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Bc1-2家族是人参皂甙Rg1抗黑质神经元凋亡的重要调控蛋白
目的探讨Bc1-2、Bc1-x1和Bax蛋白在人参皂甙Rgl抗帕金森病(PD)小鼠模型黑质神经元凋亡过程中的可能作用. 方法 PD模型组单纯以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP )腹腔注射C57BL小鼠;预防组预先3 d腹腔注射Rg1(2.5、5.0、10.0 mg/kg),再注射M PTP,以Niss1染色、TH组织化学染色、TUNEL染色观察黑质神经元的变化;免疫组织化学染色检测Bc1-2、Bc1-x1和Bax蛋白表达. 结果 5.0和10.0 mg/kg Rg1预处理PD模型鼠能使黑质致密带(SNc)部位的Niss1和TH染色阳性神经元增多,TUNEL染色阳性率降低,以及Bc1-2和Bc1-x1表达增加,Bax表达减少. 结论 Rg1预处理对PD模型鼠黑质神经元凋元有明显的保护作用;Bc1-2 和Bc1-x1表达水平升高和Bax表达水平降低可能是Rg1抗凋亡的重要机制.
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血脂异常对C57BL小鼠巩膜顺应性的影响
目的 探讨血脂异常对C57BL小鼠巩膜顺应性的影响.方法 选用3月和8月龄C57BL雄性小鼠,按体重随机分为3组.3月龄和8月龄普食组各12只,8月龄高脂组18只.3月龄组喂养1周后处死;8月龄组喂养22周后处死;8月龄高脂组喂养4周后随机取6只处死,检测血清胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C),其余12只喂养至22周处死.各组动物检测血脂,同时取主动脉和眼球标本,经油红"O"、苦味酸天狼腥红等染色,用偏振光显微镜等进行组织学观察.结果 造模4周后8月龄高脂组的TC和LDL-C已明显升高,与3月龄普食组比较有极显著性差异(P＜0.01),确认血脂异常的动物模型.8月龄高脂组血脂指标高于3月龄、8月龄普食组,比较有显著性差异(P＜0.01).发现8月龄高脂组的主动脉和巩膜油红"O"染色有红色脂滴着染.C57BL小鼠巩膜胶原纤维主要是Ⅰ型和Ⅲ型.对Ⅰ型和Ⅲ胶原纤维的平均光密度、积分光密度、厚度及Ⅲ型/Ⅰ型胶原(Col Ⅲ/Col Ⅰ)面积比指标的检测显示,3组间Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的平均光密度无差异(P＞0.05),而积分光密度、厚度及Col Ⅲ/Col Ⅰ面积比均有差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 血脂异常引起巩膜发生类似于动脉粥样硬化的胶原纤维Ⅲ型增生,是巩膜顺应性降低的前奏.
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痹痛灵颗粒对致炎C57BL小鼠血清细胞黏附分子-1表达的影响
目的 观察中药复方痹痛灵颗粒对致炎C57BL小鼠血清可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)表达的影响.方法 给正常C57BL小鼠灌胃痹痛灵颗粒7日,末次给药后1 h,右耳正反两面均匀涂抹巴豆油合剂致炎,4 h后摘眼球取血,制备血清,用ELISA法测定sICAM-1水平.结果 痹痛灵颗粒对C57BL小鼠血清sICAM-1的升高具有抑制作用,但仅痹痛灵颗粒大剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 痹痛灵颗粒抑制血清sICAM-1的升高,是其调节免疫功能,治疗类风湿关节炎(RA)的重要机制之一.
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山茱萸总苷对刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤的保护作用
目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:将60只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、TGCOH组、TGCOM组、TG-COL组,每组10只;正常组和模型组以0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,阳性对照组给予联苯双酯150 mg/kg灌胃,TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组给予TGCO溶液460、230、115 mg/kg灌胃,1次/d,连续14 d.末次给药后2h,正常组尾静脉注射生理盐水,其余各组尾静脉注射ConA制备小鼠免疫性肝损伤模型.8h后称重,处死小鼠,计算各组小鼠肝、脾系数并取肝组织进行HE染色观察病理学变化;检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC)含量.结果:与模型组比较,各浓度TG-CO组小鼠肝组织的病变程度较轻,血清ALT、AST水平及肝组织中TNF-α、IFN-y、IL-1、IL-6、OTC含量均降低,肝组织中SOD水平升高(P＜0.05).结论:TGCO对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低转氨酶,提高抗氧化能力和抑制TNF-α、IFN-r、IL-1、IL-6生成有关.
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双歧杆菌C57BL小鼠抗辐射能力的研究
目的 探讨双歧杆菌对电离辐射损伤的防护作用.方法 选用SPF级C57BL小鼠30只,随机分成3组(每组10只):A组:正常对照组;B组:放射损伤组;C组:双歧处理组,用双歧杆菌菌悬液灌肠28 d后,然后与放射损伤组一同进行60Co γ射线一次性全身照射,形成急性放射损伤.24 h后按不同要求采集标本,对肝组织分别进行SOD和CAT活力及MDA的含量检测;用电镜观察脊神经组织细胞的超微结构;对脾脏组织用RT-PCR检测TLR2 mRNA水平的表达;并对肾脏组织用免疫组化检测bcl-2、NF-κBp65和Cytochrome C的蛋白表达情况.结果 双歧杆菌处理组肝组织中SOD和CAT水平明显高于放射损伤组(P＜0.01),同时MDA明显低于放射损伤组(P＜0.01);电镜结果显示:放射损伤组与双歧处理组的细胞浆、细胞核和线粒体均明显肿胀,双歧处理组同时具有早期凋亡现象;RT-PCR结果显示:双歧处理组TLR2 mRNA的表达明显高于放射损伤组;免疫组化结果显示:双歧处理组Cytochrome C的表达明显优于放射损伤组,而NF-κBp65和bcl-2则相反.结论 双歧杆菌可通过清除自由基、抗膜脂质氧化、提高免疫机能和诱导细胞凋亡等方式来降低辐射对小鼠的损伤.双歧杆菌具有一定的抗辐射作用.
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C57BL小鼠帕金森病模型多巴胺转运蛋白99mTc-TRODAT-1放射自显影研究
目的评价不同损毁程度C57BL小鼠帕金森病(PD)模型纹状体多巴胺转运蛋白(DAT)的变化.方法根据腹腔注射MPTP的天数将小鼠分为1、3、5和7d模型组以及对照组,静脉注射99mTc-TRODAT-16mCi,1h后处死行脑纹状体放射自显影,同时行免疫组化酪氨酸羟化酶(TH)染色.结果对照组的放射自显影可见99mTc-TRODAT-1于纹状体部位有高度放射性聚集,且两侧纹状体基本相同.注射MPTP 1d者,其纹状体的放射性浓集比对照组有所下降.注射MPTP 3、5及7d者,两侧纹状体的放射性浓集逐日降低,第7d者几乎消失.TH染色发现黑质TH阳性神经元亦随注射MPTP天数的增加而数量减少.结论不同程度损毁的C57BL小鼠PD模型可模拟PD的发展过程,99mTc-TRODAT-1作为DAT的显影剂可用于早期诊断的神经显像学研究.
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NALP3炎性体在小鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用
目的 探讨NALP3炎性体在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠发病中的作用.方法 予C57BL小鼠高脂饮食(高脂组)及脂多糖建立非酒精性脂肪肝模型(NASH组),同时设立正常饮食组作为对照.观察各组小鼠血清ALT、AST值与计算肝指数,评定脂肪性肝炎程度,ELISA法测定肝脏TNF-α水平,蛋白质印迹法测定NF-κB、NALP3、caspase-1、ASC的表达；实时荧光定量反转录-PCR检测NALP3、caspase-1、ASC mRNA的表达水平.数据处理采用单因素方差分析及LSD法.结果 NASH组小鼠ALT、AST及肝指数明显高于高脂组,差异有统计学意义(P＜0.05),高脂组和NASH组的NALP3 mRNA表达高于正常对照组(P＜0.05).NASH组caspase-1和ASC mRNA表达水平明显高于正常对照组及高脂组(P＜0.01),高脂组caspase-1和ASC mRNA表达高于正常对照组(P＜0.05).NASH组NALP3、caspase-1和ASC表达水平明显高于正常对照组(P＜0.01),NASH组NALP3、caspase-1和ASC表达水平明显高于高脂组(P＜0.05),高脂组NALP3、caspase-1和A SC表达水平与正常对照组无明显差异(P＞0.05).结论 NALP3炎性体参与胰岛素抵抗的形成,可能是影响NASH发生和发展的重要因素.
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MPTP对小鼠黑质及纹状体活性氧自由基代谢酶基因表达的影响
活性氧自由基是l-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridine.MPTP)诱发多巴胺能神经元损伤的一种可能性因素.通过MPTP注射诱导C57BL小鼠神经元损伤,利用逆转录PCR方法检测铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)三种相关基因的表达变化.结果显示,在小鼠黑质与纹状体中,MPTP导致Mn-SOD基因表达显著降低,而CuZn-SOD与GSH-PX基因的表达则没有明显变化.推测Mn-SOD基因表达的变化可能与MPTP对线粒体的毒性作用有关.
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利用消减抑制杂交技术构建MPTP诱导的C57BL小鼠全脑差异表达基因文库
本研究旨在构建1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL小鼠全脑差异表达基因文库,并获取差异表达的表达序列标签.通过MPTP腹腔注射建立C57BL小鼠帕金森病模型.利用消减抑制杂交技术建立对照组与实验组差异表达基因文库.自两文库中各随机挑选20个克隆,经反Northern杂交证实其中7个克隆为阳性.同时对上述40个克隆进行序列测定,并与已知序列基因库进行同源性比较,其中26个新基因片段向Genbank申请了序列号.
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经MPTP处理的C57BL小鼠不同脑区多巴胺转运体与甘氨酸受体基因的表达
1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对C57BL小鼠黑质多巴胺能神经元具有选择性的毒性作用,导致小鼠出现类似帕金森病的症状.利用抑制消减杂交技术分析MPTP对小鼠黑质基因表达的影响,获得了一系列差异表达基因片段,其中包括多巴胺转运体与甘氨酸受体两种与神经递质的功能与周转密切相关的基因.通过Northern杂交发现,这两种基因的表达在给药组小鼠的黑质中均下降,而在纹状体中多巴胺转运体基因的表达没有明显变化,甘氨酸受体基因的表达则有一定程度的增加.
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MPTP诱发的帕金森病小鼠模型纹状体多巴胺D2受体活性的放射自显影研究
目的观察不同损毁程度的帕金森病(PD)小鼠模型纹状体多巴胺D2受体(DR)功能变化,探讨125I-IBZMD2R功能显像的临床意义.方法根据注射MPTP(300mg·kg-1·d-1)天数的不同将小鼠分为MPTP1,3,5和7d模型组和对照组,静脉注射125I-IBZM20μCi,1h后行放射自显影.高效液相色谱-电化学法(HPLCECD)检测纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物浓度.免疫组化酪氨酸羟化酶(TH)染色观察黑质和纹状体的病理改变.结果与对照组比较,MPTP损毁1,3,5d组的纹状体/皮层感兴趣区放射活性比值分别增高8%,16%和17%,而MPTP损毁7d组与对照组无明显差异.MPTP损毁各组的纹状体DA浓度分别降低47%,75%,95%和95%.TH染色可见黑质TH阳性神经元随MPTP损毁加重而数量减少.结论MPTP损毁的PD小鼠模型纹状体D2R功能在损毁程度轻时逐渐增强,呈上调现象;而在损毁程度严重时则降至正常.表明在PD早期宜使用DR激动剂.在体动态监测纹状体的D2R功能状态有助于了解在疾病的不同阶段PD患者对多巴制剂及DR激动剂的治疗反应性.
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NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用
目的 探讨NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发病中的作用.方法 给予C57BL小鼠高脂饮食及脂多糖建立非酒精性脂肪肝模型,同时设立正常饮食组作为对照.观察各组小鼠血清ALT、AST值,HE染色评定脂肪性肝炎程度,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测NOX1、NOX4 mRNA的表达水平.结果 非酒精性脂肪性肝炎模型建立成功,NASH模型组小鼠ALT、AST及肝指数明显高于高脂(HF)组(P＜0.05),HF组NOX1、NOX4mRNA表达高于正常对照组(P＜0.05),NASH组的NOX1、NOX4mRNA表达明显高于正常对照组和HF组(P＜0.01).结论 本实验初步认为,NOX1和NOX4参与胰岛素抵抗的形成,可能是影响NASH发生和发展的重要因素.
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囊泡单胺转运体在帕金森病小鼠脑组织中的分布特征
目的:探讨囊泡单胺转运体(VMAT2)在帕金森病(PD)小鼠模型脑组织中的分布特征与帕金森病的关系.方法:使用利血平、MPTP及联合利血平和MPTP分别造成C57BL小鼠的PD模型,应用免疫组织化学方法观察VMATz和TH在黑质致密部、纹状体、腹侧被盖和蓝斑分布的变化.结果:免疫组织化学分析显示,帕金森病小鼠较对照组小鼠VMAT2和酪胺酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元细胞数目在黑质致密部明显减少,腹侧被盖和蓝斑中的阳性神经元细胞数无明显变化;VMAT2和TH在纹状体区域阳性神经元纤维明显减少;同时发现在正常对照组中VMAT2在黑质致密部中的分布既少于腹侧被盖也少于蓝斑.结论:这种对多巴胺神经元具有保护作用的VMAT2在黑质致密部中的分布少于腹侧被盖和蓝斑,黑质致密部保护作用薄弱是帕金森病黑质选择性受损的重要原因.
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吡格列酮提高C57bl小鼠胆盐肠肝循环相关基因的表达
目的:观察吡格列酮对小鼠胆盐肠肝循环转运相关基因的表达影响.方法:将16只小鼠随机分为两组:对照组(normal control,NC)、药物组(medicine,M),分别给予普通饮食、普通饮食加吡格列酮(pioglitazone)灌胃,喂养10周后处死小鼠取血、胆汁、小鼠肝脏、小肠组织,生化分析仪分析小鼠血样代谢指标,qRT-PCR技术检测各组小鼠组织内胆盐肠肝循环相关基因的表达.结果:M组小鼠胆汁中胆盐含量NC组显著升高,肝脏法尼醇X受体(famesoid X receptor,FXR)及胆盐合成相关基因胆固醇7羟化酶(eytochrome P450 enzyme7 A1,CYP7A1)、胆固醇27羟化酶(CYP7A1eytochrome P450 enzyme27 A1,CYP27A1)以及胆盐转运基因胆盐输出泵基因(bile salt export pump,BSEP)、牛黄胆酸钠转运基因(sodium/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的表达较NC组也明显升高(P＜0.01).肝脏组织免疫组化证实了M组BSEP在蛋白层面表达升高.M组小肠组织内胆盐转运基因顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(apical sodium dependent bile acid transporter,ASBT)的表达较NC组明显升高(P＜0.01).结论:吡格列酮能够诱导胆盐合成相关基因的表达,并上调胆盐在肝脏以及小肠内的转运相关基因的表达,在转录水平参与胆盐肠肝循环的调控.
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电转染血管能抑素基因对C57小鼠Lewis肺癌生长和转移的影响
目的 建立Lewis肺癌移植瘤模型,人血管能抑素(canstatin)基因重组表达载体电穿孔法转染至肿瘤局部,观察对肿瘤生长和转移的抑制作用.方法 将Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠皮下,成瘤后将30只小鼠随机分成3组,分别瘤体内注射血管能抑素重组载体、空载体和生理盐水,基因枪于注射部位电击,2周后PT-PCR法检测肿瘤组织中血管能抑素基因的表达并观察小鼠体重、肿瘤体积变化及肺转移结节数目.结果 成功建立Lewis肺癌皮下移植瘤模型;电击2周后重组载体组仍存在血管能抑素基因的表达,重组载体组小鼠肿瘤体积由(1.03±0.11)cm3增加至(1.51±0.19)cm3,而空载体组由(1.01±0.09)cm3增至(2.45±0.18)cm3、NS组由(1.02±0.10)cm3增至和(2.54±0.21)cm3;重组载体组体积与后两组比较(P＜0.01),即生长速度受到显著的抑制.重组载体组、空载体组和NS组的肺转移结节效分别为(3.50±1.24),(7.60±2.51)和(7.70±2.45);重组载体组与后两组比较(P＜0.01),即肿瘤转移亦受到显著的抑制.结论 血管能抑素可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长与转移.
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利福平保护MPTP所致PD小鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的实验研究
目的观察利福平(RFP)对1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)C57BL小鼠模型的神经保护作用.方法用MPTP建立C57BL小鼠PD模型,在应用MPTP前或后给予RFP,通过行为学观察、Nissl染色、免疫组织化学染色,观察RFP对PD小鼠模型的行为学表现及黑质致密部(SNc)Nissl、TH、Bcl-2、caspase-3阳性细胞的影响.结果小鼠注射MPTP后出现震颤、竖尾、竖毛、运动迟缓、步态不稳、肢体僵硬,活动明显减少,同时SNc的Nissl、TH阳性细胞明显减少,Bcl-2阳性细胞有所增多,caspase-3阳性细胞明显增多;应用RFP后较MPTP组症状减轻,Nissl、TH、Bcl-2阳性细胞增多,而caspase-3阳性细胞减少;预使用RFP组作用为明显.结论RFP对MPTP所致的PD小鼠中脑多巴胺能神经元凋亡具有保护作用.
关键词： 利福平 1-甲基-4-苯基 -1 2 3 6- 四氢吡啶(MPTP) 帕金森病 凋亡 C57BL小鼠 -
二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻MPTP对帕金森病小鼠的神经毒性作用
目的:探讨2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-gluco-side,TSG)对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-pheyl-1,2,3,6-tetrahydrophridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的机制.方法:实验分成三组,即健康C57BL小鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水)；模型组,连续7d给C57BL小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)制备亚急性PD模型；治疗组,在给予MPTP后1h腹腔注射TSG(60 mg/kg).爬杆实验检测小鼠的行为学变化；活性氧(reactiveoxygen species,ROS)检测试剂盒检测ROS水平；免疫荧光组织化学染色法测定黑质酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)的表达变化.结果:行为学:与对照组比较,模型组爬杆时间与转头时间明显延长(P＜0.01),而治疗组较模型组时间缩短(P ＜0.05).模型组ROS水平较对照组大幅度升高(P＜0.01),治疗组较模型组明显下降(P＜0.05).免疫荧光染色:与对照组相比,模型组TH及DAT阳性神经元的数目明显减少(P＜0.01),而治疗组TH及DAT阳性神经元数目减少的幅度明显有所下降(P＜0.05).结论:TSG对MPTP诱导的神经毒性具有保护作用,其机制可能与TSG抑制ROS有关.
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慢性氟中毒伴糖尿病小鼠红细胞形态学变化的研究
目的 探讨慢性氟中毒C57BL小鼠伴有糖尿病时红细胞的形态学变化.方法 C57BL小鼠40只,分为对照组(Ⅰ组)、高氟组(Ⅱ组)、高脂组(Ⅲ组)和高脂高氟组(Ⅳ组),Ⅰ组与Ⅲ组饮用蒸馏水;Ⅱ组与Ⅳ组给予氟化钠水溶液(100 mg/L),3个月后,Ⅰ组与Ⅱ组饮食不变,继续喂养4 w;Ⅲ组与Ⅳ组改用高脂肪饲料,继续喂养4 w后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ).4组再继续喂养4 w,分别在给药前和给药后72 h、2 w、3 w测定血糖.处理动物后检测小鼠血常规及电镜观察红细胞的形态学变化,计算红细胞变形率并进行统计学分析.结果 实验结束时,氟中毒伴糖尿病C57小鼠BL(Ⅳ组)血糖(20.35±3.40)mg/L与Ⅰ组小鼠(5.76±1.04)mg/L相比显著升高(P＜0.05);白细胞计数(1.06×109/L)低于正常值[(4~10)×109/L];红细胞计数(8.43×109/L)高于正常值;红细胞平均体积(52.3/FL)低于正常值(80~100/FL).电镜下可见,Ⅳ组小鼠溶血细胞数量增多,棘突状细胞数量增加;细胞变形率(20.6%)与Ⅰ组(3.7%)和Ⅲ组(3.3%)相比明显升高,与Ⅱ组(22.5%)相比较低.结论 机体长期处于高氟环境时,血糖显著升高,红细胞形态学损伤较为明显,若伴有糖尿病,血糖升高更为明显,细胞变形率略有下降,但是仍高于正常.
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B16黑色素瘤皮内移植瘤模型的建立
背景与目的:建立B16黑色素瘤细胞(简称B16细胞)皮内移植瘤模型. 材料与方法:制备商品源B16细胞悬液,按每只C57BL鼠接种0.1 ml(3×105个)B16细胞于后肢外侧皮内;分离、培养移植瘤源B16细胞,倒置显微镜下观察细胞形态.结果:移植瘤出现时间为(9.6±1.2)d,致瘤率为100%;皮内注射B16细胞18 d内,肿瘤形态呈圆形或类圆形,边缘清楚;移植瘤源原代B16细胞多为圆形、类圆形或短梭形,商品源B16细胞为梭形或不规则形;HE染色表明移植瘤内有大量B16细胞.结论:B16细胞皮内移植瘤模型易于对肿瘤生长的观察和测量,是早、中期肿瘤研究的合适模型之一.
