组.3组动物取材后按电镜,光镜及免疫组织化学染色要求制样,免疫组化染色分别用抗诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)抗体、抗硝基化酪氨酸(nitrotyrosine, NT)抗体为一抗观测脑组织中iNOS的表达及ONOO-的存在.NT为ONOO-的特异性标志物.结果:(1)光镜下,I-R组皮层、海马、纹状体区胞体肿胀,部分细胞核周可见水肿裂隙,侧脑室室管膜下有炎性细胞浸润.两对照组未见异常.(2)电镜下,上述脑区神经元核周水肿,线粒体肿胀,嵴紊乱或消失,髓鞘肿胀板层分离,毛细血管周围组织水肿.(3)3组动物脑切片上,均有iNOS阳性标记细胞,分布于皮层、纹状体、海马、下丘脑等区域;NT阳性标记细胞只见于I-R组,分布于海马、皮层等区.结论:肢体I-R对脑有损伤作用.自由基及iNOS-NO的过量生成可能是脑损伤的关键因素.根据文献提示,我们对其机制做如下分析:(1)肢体I-R后引起血循环中氧自由基剧烈升高,中性粒细胞激活、释放细胞因子,由此导致血脑屏障开放和脑内自由基链锁反应.(2)细胞因子等诱导iNOS表达.(3)自由基通过引发兴奋性神经递质过量释放等机制导致神经元钙超载,激活NOS.(4)过量生成的NO与O 2结合生成毒性更强的ONOO-,导致神经元蛋白质、核酸及脂质破坏.
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大鼠三叉神经中脑核内PPD、PPE样阳性终末与PAG 和PV共存神经元的联系
[陈鹏,李金莲,李继硕. 解剖学报,2001;32(2):109-113] 目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)和小白蛋白(PV) 的共存关系,以及前强啡肽原(PPD)样和前脑啡肽原(PPE)样阳性终末与PAG和PV共存神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学双重和三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下观察. 结果在Vme内可见大量PAG样和PV样免疫反应神经元,吻尾方向上几乎在其全长出现,多为大的假单极神经元. 许多PAG样阳性神经元同时呈PV样免疫反应,双标细胞占全部标记细胞的95%以上.在激光共聚焦显微镜下观察到,少量PPD样或PPE样阳性终末围绕在PAG样和PV样双重标记的Vme神经元胞体周围,并与之形成密切接触. 结论在面口部本体感觉信息由V me向更高一级神经元传递的过程中,PV可能和谷氨酸一起发挥着重要的作用,与此同时Vme 神经元还可能接受中枢内强啡肽样和脑啡肽样神经终末对它的调控.(甄志强)
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大鼠神经干细胞的荧光标记及脑内移植
增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的人工改造型,在蓝色光(波长488 nm)激发下可以稳定地发出绿色荧光,以EGFP示踪是目前细胞生物学示踪剂研究中的一种重要手段[1].笔者分离培养了胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以逆转录病毒介导EGFP进行标记,探索标记方法的可行性以及EGFP对NSCs正常功能有无影响.并做标记细胞脑内移植实验,探讨EGFP在NSCs脑内移植中的示踪作用.