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MPTP对多巴胺能神经细胞凋亡的影响
本文就神经毒素1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对多巴胺能神经细胞凋亡的影响进行综述,重点从MPTP损害细胞线粒体、促进细胞氧化应激、影响细胞信号转导、促进神经胶质细胞激活以及损害多巴胺转运体等方面介绍和总结了近年来在MPTP诱导多巴胺能神经细胞凋亡的机制尤其是细胞信号转导改变方面的研究进展;并对从细胞凋亡角度阐释帕金森病的发病机制以及MPTP多巴胺能神经毒性研究的进一步发展提出了展望.
关键词： 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 1-甲基-4-苯基-吡啶离子 多巴胺能神经细胞 凋亡 -
牵正散提取物对帕金森病模型小鼠震颤、运动障碍、黑质神经元超微结构的影响
目的:建立3种帕金森病小鼠模型,观察牵正散提取物对小鼠行为学影响,初步探讨其作用机制.方法:①昆明小鼠随机分组,设立模型组,牵正散低、高剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(盐酸苯海索,3.35 mg·kg-1).各治疗组小鼠连续ig给药4d.末次给药后1h,各组ip给予氢溴酸槟榔碱(25 mg·kg-1)或氧化震颤素(0.15 mg·kg-1).记录各组小鼠震颤潜伏期和震颤持续时间.②C57BL/6小鼠随机分组,设立正常组,模型组,牵正散低、高剂量组剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(美多芭,50 mg· kg-).除正常组,各组小鼠ip给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,30 mg· kg-),连续5d.第6天开始治疗组ig给予牵正散提取物和美多芭,连续7d,末次给药后检测小鼠行为学变化,电镜观察黑质神经元结构变化.结果:①小鼠ip槟榔碱或氧化震颤素后出现明显震颤,与模型组比较,牵正散提取物高剂量组震颤潜伏期显著延长(P＜0.05),低、高剂量组震颤持续时间均显著缩短(P＜0.01).②与模型组比较,小鼠ip MPTP后出现明显运动障碍,黑质神经元超微结构明显损伤,经牵正散提取物处理后,小鼠自主活动次数增加、转棒潜伏期延长、爬杆时间缩短(P＜0.05),黑质神经元线粒体等结构损伤程度减轻.结论:牵正散提取物显著抑制帕金森病模型小鼠震颤、改善运动障碍,其作用机制可能与减轻线粒体损伤、保护神经元有关.
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拜颤停复方对帕金森病小鼠模型氧化应激反应的影响
目的:通过研究拜颤停复方(BCT)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠帕金森病(PD)模型神经行为学、纹状体多巴胺(DA)含量、氧化应激反应的影响,探讨BCT对PD模型神经保护作用的可能作用机制.方法:雄性C57BL/6小鼠,MPTP-HC1(30 mg·kg-1 ·d-1,ip,0.9％生理盐水溶解)5d,造成PD小鼠模型;设立正常组、模型组、多巴丝肼组(62.50 mg· kg-·d-1)及BCT高、中、低剂量组(363.00,181.50,95.75 mg·kg-1·d-1),各给药组均用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解;BCT高、中、低剂量组培给药治疗20 d后,进行爬杆实验和自主活动实验以观察小鼠行为学的变化;采用UPLC-MS-MS三重四级杆串联质谱技术检测小鼠纹状体多巴胺(DA)的含量;化学比色法检测小鼠黑质(SN)部位超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及单胺氧化酶B(MAO-B).结果:与正常组比较,模型组小鼠爬杆时间显著延长(P＜0.05),自主活动次数显著减少(P＜0.05),纹状体DA含量、SOD及GSH-Px水平显著降低(P＜0.01),MDA及MAO-B水平显著升高(P＜0.01).与模型组比较,经过BCT治疗,PD小鼠的神经行为学得到显著改善(P＜0.05),纹状体DA含量,SOD及GSH-Px水平显著升高(P＜0.01,P＜0.05),MDA及MAO-B水平显著降低(P＜0.01).结论:BCT可以通过提高机体的抗氧化和清除自由基能力,明显改善PD小鼠的神经行为学变化及纹状体DA的含量,是其对PD模型神经保护作用的可能机制.
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川芎茶调散对帕金森病小鼠多巴胺神经元损伤的保护作用及机制研究
目的:研究川芎茶调散对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠多巴胺(DA)神经元损伤的保护作用,并从抗氧化角度探讨其神经保护作用的可能机制.方法:将3～5月龄的雄性C57/BL小鼠随机分为6组:正常组、川芎茶调散高、中、低(75,50,25 g·kg~(-1)生药量)3个剂量组、模型组.每组8只动物.观察爬杆实验测试行为学改变,HPLC检测小鼠纹状体中DA及其代谢产物含量,免疫组化检测小鼠黑质中TH阳性细胞数,荧光比色检测黑质中超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果:高、中、低剂量川芎茶调散对帕金森氏病(PD)小鼠的行为损害均有一定的保护作用(P<0.01);川芎茶凋散高剂量组小鼠纹状体中DA含量及TH阳性神经元数量明显高于模型组(均P<0.05);川芎茶调散中、高剂量组相对于模型组,SOD活力显著增高(P<0.05).结论:川芎茶调散可明显改善MPTP所致的小鼠PD模型的运动障碍,同时能对MPTP引起的DA神经元损伤起到保护作用,川芎茶调散对DA神经元的保护作用可能与其较强的抗氧化能力有关.
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磷酸化P38 MAPK对帕金森病MPTP模型小鼠黑质caspase-3表达的影响
目的 研究磷酸化P38 MAPK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠中对黑质半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的调控作用.方法 将小鼠随机分为MPTP模型组,腹腔注射MPTP(30 mg/kg,生理盐水溶);抑制剂组,在注射MPTP前1 h腹腔注射SB203580(10 mg/kg,溶于5 mg/mL DMSO).均1次/d,连续5 d;对照组,注射与模型组和抑制剂组等量生理盐水和DMSO.观察行为学、免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)、caspase-3和磷酸化P38 MAPK(p-P38 MAPK)的表达.结果 与对照组相比,模型小鼠出现典型的PD症状,TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约60%和65%(P<0.01),p-P38 MAPK、caspase-3阳性细胞及蛋白水平显著增加(P<0.01);经P38 MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01).结论 磷酸化P38 MAPK在MPTP诱导的PD小鼠黑质caspase-3表达中可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定的神经保护作用.
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Bc1-2家族是人参皂甙Rg1抗黑质神经元凋亡的重要调控蛋白
目的探讨Bc1-2、Bc1-x1和Bax蛋白在人参皂甙Rgl抗帕金森病(PD)小鼠模型黑质神经元凋亡过程中的可能作用. 方法 PD模型组单纯以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP )腹腔注射C57BL小鼠;预防组预先3 d腹腔注射Rg1(2.5、5.0、10.0 mg/kg),再注射M PTP,以Niss1染色、TH组织化学染色、TUNEL染色观察黑质神经元的变化;免疫组织化学染色检测Bc1-2、Bc1-x1和Bax蛋白表达. 结果 5.0和10.0 mg/kg Rg1预处理PD模型鼠能使黑质致密带(SNc)部位的Niss1和TH染色阳性神经元增多,TUNEL染色阳性率降低,以及Bc1-2和Bc1-x1表达增加,Bax表达减少. 结论 Rg1预处理对PD模型鼠黑质神经元凋元有明显的保护作用;Bc1-2 和Bc1-x1表达水平升高和Bax表达水平降低可能是Rg1抗凋亡的重要机制.
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阻断Notch信号通路降低1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的多巴胺能神经元损伤
目的 探讨Notch信号通路的缺失对1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤的影响.方法 选用5月龄TH-Cre Rbpj基因敲除小鼠及野生型小鼠共48只,腹腔注射MPTP建立帕金森病(PD)模型,通过行为学、免疫组织化学和Western blotting等方法研究阻断Notch信号通路对MPTP诱导的中脑黑质多巴胺能神经元损伤的影响.结果 MPTP处理的Rbpj CKO小鼠运动能力强于MPTP处理的野生型小鼠;Rbpj CKO小鼠黑质致密部神经元数目较野生型小鼠减少;MPTP处理后,野生型小鼠多巴胺能神经元数目明显下降,而Rbpj CKO小鼠多巴胺能神经元数目无明显改变;Western blotting结果显示,MPTP处理后Rbpj CKO小鼠和野生型小鼠Notch-1胞内结构域(NICD-1)的表达均明显增加,且Rbpj CKO小鼠表达量增加更为显著.结论 Notch信号通路缺失导致多巴胺能神经元数量减少,阻断Notch信号通路可以降低MPTP诱导的多巴胺能神经元损伤.
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帕金森病MPTP食蟹猴模型嗅球细胞凋亡
目的 建立1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢毗啶(MPTP)帕金森病(PD)模型,探讨模型组嗅球细胞凋亡和胶质细胞增生情况.方法 3只成年健康食蟹猴,静脉注射MPTP建立PD模型,另3只静脉注射生理盐水作为对照.取出嗅球,免疫组织化学染色检测Caspase-3、Bcl-2、离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在食蟹猴嗅球中的表达情况,采用Image J v1.8.0软件分析模型组和对照组之间的差异.结果 MPTP损伤后,与对照组相比,模型组嗅球突触小球层Caspase-3阳性细胞数明显增加,而Bcl-2表达减少;与对照组相比,模型组嗅球突触小球层和外网状层的GFAP和Iba-1阳性细胞数增加.结论 MPTP可诱导食蟹猴嗅球突触小球层细胞凋亡,并伴有星形胶质细胞增生和小胶质细胞激活,这可能与帕金森病的功能障碍有关.
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1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶对食蟹猴嗅球多巴胺能神经元的影响
目的：建立食蟹猴1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）帕金森病系统性模型，探讨嗅球中多巴胺（DA）及多巴胺/cAMP调节磷蛋白（DARPP32）的表达情况。方法3只成年健康食蟹猴，静脉注射MPTP，建立帕金森病系统性模型，取出嗅球，切片，免疫组织化学染色DA和DARPP32，摄片并观察DA和DARPP32在食蟹猴嗅球中的分布及表达情况，采用Image Pro-Plus软件，半定量分析模型组和正常组之间DA和DARPP32的表达差异。结果食蟹猴嗅球中DA和DARPP32神经元集中分布于突触小球层， DA神经纤维分布于突触小球层，而DARPP32神经纤维分布于嗅球各层，以突触小球层（ GL）和外网状层（ EPL）为密集。 MPTP损伤后，与正常对照组比较，DA和DARPP32神经元及神经纤维均减少，以DA神经元及神经纤维减少明显。结论食蟹猴嗅球中DA神经元和神经纤维分布于突触小球层。食蟹猴MPTP帕金森病系统性模型的嗅球DA能神经元和纤维明显减少，可能与帕金森病嗅觉障碍有关。
关键词： 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 嗅球 多巴胺 多巴胺cAMP调节磷蛋白 免疫组织化学 食蟹猴 -
健行颗粒对3种拟帕金森病震颤模型小鼠的干预作用
目的建立肌肉震颤及线粒体功能障碍致3种拟帕金森病震颤小鼠模型,并在此3种模型上观察健行颗粒的药效学作用,探讨其可能的作用机理.方法经氧化震颤素和槟榔碱单次腹腔注射建立小鼠肌肉震颤模型;经MPTP 20mg/kg连续8天腹腔注射建立线粒体损伤致震颤小鼠模型.记录震颤素和槟榔碱模型小鼠震颤持续时间;观察MPTP模型小鼠爬杆行为及自主活动次数的改变,经高效液相色谱测定MPTP模型小鼠纹状体内多巴胺及其代谢产物含量的改变.结果模型组小鼠在给予震颤素或槟榔碱腹腔注射后出现明显震颤,健行颗粒用药组小鼠震颤持续时间较模型组明显缩短;对于MPTP小鼠模型,模型组小鼠爬杆时间延长,运动协调性降低,纹状体内多巴胺含量明显降低,健行颗粒用药组小鼠爬杆时间较模型组明显缩短,自主活动数增加,纹状体内多巴胺含量增高.结论槟榔碱及氧化震颤素均能制备良好的肌肉震颤小鼠模型,健行颗粒能明显减少模型动物肌肉震颤持续时间;对于MPTP腹腔注射拟帕金森小鼠模型,健行颗粒能明显缩短其爬杆时间,增强小鼠自主活动能力,提升小鼠脑纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量.
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耐力训练对帕金森模型小鼠中脑线粒体自噬相关基因表达的影响
目的:探讨耐力训练对帕金森病(PD)模型小鼠中脑线粒体自噬的影响,揭示运动预防帕金森病的分子生物学机制.方法:10周龄雄性C57BL/6小鼠32只,随机分为安静组(C),运动组(E),帕金森模型安静组(P)及帕金森模型运动组(PE),每组8只.E组及PE组小鼠进行为期8周跑台耐力训练,跑台速度15m/min,坡度为0％,每天运动持续50min,每周6次,周日休息.训练结束后,P组和PE组小鼠腹腔注射MPTP(30mg/kg),C组和E组小鼠注射等量生理盐水,持续3d.注射结束1周后,处死各组小鼠,取双侧中脑及纹状体,采用实时PCR及Western blot技术检测线粒体自噬相关基因及TH蛋白表达,HPLC技术检测中脑及纹状体组织内DA含量.结果:与C组比,E组小鼠中脑TH蛋白上调(P＜0.05),中脑及纹状体DA含量均增加(P＜0.05),P组和PE组小鼠TH蛋白及DA含量均显著下降(P＜0.01),而P组较PE组相应指标下降更明显(P＜0.05).与C组比,E组小鼠中脑PINK、PARK2 mRNA及PINK1蛋白表达上调(P＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加,P组小鼠PINK1 mRNA表达下调(P＜0.05),PE组小鼠PINK1 mRNA、Parkin蛋白含量及LC3Ⅱ/Ⅰ比值较P组增加.结论:为期3d的MPTP处理可导致小鼠中脑及纹状体TH及DA含量下降,诱导帕金森病发生,耐力训练可缓解这一现象;MPTP诱导的帕金森小鼠模型中脑线粒体自噬水平下降,而耐力训练可作用于线粒体自噬相关基因的表达,抑制MPTP的神经毒性作用.
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MPTP诱导猴偏侧帕金森病模型的制作
目的探讨偏侧帕金森病恒河猴动物模型的成模率及影像、病理的对比.方法经一侧颈内动脉注入1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)后,对实验组猴的行为表现及影像学表现:包括MRI、PET及SPECT进行检测及酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色.结果注射 MPTP后第5～7天逐渐出现偏侧帕金森病症状,肌注阿朴吗啡后动物向左侧快速旋转;PET检查示实验组猴右侧(患侧)18F-脱氧葡萄糖平均标准摄取值较左侧明显减低,SPECT检查示多巴胺转运蛋白(DAT)显像右侧纹状体放射性摄取明显减低,二者均与对侧及给药前对比统计学上差异有显著性差异(P<0.05).TH免疫组化染色示右侧黑质多巴胺能神经元明显减少.结论经一侧颈内动脉注射MPTP制作偏侧帕金森病猴模型安全、简单、成模率高,是研究帕金森病的一种理想的帕金森病动物模型.
关键词： 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 恒河猴 帕金森病 正电子发射型计算机断层显像 多巴胺转运蛋白 -
MPTP对小鼠和淀粉样蛋白对大鼠处理后相关脑区NAP1基因表达的影响
目的研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)和β-淀粉样蛋白(Aβ)对小鼠或大鼠相关脑区核小体组装蛋白-1(NAP-1)基因表达的影响. 方法通过MPTP腹腔注射诱导C57BL小鼠产生类似帕金森病症状,Aβ脑室注射诱导SD大鼠产生类似阿尔茨海默病症状.利用逆转录PCR方法检测小鼠黑质与纹状体及大鼠皮质与海马NAP-1mRNA丰度的变化. 结果在小鼠中,MPTP导致黑质NAP-1基因表达显著降低,而对纹状体NAP-1的表达没有明显影响.在大鼠中,Aβ对海马与皮质NAP-1基因的表达均无明显影响. 结论 NAP-1很可能参与了MPTP诱导的神经元凋亡过程,但在Aβ诱发的神经元凋亡过程中可能不起作用.
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慢性帕金森病MPTP猴模型纹状体区质子磁共振波谱的动态研究
目的观察慢性帕金森病(PD)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)猴模型纹状体区质子磁共振波谱(1H-MRS)的动态变化,探讨1H-MRS在PD早期诊断研究中的价值.方法4只健康成年雄性猕猴,以MPTP(皮下注射,0.1 mg·kg-1·d-1)制备慢性PD全身模型,造模前及其后6周内每周应用GE Signa 1.5T超导型NV/i磁共振扫描系统,行双侧纹状体区1H-MRS采集,观察氮-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱化合物(Cho)和肌酸及磷酸肌酸(Cr),采用随机软件FuncTool4.0对各代谢物含量行半定量分析,计算NAA/Cr和Cho/Cr的变化,并与行为学评分、MPTP累积剂量进行相关分析.结果4只猴经MPTP处理后均达到PD诊断标准,平均出现症状时间为(18.3±1.3)d,行为学评分稳定时间为(26.3±1.3)d,MPTP的累积用量为(17.78±0.27)mg.相同时间点双侧纹状体区NAA/Cr和Cho/Cr比较差异无统计学意义(P＞0.05);使用MPTP后第1周至行为学评分稳定期间,NAA/Cr呈进行性下降,Cho/Cr呈进行性升高,行为学评分稳定后NAA/Cr和Cho/Cr趋于稳定;MPTP处理后第3周NAA/Cr和Cho/Cr与正常组比较差异有统计学意义(t=3.59,P＜0.05;t=4.77,P＜0.05);MPTP累计剂量与NAA/Cr的变化呈显著负相关(r=-0.970,P＜0.05);与Cho/Cr的变化呈显著正相关(r=0.924,P＜0.05).结论1H-MRS能够早期发现慢性PD MPTP猴模型纹状体区的代谢及生化改变,间接反映MPTP的毒性作用及病变程度,为PD的早期诊断和症状评价创造了条件.
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PDTC对MPTP帕金森病鼠黑质NF-κB表达的影响
目的 研究二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病(PD)鼠黑质核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 实验组C57/BL小鼠按体重30 mg/(kg·d)经腹腔注射MPTP共7 d制成PD模型, 预防组小鼠按体重40 mg/(kg·d) 经腹腔注射PDTC半小时后再经腹腔注射MPTP.观察两组小鼠注射前后行为变化, 并采用SABC法检测注射后黑质部NF-κB及酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况.结果 实验组小鼠表现出PD的典型症状, 预防组则无异常行为表现.实验组小鼠黑质部NF-κB阳性表达较预防组显著, 并有明显核易位现象, TH阳性神经元显著减少(均P＜0.01).结论 NF-κB参与了MPTP PD鼠发病过程, 黑质中NF-κB过度激活是MPTP对小鼠造成损害作用的机制之一.预先使用PDTC对MPTP PD鼠起到一定神经保护作用.
关键词： 帕金森病 二硫代氨基甲酸吡咯烷 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 核因子-κB -
帕金森病模型鼠黑质α-突触核蛋白表达升高并集聚
目的观察低剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对小鼠黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白表达的影响.方法 C57BL小鼠腹腔注射MPTP 20 mg/kg体重,每周注射1次连续3周,观察小鼠行为改变,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western 印迹法、免疫组化染色检测α-突触核蛋白表达,荧光双标染色观察多巴胺能神经元内α-突触核蛋白聚集.结果与注射生理盐水组相比,注射MPTP组小鼠出现暂时性躯干震颤、竖毛、动作减少等;α-突触核蛋白基因表达百分比(79.5 %±0.8%,生理盐水组为19.2%±3.3%,P<0.05)及蛋白表达百分比(82.2%±4.1%,生理盐水组为18.5%±1.0%,P<0.05)均明显增加;黑质部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数减少,α-突触核蛋白阳性细胞数增加;α-突触核蛋白与硫磺素S、TH与硫磺素S复合定位染色的阳性细胞数均升高.结论低剂量MPTP可诱导小鼠行为改变,黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白表达升高,并出现蛋白聚集.
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垂体腺苷酸环化酶激活肽27治疗帕金森病小鼠的实验研究
目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽27(PACAP27)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠是否具有治疗作用.方法 静脉给予神经肽PACAP27对MPTP诱导的PD小鼠模型进行治疗,采用免疫组织化学及蛋白印迹分析方法对PD标志物酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)、囊泡单胺转运体2(VMAT2)进行检测,并用高效液相色谱(HPLC)检测纹状体单胺类递质.结果 神经肽PACAP可明显减少黑质TH阳性细胞的损失,以PACAP(0.02 μg/d)治疗组为明显(93.33±4.87,F=85.58,P＜0.01).生理盐水(NS)治疗组较正常对照组纹状体TH、DAT、VMAT的表达明显降低,而PACAP治疗组较NS治疗组TH表达明显增多,以PACAP治疗组(0.02 μg/d)增高为明显(136.34±8.45,F=113.88,P＜0.01);而DAT和VMAT2在PACAP治疗组中则呈现了多种变化趋势.HPLC检测发现PACAP治疗组(0.02 μg/d)多巴胺(DA)代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)含量较NS治疗组明显升高(1590.7±473.3,F=375.71,P＜0.01),与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 静脉注射PACAP27可对MPTP诱导的PD小鼠模型产生明显的治疗作用,而这种治疗作用可能与单胺类递质转运体DAT、VMAT2的表达高低无明显直接关系.
关键词： 帕金森病 垂体腺苷酸环化酶激活肽 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 -
干扰烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1表达对帕金森病小鼠模型的作用及其机制研究
目的 探讨干扰烟酰胺单核苷酸转移酶1(NMNAT1)基因表达在帕金森病小鼠模型中的作用及其机制.方法 将C57BL/6种系小鼠30只按随机数字表法随机分为1-甲基-4-苯基-1, 2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组、干扰 NMNAT1表达(siNMNAT1 +MPTP)组和对照组,每组10只.siNMNAT1+MPTP组小鼠黑质注射由连接绿色荧光蛋白(GFP)的小干扰RNA(siRNA-GFP)构成的腺病毒,MPTP组及对照组注射等量GFP构成的腺病毒,然后siNMNAT1+MPTP组与MPTP组小鼠腹腔注射MPTP来构建慢性帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水.评估小鼠的运动协调能力,采用免疫荧光染色法测定黑质多巴胺能神经元数目,采用RT-PCR 评估纹状体酪氨酸羟化酶(TH)表达水平,采用Western 印迹法检测黑质中TH、超氧化物歧化酶1(SOD1)、B 淋巴细胞瘤-2 (Bcl2)蛋白和Bcl2相关X(Bax)蛋白的表达.结果 与对照组相比,siNMNAT1+MPTP组、MPTP组的运动协调能力[滚轴实验滑落时间:siNMNAT1+MPTP组(62.8 ±15.7)s,MPTP组(77.9 ±13.5)s,对照组(122.0 ±25.2)s]、多巴胺能神经元计数(siNMNAT1+MPTP组45.0 ±6.7,MPTP组68.0 ± 11.3,对照组93.0 ±12.8)及纹状体TH表达水平均降低且差异具有统计学意义(滚轴实验滑落时间:t=-6.291, P=0.000;t=-4.865, P=0.000.多巴胺能神经元计数:t=-10.482,P=0.000;t=-4.624,P=0.000.TH表达水平:t=-9.117,P=0.000;t=-5.716,P=0.000).与MPTP组相比, siNMNAT1+MPTP组小鼠的协调运动能力降低,但差异无统计学意义,而多巴胺能神经元计数及纹状体TH表达均明显减少(t=-5.487,P=0.000;t=-5.146,P=0.003),黑质中SOD1表达水平(t=-4.143,P=0.001)、Bcl2/Bax比值均明显降低(t=-6.303,P=0.000),Bax蛋白表达水平明显升高(t=3.550,P=0.002).结论 干扰帕金森病小鼠模型NMANT1表达可通过影响细胞凋亡、氧化应激促进多巴胺能神经元的丢失,降低小鼠的运动协调能力.
关键词： 烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1 基因表达 帕金森病 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 -
和厚朴酚在帕金森病小鼠模型中的神经保护作用
目的 探讨和厚朴酚在帕金森病小鼠模型中的神经保护作用及可能的机制.方法 1-甲基-4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导建立帕金森病小鼠模型.随机将60只C57BL/6雄性小鼠均分为对照组、MPTP模型组、金刚烷胺组(阳性对照,40mg/kg)、和厚朴酚A组(10mg/kg)、和厚朴酚Bgl(30mg/kg).观察各组小鼠一般行为的差异,通过自主活动实验测定每只小鼠5min内的活动次数,采用高效液相-电化学法(HPLC-EC)检测小鼠脑内纹状体多巴胺的变化.结果 ①腹腔给予MPTP(30mg/kg)后5min,小鼠出现暂时性躯干震颤、竖毛、尾巴过伸、动作减少等不自主运动,可以判定帕金森病模型复制成功.②MPTP模型组小鼠5min的自主活动次数(102±7次)低于对照组(583±11次,P＜0.01),纹状体多巴胺含量(2.10±0.03nmol/g)较对照组(8.72±0.14mnol/g)明显降低(P＜0.01).③和厚朴酚(10、30mg/kg)预处理能明显改善小鼠异常的行为学表现.和厚朴酚A、B组小鼠自主活动次数(分别为301±13、377±11次)较模型组(102±7次)明显增加(P＜0.05);和厚朴酚A、B组小鼠脑内多巴胺的含量(分别为3.77±0.08、5.22±0.11nmol/g)也较模型组(2.10±0.03nmol/g)明显增加(P＜0.01).结论 和厚朴酚具有神经保护作用,能对抗MPTP诱导的帕金森病模型小鼠的神经损伤,其机制可能与和厚朴酚能营养神经元,促多巴胺能神经元存活、分化和生长,从而部分恢复多巴胺的合成、代谢有关.
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N-甲基-4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶及多巴胺体外引起大鼠脑线粒体损伤作用
目的:观察1-甲基,4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)和多巴胺对大鼠脑线粒体损伤作用.方法:大鼠脑线粒体与MPTP和多巴胺温孵后测定膜流动性、膜电位、线粒体肿胀、总ATP酶、呼吸链复合酶活性及线粒体H2O2, 和丙二醛(MDA)含量.结果:二者可降低线粒体膜流动性,MPTP损伤线粒体膜电位,对线粒体肿胀、总ATP酶活性无影响;多巴胺不改变膜电位,却抑制总ATP酶活性,导致线粒体肿胀.二者均增加线粒体中MDA含量.多巴胺使H2O2和生成增加,MPTP仅增加H2O2生成.多巴胺抑制呼吸链复合酶活性,MPTP略有激活作用.结论:MPTP与多巴胺损伤线粒体作用的不同, 可能与通过不同途径刺激氧自由基生成有关.
