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针刀松解法对第3腰椎横突综合征大鼠下丘脑前阿黑皮素mRNA、前脑啡肽原mRNA表达的影响
目的:探讨针刀松解法治疗第3腰椎横突综合征的部分中枢镇痛机制.方法:SD雄性大鼠24只,随机分为正常组、模型组、针刀组及电针组.采用左侧第3腰椎横突尖部埋置明胶海绵法建立第3腰椎横突综合征模型,针刀组和电针组分别给予针刀松解和电针左侧"肾俞""腰阳关"治疗.应用原位杂交方法检测大鼠下丘脑前阿黑皮素(POMC)mRNA、前脑啡肽原(PPE)mRNA阳性细胞的表达.结果:造模后大鼠下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA的阳性细胞表达较正常组增多(P＜0.01),针刀组和电针组大鼠下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞表达较模型组进一步增多(P＜0.01).结论:针刀松解法与电针可能通过促进下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA的表达,参与其镇痛过程.
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不同间隔时间电针对炎症痛大鼠下丘脑阿片肽基因表达的影响
目的:观察累加电针对炎症痛大鼠模型不同间隔时间的镇痛效果,从而探讨针刺镇痛的佳治疗间隔时间.方法:96只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,以佐剂性关节炎大鼠作为炎症痛模型,分别以3、6、12、24 h作为电针治疗间隔时间.选用"昆仑"和"悬钟"穴,电针频率15～100 Hz,疏密波,电压2～4 V,留针20 min,连续治疗6 d后观测大鼠疼痛级别、痛阈、下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA的表达.结果:电针组的疼痛级别明显低于模型组(P＜0.05),24 h电针组的痛阈高于模型组(P＜0.01),各电针组下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达的细胞数均明显高于模型组.在不同间隔时间电针治疗中,以间隔24 h治疗更能明显降低炎症痛大鼠的疼痛级别并提高其痛阈,促进下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达(P＜0.05或0.01).结论:电针对炎症痛大鼠模型具有非常明显的镇痛作用,间隔24 h重复治疗可显著提高其镇痛效果.
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前脑啡肽原及其甲基化与胰腺癌研究进展
自1975年Hughes等从脑中分离并鉴定出两个脑啡肽即甲啡肽和亮啡肽以后,陆续发现10多种来自不同基因的内源性阿片肽.前脑啡肽原(preproenkephalin, ppENK)作为重要的内源性阿片肽前体,其基因甲基化及降解产物甲硫氨酸-脑啡肽与胰腺癌的发生、发展及治疗关系密切,现综述如下.
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蝎毒耐热蛋白对红藻氨酸诱导癫痫大鼠海马内前脑啡肽原表达的影响
[目的]观察蝎毒耐热蛋白对红藻氨酸(kainic acid, KA)癫痫大鼠癫痫敏感性形成的影响,并探讨前脑啡肽原(proenkephalin , PENK)在其机制中的作用. [方法]大鼠颈部皮下注射红藻氨酸,制备癫痫敏感性动物模型后,给予蝎毒耐热蛋白(scorpion venom heat resistant protein, SVHRP)进行干预.通过观察癫痫行为学表现检测SVHRP对癫痫敏感性形成的影响,同时应用RT-PCR技术检测不同处理组大鼠海马内前脑啡肽原表达的变化.[结果]蝎毒耐热蛋白干预组的大鼠较单独给予红藻氨酸组的大鼠癫痫敏感性形成率明显降低(P＜0.05),而且前脑啡肽原的表达也明显下降(P＜0.05).[结论]蝎毒耐热蛋白能够抑制红藻氨酸诱导大鼠癫痫敏感性的形成,前脑啡肽原可能参与其作用机制.
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人参皂苷Re对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用
目的研究人参皂苷Re对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制.方法通过给C57BL小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病(parkinson's disease,PD)模型,灌胃给予人参皂苷Re预处理后,运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色以及图像分析等技术分别对纹状体前脑啡肽原(preproenkephalin,PPE)mRNA、前强啡肽原(preprodynorphin,PPD)mRNA的表达水平和黑质酪氨酸羟化酶(TH)、γ-氨基丁酸(GABA)免疫反应阳性神经元数目等多项指标进行考察.结果 Re能使黑质致密部(SNc)的TH阳性神经元和黑质网状部(SNr)的GABA阳性神经元数目显著增多;Re高剂量预防组(26 mg·kg-1)PPD扩增产物较模型组显著增加(P<0.05);Re预防组的PPE扩增产物与模型组比没有显著差异.结论人参皂苷Re对MPTP诱致帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元具有明显的保护作用,其作用可能与改变GABA能神经元以及PPDmRNA表达水平,从而调节PD中直接回路和间接回路的兴奋-抑制平衡有关.
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2Hz和100Hz电针加速脑内三种阿片肽基因表达
我室以往的工作证明2 Hz和100 Hz电针可引起中枢释放不同种类的阿片肽,本工作试图阐明不同频率的电针是否影响三种阿片肽的基因转录.用地高辛标记的反义cRNA探针进行原位杂交,显示大鼠脑内前脑啡肽原(preproenkephalin,PPE),前强啡肽原(preprodynorphin,PPD)和前阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)mRNA.结果:(1)低、高频电针均不影响POMCmRNA的水平.(2)对PPE的影响,两种频率电针诱导脑干网状结构头端腹内侧区PPE mRNA升高的幅度相似,2 Hz电针诱导视上核、视交叉上核、下丘脑室旁核、弓状核、腹内侧核及外侧丘系核的PPE mRNA表达比100 Hz电针高得多.(3)对PPD的表达,2 Hz电针不改变脑内PPDmRNA的水平,100 Hz电针可使视上核、下丘脑室旁核、腹内侧核及脑干臂旁核的PPD mRNA明显升高.鉴于肽类的加速释放必然引起合成的增加,上述结果为不同频率电针加速不同内源性阿片肽的释放和合成,从而发挥镇痛作用,提供了有力的佐证.
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RNAi沉默DNMT1基因对胰腺癌细胞ppENK甲基化状态的影响
目的 观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNMT1基因的表达对胰腺癌Panc-1细胞的前脑啡肽原(preproenkephalin,ppENK)基因甲基化状态的影响.方法 采用针对DNMT1的Stealth核糖核苷酸干扰(siRNA)胰腺癌细胞,观察DNMT1信使核糖核酸(mRNA)及DNMT1蛋白的表达;甲基化特异性PCR反应(MSP)检测不同处理组ppENK的甲基化状态.结果 Stealth RNAi转染到胰腺癌细胞Panc-1中48 h后,siRNA-3转染组的mRNA相对表达量和比率分别为0.116和32.9%,与空白对照组(0.352,100%)、脂质体对照组(0.346,98.2%)、RNAi阴性对照组(0.339,96.3%)相比差异有统计学意义(F=2.107 E4,P=0.000 1),转染组的mRNA相对抑制率为67.1%.siRNA-3转染组DNMT1蛋白相对表达量和比率分别为0.179和32.9%,与空白对照组(0.547,100%)、脂质体对照组(0.520,95%)、RNAi阴性对照组(0.535,97%)相比差异有统计学意义(F=2.195 E5,P=0.000 1).于100 bp和96 bp处可见ppENK基因特异性条带,呈现部分去甲基化状态的特点.结论 DNMT1靶向的Stealth RNA瞬时转染到胰腺癌细胞Panc-1中可明显沉默DNMT1的基因和蛋白的表达,逆转抑癌基因ppENK的高甲基化状态,为胰腺癌的基因治疗提供相关的理论依据.
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蝎毒耐热蛋白对大鼠海马内前脑啡肽原表达的影响
癫痫是常见的神经系统变性疾病,其在临床上顽固难治的原因是癫痫敏感性的形成.国内外文献报道[1～4]阿片肽可能是癫痫敏感性形成的机制之一.脑啡肽(enkephalin,ENK)是脑内含量高的阿片肽,广泛存在于所有的脑区.蝎毒是传统的抗癫痫药物,蝎毒耐热蛋白是通过特殊工艺从蝎毒中提取的抗癫痫组分,本工作旨在探讨蝎毒耐热蛋白对抗癫痫敏感性形成的作用及其可能的阿片肽机制.
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安君宁对吗啡依赖大鼠脑内前脑啡肽原表达的影响
目的研究安君宁对雄性SD大鼠吗啡依赖相关脑区前脑啡肽原表达的影响.方法 30只体质量180～220 g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12 d、30 d组,吗啡戒断并淀粉治疗12 d、30 d组.吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5 mg·kg-1·次-1～50 mg·kg-1·次-1,2次/d,腹腔注射).安君宁干预方法:灌胃1 g·kg-1·次-1,2次/d;对照组灌等量的淀粉.各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织.采用原位杂交技术测定腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAs)、前额皮质(PFC)前脑啡肽原(PENK)mRNA水平.结果安君宁干预组与干预对照组相比, VTA、NAs、PFC中PENK mRNA水平显著升高(P <0.05).吗啡戒断12 d,安君宁干预组VTA、NAs、PFC中PENK mRNA水平分别为(14.74±4.81)×10-2、(16.09±4.94)×10-2、(20.47±7.03)×10-2,而干预对照组分别为(9.74±0.87)×10-2、(5.94±0.91)×10-2、(10.87±3.96)×10-2;戒断30 d,安君宁干预组分别为(17.46±8.27)×10-2、(25.73±8.24)×10-2、(26.58±6.29)×10-2,而干预对照组分别为(12.36±6.95)×10-2、(10.31±0.78)×10-2、(19.78±7.08)×10-2.结论安君宁能促进吗啡依赖大鼠依赖相关脑区前脑啡肽原表达的恢复.
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镁对帕金森病大鼠纹状体神经肽原mRNA转录的影响
目的:研究镁对帕金森病(PD)大鼠损毁侧纹状体α-PPT、PDyn及PPE mRNA转录的影响.方法:6-OHDA损毁制备偏侧PD大鼠模型;造模成功的大鼠随机分为对照组、美多巴组、硫酸镁组和联合组,分别给予生理盐水、美多巴、硫酸镁、美多巴及硫酸镁灌胃治疗28 d;RT-PCR检测损毁侧纹状体α-PPT mRNA转录水平,原位杂交法检测损毁侧纹状体PDyn、PPE mRNA转录水平.结果:美多巴组损毁侧纹状体α-PPT和PDyn mRNA转录水平较对照组增强(P<0.05),硫酸镁组及联合组损毁侧纹状体α-PPT mRNA转录水平较对照组增强(P<0.05),PDyn mRNA转录水平较美多巴组降低(P<0.05);各组PPE mRNA转录水平无明显差异.结论:镁联合美多巴治疗PD可增加纹状体α-PPT mRNA转录水平,缓解单纯美多巴治疗导致的PDyn mRNA转录过度增强.
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饥饿胁迫24h对小鼠认知功能及海马区前脑啡肽原表达的影响
目的 观察饥饿胁迫对小鼠认知功能和大脑海马区前脑啡肽原表达的影响.方法 将40只小鼠随机分为对照组和饥饿24h组(下称饥饿组),Morris水迷宫和八臂迷宫测试小鼠的认知功能.RT-PCR检测大脑海马区前脑啡肽原mRNA表达变化情况.结果 饥饿组与对照组比较,①在Morris水迷宫测试中,饥饿组潜伏期明显缩短(P＜0.05),通过原平台位置次数和穿越目标停留时间百分增加比(P＜0.05);②在八臂迷宫测试中,饥饿组参考记忆错误和工作记忆错误减少(P＜0.05);③在RT-PCR实验检测前脑啡肽原实验中,饥饿组小鼠大脑海马区前脑啡肽原表达明显降低(P＜0.05).结论 ①饥饿胁迫可增强小鼠的认知功能;②饥饿胁迫通过降低小鼠大脑海马区前脑啡肽原来增强认知功能;③脑肠肽水平的调整可能是“脾藏意主思”功能实现的途径之一.
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不同间隔时间电针对佐剂性关节炎大鼠炎症局部前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达的影响
目的:观察不同间隔时间电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠的镇痛效应,以探讨针刺镇痛的佳间隔时间和作用机制.方法:将96只大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组再分为3 h、6 h、12 h和24 h小组,以Freund's完全佐剂造成AA大鼠模型,电针选取悬钟和昆仑穴,分别以3 h、6 h、12 h和24 h作为治疗间隔时间,连续治疗6 d,以痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)mRNA和前脑啡肽原(PENK)mRNA表达作为观察指标.结果:间隔24 h电针能显著提高AA大鼠的痛阈;不同间隔时间电针均能促进炎症局部POMC mRNA和PENKmRNA的表达.结论:间隔24 h电针可明显提高对AA大鼠的镇痛效应;不同间隔时间电针镇痛效应与促进炎症局部阿片肽基因表达有关.
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静脉-吸入复合全身麻醉对患者内源性前阿片肽的影响
目的:研究静脉-吸入复合全身麻醉下患者手术过程中血浆部分内源性阿片肽水平的变化和手术前后淋巴细胞内前阿片肽基因表达的变化.方法:20例美国麻醉医师协会病情分级标准(ASA)Ⅰ-Ⅱ级患者,吸入异氟醚复合靶控输注异丙酚行全身麻醉.于手术开始前,开始后20、40、60、80 min抽取动脉血4 ml,用放射免疫分析法检测血浆β-内啡肽(β-EP)、亮氨酸脑啡肽(LEK)、强啡肽A(DynA)的水平.手术开始前、开始后80 min分别抽取动脉血2.5 ml,分离淋巴细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测前强啡肽原(PPD)和前脑啡肽原(PPE)的基因表达水平.结果:手术开始后各时间点血浆β-EP和LEK水平均较手术开始前升高(P<0.05);DynA水平在手术开始后20、40 min较手术开始前升高(P<0.05);手术开始后80 min淋巴细胞PPD/β-actin和PPE/β-actin较手术开始前均明显升高(P<0.05).结论:静脉-吸入复合全身麻醉手术过程中患者外周血阿片肽水平升高,一些前阿片肽基因表达明显增加.
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ENK与CaBPs在PPE-GFP转基因小鼠视网膜细胞中的共存
目的:以PPE-GFP转基因小鼠为研究工具,观察绿色荧光蛋白(GFP)阳性的脑啡肽(ENK)能神经元与钙结合蛋白D28K(CB)、钙视网膜蛋白(CR)和小自蛋白(PV)等钙结合蛋白(CaBPs)成员在视网膜的分布及共存情况.方法:利用免疫组织化学和免疫荧光双标染色的方法.结果:GFP阳性的ENK能细胞主要分布在视网膜内核层内缘,少量分布在节细胞层.所有的GFP阳性细胞均与神经元标志物NSE共存,但不与星形胶质细胞标志物GFAP共存.GFP与CB、CR和PV均有部分共存,其中GFP/CB共存神经元占GFP阳性细胞的8.65%,占CB阳性细胞的5.84%;GFP/CR共存神经元占GFP阳性细胞的18.18%,占CR阳性细胞的14.28%,且共存细胞仅见于内核层;GFP/PV共存细胞占GFP阳性细胞的68.75%,占PV阳性细胞的91.67%,共存细胞主要位于内核层,少量见于节细胞层.结论:ENK能神经元在视网膜内具有板层特异性的分布特点和与钙结合蛋白成员有不同的共存模式,上述结果为深入研究小鼠视网膜ENK能神经元的功能意义提供了形态学依据.
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大鼠三叉神经中脑核内PPD、PPE样阳性终末与PAG 和PV共存神经元的联系
［陈鹏，李金莲，李继硕. 解剖学报，2001;32(2):109-113］ 目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)和小白蛋白(PV) 的共存关系，以及前强啡肽原(PPD)样和前脑啡肽原(PPE)样阳性终末与PAG和PV共存神经元之间的联系. 方法免疫荧光组织化学双重和三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察. 结果在Vme内可见大量PAG样和PV样免疫反应神经元，吻尾方向上几乎在其全长出现，多为大的假单极神经元. 许多PAG样阳性神经元同时呈PV样免疫反应，双标细胞占全部标记细胞的95%以上.在激光共聚焦显微镜下观察到，少量PPD样或PPE样阳性终末围绕在PAG样和PV样双重标记的Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触. 结论在面口部本体感觉信息由V me向更高一级神经元传递的过程中，PV可能和谷氨酸一起发挥着重要的作用，与此同时Vme 神经元还可能接受中枢内强啡肽样和脑啡肽样神经终末对它的调控.(甄志强)
