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HPLC同时测定山茱萸总苷分散片中莫诺苷和马钱苷的血浆浓度
目的:建立HPLC法同时测定大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷含量的方法,并研究山茱萸总苷分散片在大鼠血浆和各组织器官中的药动学行为.方法:Diamonsil C18色谱柱,甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长237 nm,血浆和各组织样品采用甲醇直接沉淀蛋白的方法.结果:血浆中莫诺苷和马钱苷的线性范围分别是0.612 ～ 30.6,0.921～46.0 mg· L-1；日内与日间RSD＜ 15％,回收率在90.2％ ～111.6％.大鼠单次灌胃山茱萸总苷分散片后,在血浆、胃和小肠中检测到莫诺苷和马钱苷.结论:该方法简便、快速、重复性好,适用于莫诺苷和马钱苷血药浓度测定及药动学研究.
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大孔树脂与活性炭富集山茱萸总苷的实验研究
目的:比较大孔树脂与活性炭富集山茱萸总苷的工艺条件及参数.方法:以山茱萸总苷中主要有效成分莫诺苷及马钱素为考察指标,用HPLC法测定含量,以考察大孔树脂和活性炭富集山茱萸总苷的佳工艺条件.结果:以30%及50%乙醇洗脱大孔树脂柱;以30%,50%,70%乙醇洗脱活性炭柱为佳分离工艺.结论:大孔树脂富集山茱萸总苷优于活性炭,前者对莫诺苷和马钱素的洗脱率约为96%,后者约为85%.故大孔树脂可作为相关制剂富集山茱萸总苷的首选.
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山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死大鼠心肌保护作用的影响
目的 观察山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死(acute coronary infarction,AMI)心肌线粒体保护作用及对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响.方法 采用结扎冠状动脉左前降支制备AMI大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸总苷预防给药组(总苷预防组)、山茱萸多糖治疗组(多糖治疗组)和山茱萸总苷治疗组(总苷治疗组),每组12只,除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余各给药组分别灌胃给予对应的药物治疗.进行超声心动图及血流动力学检测评价心功能;Masson三色染色法进行心肌梗死面积测定;荧光实时定量PCR法检测心肌组织线粒体发生相关基因过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(α subunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1 α)、PGC-1β、心肌细胞核呼吸因子(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)和GSK-3 p mRNA表达.结果 与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增大,心功能下降,PGC-1 α、PGC-1β和NRF-1 mRNA表达降低,GSK-3β mRNA表达升高(均P＜0.05).与模型组比较,总苷预防组、总苷治疗组和多糖治疗组心肌梗死面积缩小,心功能改善,NRF-1 mRNA表达升高,总苷预防组和多糖治疗组PGC-1α和PGC-1β mRNA表达升高,多糖治疗组GSK-3β mRNA表达降低(均P＜0.05).与总苷预防组比较,总苷治疗组短轴缩短率(fractional shortening,FS)、主动脉收缩压(aortic systolic blood pressure,SBP)升高,多糖治疗组射血分数(ejection fraction,EF)降低,总苷治疗组和多糖治疗组PGC-1α、PGC-1β及NRF-1 mRNA表达下降,多糖治疗组GSK-3β mRNA表达下降(均P ＜0.05).与总苷治疗组比较,多糖治疗组FS、EF、左室收缩末压(left ventricular end systolic pressure,LVESP)、SBP、GSK-3β mRNA降低(P＜0.05).结论 山茱萸总苷及山茱萸多糖具有改善AMI大鼠心功能、缩小心肌梗死面积、促进心肌线粒体生物合成的作用;山茱萸总苷及多糖对AMI大鼠心肌细胞线粒体保护作用可能是通过GSK-3β信号通路实现.
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山茱萸总苷抗炎免疫抑制作用及其机理的大鼠实验研究
目的 研究山茱萸总苷(COG)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的作用及其机理.方法 采用弗氏完全佐剂形成大鼠AA模型,于造模后不同时问分别测定两侧足趾肿胀度,造模24 d后,处死动物观察药物对踝关节组织病理的影响,对T淋巴细胞增殖、炎性细胞因子IL-1、TNF-α、IL-6及迟发型超敏反应(DTH)、前列腺素E2(PGE2)的作用.结果 COG对AA大鼠的原发病变和继发病变均有明显的治疗作用(P＜0.01),对造模引起的踝关节组织病理伤有明显的改善,且明显抑制AA大鼠的T淋巴细胞增殖反应和DIH(P＜0.01),抑制IL-1、TNF-α、IL-6等炎性细胞因子及血浆PGE2的产生(P＜0.01或P＜0.05).结论 COG具有较好的免疫抑制抗炎作用,其机理可能是抑制了炎性介质IL1、IL-6、TNF-α和PGE2的产生.
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山茱萸总苷对关节炎大鼠原代滑膜细胞培养上清趋化能力的影响
探讨山茱萸总苷抗类风湿关节炎的作用机理.采用改良的Boyden小室前导法检测CⅡ诱导的关节炎大鼠山茱萸总苷治疗组和模型组的原代滑膜细胞培养上清对关节浸润炎性细胞如中性粒细胞、骨髓巨噬细胞和淋巴细胞趋化能力,结果以实验组穿膜细胞数减去对照组穿膜细胞数表示.结果发现:山茱萸总苷治疗组的原代滑膜细胞培养上清对上述三种炎性细胞的趋化能力(穿膜细胞数)均显著低于模型组(P＜0.01).说明山茱萸总苷抑制关节滑膜细胞对炎性细胞的趋化,减少炎性细胞向关节滑膜的浸润是其抗关节炎作用的机理之一.
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山茱萸总苷对去势大鼠骨代谢和骨密度影响的实验研究
[目的]以去势大鼠为研究对象,通过观察骨密度和骨代谢相关的生化指标的变化以探讨"益肾养肝口服液"主药山茱萸的主要有效成分--山茱萸总苷对骨质疏松症的治疗机制.[方法]将50只Wister大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、山茱萸总苷高剂量组、山茱萸总苷中剂量组及山茱萸总苷低剂量组.造模后,山茱萸总苷组依剂量每天灌胃给药.以上各组处理60 d,第61天取血,检测血钙(Ca)、血磷(P)、雌二醇(E2).各组大鼠在灌胃满3个月后取股骨,进行骨密度实验.[结果]山茱萸总苷各剂量组雌二醇(E2)相对于模型组均明显提高,各组的血钙(Ca)、血磷(P)无明显差异.山茱萸总苷各剂量组骨密度明显优于模型组.[结论]山茱萸总苷对去势后大鼠的骨代谢和骨密度有良性调整作用.
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山茱萸总苷对小鼠免疫性肝损伤治疗作用的初步研究
[目的]研究山茱萸总苷（TGCO）对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的治疗作用及其机制。[方法] C57BL小鼠60只，随机分为正常对照组、模型组、TGCO高、中、低剂量组（920、460、230 mg/kg）和联苯双酯组（0.1 g/kg），每组10只。除正常对照组外，各组均采用尾静脉注射ConA 15 mg/kg制备急性免疫性肝损伤模型,正常对照组注射等量生理盐水。建模后2 h，正常对照组和模型组以0.02 mL/g生理盐水灌胃，阳性对照组给予联苯双酯0.1 g/kg灌胃，TGCO高、中、低剂量组分别给予TGCO溶液920、460、230 mg/kg灌胃，每6 h灌胃1次，连续给药5次。末次灌药2 h后，称质量后处死小鼠，比较各组小鼠的肝脏、脾脏系数，测定小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）及肝匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）、γ干扰素（IFN-γ）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）及超氧化物歧化酶（SOD）含量，苏木精伊红（HE）染色观察肝脏病理学变化。[结果] TGCO各剂量组和联苯双酯均能降低免疫性肝损伤小鼠增加的肝脏指数、脾脏指数（P<0.05），改善肝组织病理学变化和肝脏组织病理学分级，减轻ConA所致肝损伤的炎性反应，抑制血清ALT、AST的升高，降低肝匀浆中TNF-α、OCT、IFN-r、IL-1和IL-6含量及提高SOD的活性。[结论] TGCO对免疫性肝损伤具有一定治疗作用，并且在实验剂量范围内呈显著的剂量依赖性，其保肝机制可能与减少炎性因子的生成、抗氧化、清除自由基能力的提升以及免疫调节有关。
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山茱萸总苷及其含药血清对MSCs增殖的影响
[目的]探讨山茱萸总苷及其含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.[方法]分离、培养大鼠MSCs,分别加入山茱萸总苷及其含药血清,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度山茱萸总苷及其含药血清对大鼠MSCs增殖的影响.[结果]大鼠灌胃1h后采血所得含药血清以20％的浓度干预时具有佳的促MSCs增殖作用,山茱萸总苷佳促MSCs增殖浓度为625 μg/mL.[结论]山茱萸总苷及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖.
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山茱萸总苷干预急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的研究
目的 探讨山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,采用液状石蜡封闭法建立缺血缺氧模型,并将原代培养3 d的心肌细胞分为对照组、缺氧组(1 h、2 h、3 h、5 h)及治疗组,药物浓度为生药10 g/L,采用TUNEL法检测各组的凋亡率.结果 与对照组相比,缺氧组各时间点凋亡率明显上升,差别有统计学意义(P<0.01);与缺氧组比较,治疗组各个时间点的凋亡率都有所下降(P<0.01).结论 缺氧可以引起心肌细胞凋亡,并且随着缺氧时间的延长凋亡率上升,山茱萸总苷可以抑制心肌细胞的凋亡.
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山茱萸总苷干预急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的研究
目的 探讨山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的影响.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,采用液状石蜡封闭法建立缺血缺氧模型,并将原代培养3d的心肌细胞分为正常组、缺氧组(1h、2h、3h、5h)及药物治疗组,药物浓度采用生药10 g/L,免疫组化法检测各组caspase-9表达.结果 与对照组相比,缺氧各组caspase-9表达增加,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着时间延长,阳性表达的比例增加,5h达到高,给予山菜萸总苷干预之后,治疗组各个时间点caspase-9表达都有所下降,与缺氧组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 山茱萸总苷可以抑制caspase-9表达,通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路达到对心肌细胞的保护作用.
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山茱萸总苷中莫诺苷及马钱苷HPLC法同时测定
山茱萸总苷(Total glucisides from Comus officinalls,TGC)为山茱萸的主要药效部位,包括马钱苷、莫诺苷、獐牙菜苷和山茱萸新苷等10余种环烯醚萜苷,其中莫诺苷和马钱苷约占总苷含量的85%.
关键词： 山茱萸总苷 莫诺苷 马钱苷 正交设计法 高效液相色谱(HPLC) -
山茱萸总苷抗实验性变态性脑脊髓炎大鼠免疫作用的初步研究
目的:初步研究山茱萸总苷(TGCO)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周血清IFN-γ、sIL-2R的影响.方法:将Wistar大鼠分为3组:对照组、EAE组和TGCO组,采用动物行为学、常规HE和Luxol FastBlue(LFB)染色观察动物的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化,ELISA检测血清IFN-γ、sIL-2R的变化.结果:EAE组7/8大鼠出现典型的EAE行为学改变、CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失,血清IFN-γ、sIL-2R值分别是(118.36±12.79,41.17±4.52);而TGCO组有3/8大鼠出现EAE行为学改变,评分高为2分,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润和髓鞘明显减轻,血清IFN-γ、sIL-2R值分别是(79.60±17.56,34.86±4.21),与EAE组比较有统计学差异(P<0.05).结论:TGCO对EAE大鼠有抑制作用,可能与抑制外周血清IFN-γ、sIL-2R有关.
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山茱萸总苷对刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤的保护作用
目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:将60只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、TGCOH组、TGCOM组、TG-COL组,每组10只;正常组和模型组以0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,阳性对照组给予联苯双酯150 mg/kg灌胃,TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组给予TGCO溶液460、230、115 mg/kg灌胃,1次/d,连续14 d.末次给药后2h,正常组尾静脉注射生理盐水,其余各组尾静脉注射ConA制备小鼠免疫性肝损伤模型.8h后称重,处死小鼠,计算各组小鼠肝、脾系数并取肝组织进行HE染色观察病理学变化;检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC)含量.结果:与模型组比较,各浓度TG-CO组小鼠肝组织的病变程度较轻,血清ALT、AST水平及肝组织中TNF-α、IFN-y、IL-1、IL-6、OTC含量均降低,肝组织中SOD水平升高(P＜0.05).结论:TGCO对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低转氨酶,提高抗氧化能力和抑制TNF-α、IFN-r、IL-1、IL-6生成有关.
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山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究
目的:探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理.方法:建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎(CIA)大鼠模型,对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN-γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察.结果:山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用,特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN-γ的分泌及细胞增殖.结论:山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫.
关键词： 类风湿关节炎 动物模型 山茱萸总苷 抗CⅡ抗体 特异性T淋巴细胞增殖 -
山茱萸总苷及多糖对心肌梗死大鼠心肌炎症因子IL-6及IL-10的影响
目的:通过研究山茱萸总苷及多糖对心肌梗死大鼠心肌炎症因子白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)的影响,探讨山茱萸对急性心肌梗死大鼠心肌细胞的保护机制.方法:采用结扎大鼠冠状动脉左前降支(LAD)的方法建立急性梗死模型,术后24h存活的大鼠随机分为模型组、山茱萸总苷组和山茱萸多糖组,每组动物分别采用超声心动图(Echocardiography)评估大鼠心脏功能,采用免疫组化方法检测心肌组织炎症因子IL-6和IL-10的表达.结果:超声心动图显示:与假手术组比较,模型组左心室收缩内径(LVDs)增大,差异有统计学意义(P＜0.05),短轴缩短率(FS)和射血分数降低(P＜0.05);各药物组均能明显缩小左心室收缩内径、左心室舒张内径及左心室舒张末容积(P＜0.05);室间隔厚度,左室壁厚度在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).IL-6、IL-10表达的免疫组化结果示:假手术组中IL-6和IL-10蛋白极微量表达,模型组大鼠心肌组织IL-6和IL-10蛋白的表达较假手术组显著增强(P＜0.05),山茱萸总苷和多糖组IL-6的表达明显下降,IL-10表达明显升高,山茱萸多糖的作用更显著(P＜0.05).结论:山茱萸总苷及多糖可降低心肌组织中炎症因子IL-6的表达,山茱萸多糖可显著升高IL-10的表达,从而有效改善急性梗死后大鼠的心脏功能.
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山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响
目的:观察山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响,探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制.方法:将原代培养3d的心肌细胞采用液体石蜡封闭法建立缺氧/复氧模型,分为正常组、缺氧/复氧模型组(缺氧2h/复氧1h)及药物干预组(缺氧/复氧前24h及缺氧同时给予山茱萸总苷预处理),药物浓度分别为0.1、1.0、10 g/L..电镜下观察各组心肌细胞线粒体的形态.结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴溶解融合或有电子致密颗粒沉积,给予山茱萸总苷干预后,中、高剂量组心肌细胞超微结构损伤程度明显改善,肌纤维排列基本整齐规则、线粒体完整、嵴清晰及未见空泡形成,低剂量组与模型组差异不明显.结论:山茱萸总苷可以抑制缺氧/复氧损伤对乳鼠心肌细胞超微结构的破坏,保护线粒体,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞的保护作用.
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山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞钙超载的影响
目的:从抑制钙超载的角度探讨山茱萸总苷保护心肌细胞的作用机制.方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养方法获得正常心肌细胞并建立缺氧/复氧损伤细胞模型,实验分正常组、模型组和山茱萸总苷低中高剂量组,培养24小时后进行细胞缺氧/复氧处理,采用Fluo4-AM荧光探针检测心肌细胞胞浆内钙离子浓度;AnnexinV/PI双染法检测心肌细胞总凋亡率.结果:缺氧/复氧损伤组心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著升高(P＜0.01),山茱萸总苷低、中、高剂量可明显降低心肌组织内钙离子浓度(P＜0.05,P＜0.01);缺氧/复氧模型心肌细胞凋亡率明显升高,中、高剂量山茱萸总苷可明显降低心肌细胞凋亡率(P＜0.01).结论:山茱萸总苷中、高剂量预处理可以抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞的钙超载,可能是其抗心肌细胞凋亡,保护心肌的作用机制之一.
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山茱萸总苷对去势大鼠骨组织形态学影响的实验研究
目的 观察去势大鼠骨组织形态学的变化,探讨山茱萸总苷对骨质疏松症的干预机制.方法 将50只Wistar大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、山茱萸总苷高剂量组、山茱萸总苷中剂量组及山茱萸总苷低剂量组.复制骨质疏松动物模型,并于术后第4天开始给药,假手术组和模型组均灌服蒸馏水(20 ml/kg),山茱萸高剂量组服用量为3.56 g/kg(1.6倍等效剂量),山茱萸中剂量组为2.16 g/kg(1倍等效量),山茱萸低剂量组为1.08 g/kg(0.5倍等效剂量).各组动物灌胃容量相同,均为8 ml.每日灌胃1次,每周6次,连续灌胃3个月.各组大鼠在造模3个月后进行骨组织形态学实验.结果 去势大鼠经过不同浓度的山茱萸总苷治疗后,各组的骨小梁面积和活性成骨细胞表面均有增高,活性破骨表面下降,单标记表面、双标记表面、标记间距离、类骨质表面、类骨质宽度、矿化骨表面、矿化沉积率均显著下降.纠正矿化沉积率、矿化延迟时间无明显改变,其中以中剂量组促进骨形成作用明显.结论 山茱萸总苷对去势后大鼠的骨组织形态学指标有良性调整作用.
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山茱萸总苷对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的初步观察
目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法:Wistar大鼠24只随机分为3组:正常对照组、EAE组和TGCO组.采用动物行为学、常规苏木精-伊红染色和LFB髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化.结果:EAE组7/8只大鼠出现典型的EAE行为学改变、CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失.砌组有3/8只大鼠出现EAE行为学改变,评分高为2分,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润和髓鞘脱失明显减轻.对照组未见动物行为学和CNS病理学改变.结论:TGCO能减轻EAE大鼠的临床症状、延长潜伏期和降低发病率.
关键词： 多发性硬化 脑脊髓炎 山茱萸总苷 实验性变态反应性脑脊髓炎 -
山茱萸总苷对四氯化碳诱导的急性肝损伤的影响
目的 观察山茱萸总苷(TGCO)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠急性肝坏死的影响.方法 将Westar大鼠分为对照组(A组)、CCl,组(B组)、100 mg/kg TGCO+CCl4组(C组)和200 mg/kg TGCO+CCl4组(D组).16 h后检测各组血清ALT、AST、ALP、SOD、CAT、MDA含量及肝组织TNF-α与NF-κB-p65蛋白表达,HE染色观察病变程度.结果 与B组比较,C、D组血清ALT、AST、ALP含量下降,TNF-α与NF-κB-p65蛋白表达降低,胞质中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低,HE染色肝组织病变程度较轻,TGCO治疗呈剂量依赖性.结论 TGCO能显著减轻CCl4诱导的肝损伤,可能与TGCO抗脂质过氧化作用及抗炎症反应有关.
