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反相高效液相色谱法测生物材料中槟榔碱的含量
槟榔为棕榈科植物槟榔(Areca catechu L)的干燥成熟种子,主要分布于我国湖南、海南、云南和台湾等地.其主要活性成分为槟榔碱类生物碱.Ho等[1]研究认为咀嚼槟榔时口腔黏膜细胞持续受到槟榔碱刺激后原癌基因C2 iun的表达也许是口腔鳞癌发生的机制之一;
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牵正散提取物对帕金森病模型小鼠震颤、运动障碍、黑质神经元超微结构的影响
目的:建立3种帕金森病小鼠模型,观察牵正散提取物对小鼠行为学影响,初步探讨其作用机制.方法:①昆明小鼠随机分组,设立模型组,牵正散低、高剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(盐酸苯海索,3.35 mg·kg-1).各治疗组小鼠连续ig给药4d.末次给药后1h,各组ip给予氢溴酸槟榔碱(25 mg·kg-1)或氧化震颤素(0.15 mg·kg-1).记录各组小鼠震颤潜伏期和震颤持续时间.②C57BL/6小鼠随机分组,设立正常组,模型组,牵正散低、高剂量组剂量组(1.7,5.0 g·kg-1),阳性药组(美多芭,50 mg· kg-).除正常组,各组小鼠ip给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,30 mg· kg-),连续5d.第6天开始治疗组ig给予牵正散提取物和美多芭,连续7d,末次给药后检测小鼠行为学变化,电镜观察黑质神经元结构变化.结果:①小鼠ip槟榔碱或氧化震颤素后出现明显震颤,与模型组比较,牵正散提取物高剂量组震颤潜伏期显著延长(P＜0.05),低、高剂量组震颤持续时间均显著缩短(P＜0.01).②与模型组比较,小鼠ip MPTP后出现明显运动障碍,黑质神经元超微结构明显损伤,经牵正散提取物处理后,小鼠自主活动次数增加、转棒潜伏期延长、爬杆时间缩短(P＜0.05),黑质神经元线粒体等结构损伤程度减轻.结论:牵正散提取物显著抑制帕金森病模型小鼠震颤、改善运动障碍,其作用机制可能与减轻线粒体损伤、保护神经元有关.
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槟榔花中槟榔碱的热回流提取工艺优化
目的:研究槟榔花中槟榔碱的热回流提取佳工艺.方法:以氢溴酸槟榔碱提取含量为考察指标,采用L9(34)正交试验研究料液比、提取时间和提取次数3个因素对槟榔花中热回流提取槟榔碱的影响,得出槟榔花中槟榔碱的佳提取工艺.结果:从槟榔花中热回流提取槟榔碱的佳工艺为料液比1∶80,提取时间25 min,提取次数3次.佳条件下槟榔碱提取含量可达(4.31 ±0.047) mg·g-1.结论:该工艺简单、高效,能有效提取槟榔花中的槟榔碱,与旧工艺的提取含量(3.38±0.03) mg·g-1有显著性差异.
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HPLC测定小儿消积止咳口服液中辛弗林、氢溴酸槟榔碱的含量
目的:建立HPLC测定小儿消积止咳口服液中辛弗林、氢溴酸槟榔碱含量的方法.方法:Symmetry C18色谱柱(4.6mm×250 mm;5μm),流动相乙腈-甲醇-0.1%冰醋酸溶液(每1 000 mL含磷酸二氢钾0.6 g,十二烷基磺酸钠1.0 g)(15:30:55),检测波长215 nm.结果:辛弗林、氢溴酸槟榔碱分别在0.281 5～2.815,0.040 16～0.401 6μg呈良好的线性关系,回收率分别为97.1%(RSD 1.4%),100%(RSD 1.3%).结论:该法简便、测定准确、灵敏度高,分离效果好,能用于该品种的质量评价.
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氢溴酸槟榔碱体内对大鼠肝肾转运体表达的影响
目的 探究氢溴酸槟榔碱对大鼠肝肾转运体表达的影响.方法 通过给雄性Wistar大鼠ig氢溴酸槟榔碱(0.8、4、20 mg/kg) 21 d,应用荧光RT-PCR检测肝、肾组织中13种转运体mRNA的表达量,考察氢溴酸槟榔碱对大鼠肝、肾转运体mRNA表达的影响.结果 氢溴酸槟榔碱低剂量时显著抑制了肝脏MRP2和MDR1A mRNA表达,但显著诱导了肾脏MRP5 mRNA表达.氢溴酸槟榔碱高剂量时显著抑制了肝脏OCT2、OAT2、OCTN2、OATP1A1、OATP1A4、OATP2B1、MRP2和MDR1A,以及肾脏MRP2、BCRP、MDR1A的mRNA表达水平,但显著上调了肾脏OCTN2、OATP1A1、OATP1A4及MRP5的mRNA表达量,且对上述转运体mRNA表达的影响有一定剂量依赖性.结论 由于肝肾转运体表达与功能的改变会引起药物相互作用,临床上应给予槟榔嗜好者更多关注,以避免发生不良药物相互作用.
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氢溴酸槟榔碱体内对大鼠肝脏CYP2B表达的影响及其机制研究
目的 研究氢溴酸槟榔碱对大鼠肝脏细胞色素P450 2B (CYP2B)表达的影响及其调控机制.方法 Wistar雄性大鼠连续ig氢溴酸槟榔碱(4、20、100 mg/kg)7 d,LC-MS/MS法检测肝脏CYP2B活性,Western blotting法检测肝脏CYP2B1/2、组成型雄甾烷受体(CAR)及核内CAR蛋白表达量,定量荧光PCR检测肝脏CYP2B1 mRNA表达量.结果 氢溴酸槟榔碱对大鼠肝脏CYP2B蛋白的表达没有明显影响,但对肝脏CYP2B1 mRNA表达的诱导作用随剂量增加而增强,对CYP2B活性的诱导作用随剂量增加而减弱.此外,给药后肝细胞核内CAR蛋白量增加,但肝细胞总CAR蛋白的量无明显变化.结论 氢溴酸槟榔碱体内通过促进CAR向核内转移,诱导了大鼠肝脏CYP2B活性,且对CYP2B的调控主要发生在转录水平,也可能存在翻译后修饰.
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氢溴酸槟榔碱诱导大鼠肝脏氧化应激性损伤
目的 通过肝微粒细胞色素P4502E1(CYP2E1)观察氢溴酸槟榔碱(arecoline hydrobromide)诱导大鼠肝脏氧化应激性损伤.方法 雄性Wistar大鼠连续灌胃给药氢溴酸槟榔碱7d,测定大鼠肝组织中抗氧化活性指标,HPLC法测定探针底物在大鼠肝微粒温孵体系中特征代谢物的生成量评价CYP2E1的酶活性.RT-PCR技术检测肝脏组织Cyp2el mRNA水平.结果 与对照组相比,大鼠灌胃7d后,肝组织中过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性随口服氢溴酸槟榔碱剂量的加大都出现不同程度的降低,100 mg/(kg·d)氢溴酸槟榔碱时出现显著性差异(P＜0.01);4 mg/(kg · d)氢溴酸槟榔碱使大鼠肝脏CYP2E1的活性提高了1.66倍(P＜0.05).结论 氢溴酸槟榔碱对大鼠肝脏CYP2E1的诱导作用与肝脏氧化应激性损伤有关.
关键词： 氢溴酸槟榔碱 大鼠 肝微粒体 细胞色素P4502E1 高效液相色谱(HPLC) 氧化应激 -
氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达和活性的影响
目的 评价氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的抑制作用及其对H.pylori空泡毒素A表达水平和活性的影响.方法使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定中药活性成分氢溴酸槟榔碱对H.pylori的低抑菌浓度(MIC),以反映药物对H.pylori的抑制作用.通过中性红摄入法评价药物干预后H.pylori培养上清中空泡毒素A对胃癌细胞BGC-823的毒性作用,并通过RT-PCR方法和Western blot方法检测经药物处理后H.pylori菌体及分泌上清中空泡毒素A mRNA和蛋白的表达水平,以反映药物对H.pylori空泡毒素A活性和表达的影响.结果高浓度氢溴酸槟榔碱对H.pylori具有抑制作用,MIC为:固体法和液体法均为1.25 g·L-1.低浓度氢溴酸槟榔碱可不同程度抑制H.pylori空泡毒素A的活性(P<0.01);抑制H.pylori菌体和分泌上清中空泡毒素A mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达.结论 氢溴酸槟榔碱在较高浓度(1.25 g· L-1)时具有抑制H.pylori生长作用,而在较低浓度(0.15 g·L-1)时,即可抑制H.pylori 空泡毒素A的表达和活性.
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氢溴酸槟榔碱抗血栓作用的研究
目的:研究氢溴酸槟榔碱对体内、外血栓的抗栓和溶栓作用.方法:通过对体外人血凝块和对人血小板血浆凝块的溶解来考察氢溴酸槟榔碱的体外溶栓作用;通过角叉菜胶引起小鼠尾静脉血栓形成的模型来考察氢溴酸槟榔碱体内抗栓的作用.结果:氢溴酸槟榔碱能加速溶解体外人血凝块和血小板血浆凝块,并具有剂量依赖性;具有抗角叉菜胶引起的小鼠尾静脉血栓形成的作用.结论:氢溴酸槟榔碱具有体内、外抗血栓作用.
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藏药安神丸的质量标准提高
目的 提高藏药安神丸的质量控制方法.方法 采用显微鉴别方法,对制剂中槟榔、沉香、丁香、肉豆蔻、木香、广枣、山柰、荜茇、黑胡椒、铁棒槌进行鉴别.采用薄层色谱法,对制剂中丁香进行定性鉴别.采用高效液相色谱法,对制剂中槟榔进行定性鉴别.运用高效液相色谱法测定胡椒碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量.结果 显微鉴别特征明显.定性鉴别方法专属性强,效果佳.采用HPLC法进行含量测定,胡椒碱质量在0.083～1.661 μg(r=0.9972)、木香烃内酯质量在0.08～1.606 μg(r=0.9986)、去氢木香内酯质量在0.082～1.64 μg(r=0.9997)与峰面积均呈良好线性关系,平均回收率均大于98.4％,RSD均小于1.3％(n=3).结论 本方法提高完善了藏药安神丸的质量标准,结果准确可靠,重现性好,可更有效的控制其质量.
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氢溴酸槟榔碱对人肝CYP450酶的体外影响
目的 采用液质联用法结合特异性探针技术,研究氢溴酸槟榔碱(AH)对人肝微粒体(HLM)中细胞色素P450(CYP450)亚型酶的体外影响.方法 将CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B6的探针底物分别在0~160μmol/L AH的HLM中温孵,高效液相法测定CYP1A2、2E1、3A4、2C9的酶活性;高效液相色谱-串联质谱仪测定CYP2D6、2B6的酶活性.结果 AH对HLM中CYP2D6、2B6、2E1、2C9的酶活性有轻微抑制作用,且随AH浓度的升高而增强.当AH为160μmol/L时,对CYP2D6、2B6、2E1、2C9酶活性的抑制率分别为36.2%、38.3%、35.0%和35.4%.结论 槟榔嗜好者使用CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B66个CYP450酶的底物药物时,其代谢相互作用的风险仍不可忽视.
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ICP-MS/ICP-AES测定不同种质槟榔果实微量元素及HPLC测定氢溴酸槟榔碱
目的:研究不同种质槟榔果实的微量元素和槟榔生物碱含量.方法:借助ICP-MS/ICP-AES技术分析比较5个不同种质同地种植槟榔果实微量元素的含量及HPLC分析氢溴酸槟榔碱含量.结果:钙、镁、铁、锌、铝、锶、硼、砷、锡等9种微量元素均以G5高；铜、铷、铈、锂、汞等5种微量元素均以G4高；锰、钒、锑、硒、钴、镍、镉等元素均以G3高；铬、钡、铋、钼等4种元素均以G2高；铅、钛等元素以G1高.氢溴酸槟榔碱以G5高.G5的氢溴酸槟榔碱含量显著高于其他4个种质.氢溴酸槟榔碱与镁、铁、锌、铝、硼元素呈正极显著相关系(相关系数:R =0.925,0.988,0.943,0.978,0.912),但与钒、汞元素呈负显著相关系(R=-0.800,-0.732).结论:5个不同种质槟榔果实在微量元素和氢溴酸槟榔碱含量上存在较大差异.该实验结果为了解槟榔果实中药效成分的含量及其疗效差异及种质选育提供了重要参考.
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槟榔花药材质量标准研究
目的:建立槟榔花药材的鉴别与含量测定方法.方法:以氢溴酸槟榔碱对照品为指标,进行薄层色谱鉴别；以氢溴酸槟榔碱作为含量测定的指标,采用HPLC法测定槟榔花中氧澳酸槟榔碱的含量.以Agilent HC-C18(4.6 mm× 250mm,5μm)为色谱柱,流动相:乙腈-十二烷基硫酸钠溶液(0.1 mol/L,磷酸调节pH =3.2)(60∶40),流速1 mL/min,检测波长为215 nm.结果:氢溴酸槟榔碱在0.2557 ～4.0912μ范围内线性良好,r=0.9999;平均回收率=102.3％,RSD =4.2％.结论:方法简便,准确,分离度效果好,可用于槟榔花的质量测定.
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氢溴酸槟榔碱对大鼠离体胃平滑肌条动力的作用
目的 观察氢溴酸槟榔碱对大鼠离体胃不同部位纵行和环行肌条收缩活动的影响,并探讨其对胃平滑肌动力协调性的作用.方法 将胃不同部位平滑肌条置于盛有Krebs灌流浴槽中,在37℃恒温、通95％ O2和5％ CO2混合气条件下,记录给予氢溴酸槟榔碱、阿托品和河豚毒素前后肌条的收缩活动.结果 氢溴酸槟榔碱对胃底纵行与环行肌和胃窦纵行肌条的振幅没有明显作用(P＞0.05),但能显著增加胃体纵行与环行肌条、胃窦环行肌条和幽门环形肌条的振幅(P＜0.05,P＜0.01).氢溴酸槟榔碱能显著提高各部位胃平滑肌条的张力(P＜0.05,P＜0.01).一定浓度的氢溴酸槟榔碱能显著加快胃底肌条的收缩频率(P ＜0.05,P＜0.01),但对其他部位肌条的收缩频率没有显著影响(P＞0.05).阿托品和河豚毒素对肌条的自发收缩都没有影响,阿托品可阻断氢溴酸槟榔碱诱导的收缩作用,但河豚毒素对氢溴酸槟榔碱诱导的收缩作用没有影响.结论 氢溴酸槟榔碱可兴奋大鼠胃各部位肌条的收缩活动,它的这一作用是通过平滑肌中的胆碱能M型受体实现的.
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氢溴酸槟榔碱抗实验性胃溃疡效果研究
目的 研究氢溴酸槟榔碱抗实验性胃溃疡的作用. 方法 用化学测定法观察氢溴酸槟榔碱对大鼠胃液胃酸、胃蛋白酶分泌的影响;采用小鼠应激性胃溃疡模型、大鼠乙醇型胃溃疡模型和乙酸灼烧型大鼠胃溃疡模型来观察氢溴酸槟榔碱对胃溃疡动物模型的作用. 结果 氢溴酸槟榔碱可显著减少胃游离酸及总酸量,降低胃蛋白酶活性;对小鼠应激性胃溃疡、大鼠乙醇型胃溃疡、大鼠乙酸型胃溃疡等具有明显的抑制和保护作用. 结论 氢溴酸槟榔碱具有抗实验性胃溃疡的作用.
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震颤停抗帕金森病小鼠肌肉震颤作用的实验研究
目的:观察震颤停对氢溴酸槟榔碱致小鼠肌肉震颤作用的影响,以探讨其治疗帕金森病的机理.方法:应用氢溴酸槟榔碱使小鼠产生肌肉震颤,观察震颤停是否具有拮抗其肌肉震颤的作用.结果:震颤停高剂量(10g生药/kg)、中剂量(5g生药/kg)、低剂量(2.5g生药/kg)在预防给药5d后,能够明显延长氢溴酸槟榔碱致小鼠出现肌肉震颤的潜伏期和缩短肌肉震颤持续时间;高剂量和中剂量并能够明显降低肌肉震颤强度.结论:震颤停对帕金森病小鼠肌肉震颤模型具有保护作用.
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槟榔碱的含量测定
采用高效阳离子交换色谱法,对氢溴酸槟榔碱含量测定的佳条件为:流动相乙腈-磷酸(50:45);检测波长215nm;柱温35℃;流速1.0mL/min.在上述色谱条件下,槟榔碱的保留时间为17.02min,分离度良好.
