首页 > 文献资料
-
针灸对心肌细胞钙超载保护机制的研究进展
钙离子(Ca2+)作为细胞内普遍存在的第二信使,其相关的信号转导通路参与了机体内多种生理活动和病理变化的信号转导,具有广泛和重要的生理学作用,但其具体机制尚未被完全阐明.目前在心肌损伤的机制研究中,钙超载学说已得到医学学术界的公认,越来越多的研究证明钙超载是引发心肌细胞损伤的重要原因之一.笔者查阅了近10年国内外相关的文献资料发现,针灸对心肌细胞钙超载的保护机制主要有细胞膜Ca2+转运途径、肌浆网膜Ca2+转运途径及线粒体途径(即能量代谢途径)等.
-
针刺预治疗改善缺血性心律失常的临床意义及其可能机制
本文对近年来国内外有关心肌细胞内钙、心肌细胞连接因子、心肌缝隙连接电导特性与心律失常发生的关系以及上述因素在介导针刺预治疗抗缺血性心律失常作用中可能扮演的角色的研究进行了回顾和分析,具体内容包括针刺预治疗在防治心肌缺血性损害中的临床意义,针刺对交感神经的影响及其与缺血预处理的相似性,针刺与缺血性心律失常中钙离子、缝隙连接以及电导特性的关系等,试图为针刺预治疗改善缺血性心律失常的机制研究提供可能的线索,进一步为针灸防治缺血性心律失常开辟一条可能的新途径.
-
当归芍药散防治老年期痴呆的物质基础与作用机理研究Ⅵ--当归芍药散精简方含药脑脊液对PC12细胞的保护作用
目的:通过观察当归芍药散精简方(FBD)含药脑脊液对不同因素所致的PC12细胞损伤模型的保护作用,来探讨当归芍药散精简方(FBD)防治痴呆的作用机理.方法:以MTT法观察FBD含药脑脊液对谷氨酸、过氧化氢、连二亚硫酸钠和氯化钾造成的PC12细胞损伤模型中细胞存活率的影响.结果:连续多次给药(1.62g生药·kg-1)后0.5h～2.5h的FBD含药脑脊液对过氧化氢损伤的PC12细胞均有明显保护作用(P＜0.05～0.01),其中以1.5h的FBD含药脑脊液保护作用明显;该时间点FBD含药脑脊液对谷氨酸、连二亚硫酸钠和氯化钾造成的PC12细胞损伤模型亦有显著保护作用,且随脑脊液添加量增加保护率捉高.结论:FBD含药脑脊液对PC12细胞损伤有显著保护作用,其机制与抑制细胞内钙超载、对抗自由基的氧化损伤和谷氨酸的兴奋性毒性等有关.
关键词： 当归芍药散精简方(FBD) 脑脊液 PC12细胞 钙超载 -
丹参酮ⅡA抗心肌细胞氧化应激作用及抗增殖蛋白功能研究
目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其对抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)表达的影响,研究PH B蛋白在心肌细胞氧化应激中的作用.方法:实验组分为正常对照组、氧化应激组、丹参酮ⅡA高、中、低剂量组、siRNA组、siRNA +氧化应激组、siRNA阴性对照组.采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200 μmol·L(-1)过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激损伤,心肌细胞在氧化应激前给予丹参酮ⅡA(1×10-4,5×10-5,1 ×10-5mol·L(-1))预先干预24 h.采用PHB特异性的siRNA干扰心肌细胞PHB蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率、[ca2+]i及心肌细胞线粒体膜电位的变化,Western blotting检测PHB蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,氧化应激组心肌细胞经200 μmol· L(-1)过氧化氢作用2h后,PHB蛋白表达显著增加,细胞内游离钙浓度、凋亡率显著增高,线粒体膜电位显著降低.与氧化应激组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度及细胞凋亡率,增加线粒体膜电位,降低PHB蛋白表达水平.与siRNA阴性对照组比较,siRNA组心肌细胞内PHB蛋白表达可被显著抑制,且细胞内游离钙浓度和细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著降低.结论:PHB蛋白在心肌细胞氧化应激中可代偿性增加,对心肌细胞具有保护作用.丹参酮ⅡA可减少氧化应激损伤心肌细胞内PHB蛋白表达,其机制可能与丹参酮ⅡA减轻心肌细胞氧化应激损伤从而减少心肌细胞自身代偿性作用有关.
-
红景天在心肌缺血再灌注损伤中保护机制的研究进展
心肌缺血再灌注损伤是一种因氧化应激反应亢进而进一步加重缺血心肌损伤,甚至发生心肌不可逆性损伤的病理过程,严重威胁着人们的生命.红景天是颇具潜力的保护心肌缺血再灌注损伤的中药,关于其保护心肌缺血再灌注损伤作用的相关研究报道较多.本文从红景天保护心肌缺血再灌注损伤的作用机制出发,对红景天保护心肌缺血再灌注损伤相关研究进行归纳,包括抗氧化作用、减轻钙超载作用、抗炎症反应作用、减轻能量代谢障碍作用、抑制心肌细胞凋亡的作用,为红景天在心肌缺血再灌注损伤保护机制的相关研究提供参考.
-
葱白提取物预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤和心肌细胞内游离钙浓度的影响
目的:探讨葱白提取物(FOB)抗大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤和减少心肌细胞内Ca~(2+)的增加.方法:利用Langendorff心脏灌流系统建立大鼠离体心脏I/R模型,采用激光扫描共聚焦显微镜,借用Flno-3/AM荧光染色技术观察心肌细胞内Ca~(2+)强度.结果:①FOB对大鼠离体心脏I/R损伤具有明显的保护作用,随FOB剂量的增加,使左室发展压(LVDP)的恢复更加接近缺血之前的水平,再灌注痉挛度更加减轻.心脏从缺血后恢复跳动更迅速,心律失常的发生越来越少,与I/R组相比,100g/L FOB使LVDP的恢复从(20.3±2.8)%增加到(94.8±6.4)%(P<0.01),再灌注痉挛度从(89.2±9.7)mmHg减轻为(10.2±3.1)mmHg(P<0.01).②FOB使I/R损伤后心室肌细胞内Ca~(2+)染色荧光强度明显减少,随着FOB浓度增高,减少细胞内Ca~(2+)的作用更加强烈.与I/R组相比.100g/L的FOB使心肌细胞内Ca~(2+)染色荧光强度从(144.8 ±16.4)减少到了(50.8±11.61)(P<0.01),表明FOB具有减少I/R中细胞内钙超载作用.结论:FOB能抗大鼠离体心脏I/R损伤,可能原因是FOB减轻I/R后心肌细胞内游离钙浓度的增加.
-
通脉宁胶囊对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖及相关因素的影响
目的:观察通脉宁全方及拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌增殖及相关因素的影响.方法:组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学方法,制备通脉宁全方、益气拆方、活血拆方三组药物血清;AngⅡ作为刺激因子.应用流式细胞仪检测VSMC周期,采用Fluo-3染色荧光探针标记测定钙离子荧光强度,检测NO含量及NOS酶活力.结果:通脉宁全方及拆方药物血清可明显降低VSMC的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比;减弱细胞内钙离子荧光强度;增加细胞培养液中NO含量及NOS酶活力.通脉宁全方作用优于益气拆方和活血拆方.结论:通脉宁药物血清抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖与部分阻断细胞内的信号转导途径、增加NO含量及NOS酶活力等因素有关.
-
益心泰对慢性心力衰竭大鼠心肌钙超载及肌浆网钙泵的影响
目的 探讨益心泰对慢性心力衰竭大鼠钙超载及肌浆网钙泵的影响.方法 60只健康Wistar雄性大鼠,分为五组:模型组10只、益心泰高剂量组10只、益心泰中剂量组10只、益心泰低剂量组10只和培哚普利组10只,另设没有进行造模处理的正常对照组10只,一共为6组.实验动物每天上午按下列剂量灌胃给药1次:正常组不进行药物干预;模型组灌服同等容积的生理盐水;益心泰丸高剂量组灌服10.5g/(kg·d);益心泰丸中剂量组灌服5.5g/(kg·d);益心泰丸低剂量组灌服2.5g/(kg·d);培哚普利组灌服4.5g/(kg·d),均每日1次.共用药4周.观察心肌重构指标、心肌组织内钙含量、肌浆网钙泵的活性.结果 与正常对照组比较,模型组[Ca2+ ] i浓度明显升高,SERCA2a明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,益心泰低、中、高剂量组和培哚普利组[Ca2+ ] i浓度均降低,SERCA2a明显升高,差异有统计学意义( P＜0.05 ).而益心泰高剂量组与培哚普利组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益心泰可能通过抑制心衰大鼠CaN活性及心衰大鼠CaN及NFAT3的蛋白表达,从而抑制心肌重构,改善心衰.
-
参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞损伤的影响
目的探讨参麦注射液对缺氧/缺糖/复氧诱导神经细胞凋亡及胞浆内游离钙的影响,阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制.方法用孕17～18 d的SD胎鼠大脑皮层作原代神经细胞培养,制作缺氧/缺糖/复氧致神经细胞损伤模型,采用AnnexinV/PI双染色法以流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率;FIuo-3负载,流式细胞仪定量分析胞浆内游离钙的变化.结果参麦注射液能降低缺氧/缺糖/复氧原代培养神经细胞的凋亡率和胞浆内游离钙浓度.结论参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力,抑制细胞内钙超载,从而减轻凋亡有关.
-
黄芪注射液对左室肥厚大鼠心肌钙超载及肌浆网钙泵表达的影响
目的:探讨黄芪对压力过载致左室肥厚大鼠心肌钙含量及肌浆网钙泵(SERCA2a)表达的影响.方法:采用缩窄腹主动脉法制备压力过载性心肌肥厚模型.大鼠随机分为假手术组,模型组,低、中、高剂量黄芪组(5,10,20 g·kg-1·d-1)和卡托普利组(0.05 g·kg-1·d-1).造模后第13周开始灌胃给药,连续12周.测定大鼠左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)和心肌钙含量的变化(原子吸收光谱法),并检测(RT-PCR,Western blot)大鼠左室组织肌浆网钙泵的表达.结果:黄芪呈剂量依赖性抑制模型大鼠左室质量指数的增加(P<0.01,P<0.001),其中高剂量黄芪作用与卡托普利相似;黄芪能抑制肥厚心肌组织钙超载(P<0.01);与假手术组相比,心肌肥厚大鼠左心室SERCA2a基因表达下调(P<0.05),高剂量黄芪使之表达上调(P<0.05),而卡托普利对其表达无明显影响.结论:黄芪对大鼠压力过载性心肌肥厚的抑制作用可能与其减轻心肌钙超载及上调心肌SERCA2a基因表达有关.
-
三七总皂苷对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响
目的:研究三七总皂苷对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo-3荧光探针标记测定钙离子荧光强度.结果:AngⅡ(10-7 mol·L-1)孵育48 h后心肌细胞凋亡明显多于对照组;三七总皂苷(25,50,100 mg·L-1)组心肌细胞活力显著高于 AngⅡ组;三七总皂苷(50 mg·L-1)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组;三七总皂苷(50 mg·L-1)组心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组.结论:三七总皂苷对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制心肌细胞内钙超载有关.
-
枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响
目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响.方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6 h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6 h.MTT法检测细胞活力.以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou-3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响.加入终浓度60 mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响.结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50 μg·mL-1LbGp为明显,[Ca2+]i明显减少.枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100 μg·mL-1 LbGp且呈现量效关系.结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载.亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载.机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道.
-
钙超载与心肌缺血再灌注损伤及中药干预策略
据国家心血管病中心近发布的报告显示,心血管病占居民疾病死亡构成的40％以上,为我国居民的首位死因,其中冠心病死亡率在逐年上升.血运重建能快速打开堵塞血管、恢复冠脉血供,成为治疗冠心病的重要手段.但是血运重建也只是一种局部治疗,并不能终止冠心病的病理发展进程,加之治疗后出现的一系列再灌注损伤,严重制约了冠心病的治疗效果.心肌缺血再灌注损伤是个复杂的病理过程,与氧自由基、钙超载、能量代谢障碍等密切相关.再灌注时可见心肌细胞内钙超载,而钙超载亦可通过多种机制造成心肌细胞进一步损伤.钙超载是心肌细胞损伤和死亡的共同通路,故防治钙超载是阻止I/R的重要举措.临床常用的钙通道阻滞剂防治钙超载取得很大进展,它们均能作用于血管平滑肌的L型Ca通道从而抑制钙超载,但也有因其作用靶点单一而副作用大的不足,故临床应用受到一定限制.中医药是个伟大的宝库,其中不少药物具有类似钙拮抗作用,开发应用此类药物弥补西药治疗的不足成为当代中医人的重要任务.
-
硫化氢对氧糖剥夺／复氧诱导小鼠脑皮层神经元损伤的体外观察
目的：探讨硫化氢（ H2 S）对氧糖剥夺/复氧（ OGD/R）诱导神经元损伤的影响。方法小鼠皮层神经元用无糖厄尔氏平衡盐溶液（EBSS）于2％ O2、5％ CO2、93％ N237℃培养4h，换用neurobasal ＋B27培养基于37℃5％CO2培养箱中继续培养12h，建立OGD/R模型。以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率；用fura-2/AM和显微荧光成像系统检测神经元胞质钙离子浓度（[Ca2＋]i）；利用比色法检测乳酸脱氢酶（ LDH）释放率；碘化丙啶（ PI）染色检测细胞损伤。结果200、300与600μmol/L NaHS预处理30min再OGD/R，神经元存活率显著提高（n＝4）；300μmol/L NaHS预处理后再OGD/R，[Ca2＋]i（n＝5）、LDH释放率（ n＝4）和细胞损伤率（ n＝6）均低于OGD/R组，且使用10μmol/L钙螯合剂BAPTA也降低OGD/R诱导的LDH释放率和细胞损伤率。结论 H2 S减轻OGD/R所致皮层神经元损伤，其机制与H2 S抑制OGD/R诱导神经元钙超载有关。
-
缺血再灌注损伤与细胞信号转导
短暂的缺血会对器官造成损伤,但是在恢复灌注后,损伤反而进一步加剧,这种现象称为缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI).临床上涉及缺氧/复氧过程的手术都不可避免地会发生IRI,比如重大器官的移植、冠脉搭桥、溶栓术等.IRI一直是医学研究的热点,近年来研究发现,缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)时,钙超载、供能不足和氧自由基的大量产生等理化因素刺激细胞,诱发信号介导的细胞损伤、凋亡是造成IRI的一个重要原因.本文就IRI与信号通路的研究进展做简要综述.
-
颅脑损伤
一、概述 颅脑损伤分为闭合性脑损伤与开放性脑损伤，包括头皮损伤、颅骨骨折、脑损伤及颅内血肿，按脑损伤的病理改变，又可分为原发性和继发性脑损伤。原发性脑损伤包括脑震荡、脑挫裂伤、弥漫性轴索损伤和脑干损伤；继发性脑损伤主要为缺血、缺氧、脑水肿、颅内出血及脑疝引起。 二、发病机制 1．直接暴力头部受外力直接作用，可分为加速性、减速性、挤压性及旋转性四种方式。 2．间接暴力外力作用于身体其他部位再传导至头部，可分颅颈连接处、挥鞭样及胸部挤压伤三种。 3．继发性脑损伤的生物化学改变。 (1)兴奋性氨基酸毒性作用动物实验证明，脑损伤可引起大量兴奋性氨基酸，主要为谷氨酸(Glu)、天门氨酸产生等。近年临床上用脑微量透析法，发现严重脑损伤的脑组织中Glu增高数倍至数十倍，脑损伤越重，Glu越高，故认为Glu增加可损害神经元。动物实验显示应用NMDA受体拮抗剂，如镁离子、东莨菪碱、或亚胺马来酸盐(MK-801)等可减轻Glu增高的损害反应。 (2)钙超载脑损伤时NMDA受体开放Ca2＋通道，Ca2＋大量流入细胞内致钙超载。钙超载使磷酸脂酶(PLC)、蛋白激酶和一氧化氮合成等活性增高。PLC活性增高使细胞膜磷脂分解为花生四烯酸，则细胞膜的血脑屏障破坏而发生脑水肿。花生四烯酸再降解成血栓素、前列环素及白三烯，使血管收缩和血小板凝集、导致局部脑微循环障碍而缺血和脑水肿加重。蛋白激酶活性过高，则影响三磷酸腺苷的产生和细胞能量代谢。一氧化氮合成活性增高使NO产生增加，并扩散至邻近神经细胞和胶质细胞，使DNA断裂或合成抑制。因此，钙超载导致神经细胞功能障碍和凋亡。应用尼莫地平、丹参等钙通道阻滞剂可以减少Ca2＋内流，减轻脑血管痉挛，增加脑血流。
-
热打击对人骨骼肌细胞通透性、细胞骨架及细胞周期的影响
目的 研究热打击对培养人骨骼肌细胞(HSKMC)通透性、细胞骨架及细胞周期影响.方法 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响,考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响,流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变.结果 给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1h后,43℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63,37℃对照组中位数为22.98.同对照组相比,随着热打击程度加强,显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维.骨骼肌细胞在热打击情况下,各组G0/G1期DNA含量在44.13～62.98之间,与正常对照组对比,当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA含量明显高于对照组,培养第18小时恢复才同对照组基本相同.结论 热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应,导致细胞内钙超载.可改变HSKMC骨架结构,使骨架失去正常的网状有序排列结构,间隙增大.细胞周期出现阻滞,细胞被阻滞在G0/G1期.
-
不同光动力剂量对C6胶质瘤细胞胞内游离钙的影响
目的研究不同剂量光动力作用后 C6胶质瘤细胞内游离钙 [Ca2+ ]i的变化,探讨钙超载在光动力诱导 C6胶质瘤细胞坏死和凋亡过程中的作用. 方法常规培养 C6胶质瘤细胞,以不同光动力剂量处理对数生长期的实验组细胞后,应用 Fluo- 3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定各组 C6胶质瘤细胞内游离钙的变化; MTT法检测各组细胞的死亡率. 结果光动力作用后 C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高,平均胞内钙离子浓度和细胞死亡率随着光动力剂量增加而增大. 结论光动力作用后 C6细胞钙超载在光动力诱导肿瘤细胞坏死和凋亡过程中起重要作用.
关键词： 光动力治疗法 C6胶质瘤细胞 钙超载 Fluo- 3/AM -
声动力治疗中钙超载机制的研究
目的 探讨声动力诱导C6胶质瘤细胞凋亡中钙超载现象及部分机制.方法 将对数期生长的C6胶质瘤细胞(4×104个/ml)放入试管中,每管5ml.实验分对照组、HMME、超声组和声动力治疗组.采用流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分析仪检测细胞内钙离子水平,加入钙离子拮抗剂观察凋亡率的变化；采用免疫印迹的方法观察各组中钙离子ATP酶(SERCA)的表达水平,并分析钙离子的来源.结果 声动力治疗组细胞内钙离子浓度为(224.26±10.24) nm,较其他组明显升高,加入钙离子拮抗剂后其细胞凋亡率明显降低,声动力组SERCA2表达明显降低.结论 声动力诱导部分作用机制是细胞内出现钙超载现象,其原因可能是声动力对内质网SERCA2的破坏,进一步导致钙离子水平升高,引起凋亡反应所致.
-
血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞凋亡机制的研究
目的 探讨血卟啉甲醚-光动力学疗法(PDT)诱导C6胶质瘤细胞的凋亡机制.方法 常规传代培养C6胶质瘤细胞系,取处于对数生长期细胞按实验要求分组接种于96孔培养板上,应用光敏剂血卟啉甲醚,以不同照光剂量(40、80、120、160、200、240、280和320 J/cm2)处理C6胶质瘤细胞.MTT法检测不同照光剂量的细胞死亡率;电镜观察PDT后C6细胞形态学变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定不同照光剂量作用后C6胶质瘤细胞内[Ca2+]i.结果 PDT组对C6胶质瘤细胞死亡率影响显著,照光剂量与细胞死亡率正相关,随照光剂量增加,细胞死亡率逐渐增大,当达到能量密度大于200 J/cm2时,细胞死亡率不再明显增加.PDT作用后早期出现一定数量凋亡的C6胶质瘤细胞和多数线粒体、内质网等亚细胞结构肿胀.PDT作用晚期可见大量坏死细胞和部分凋亡细胞.PDT作用后C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高.结论 血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡,钙超载在广泛超微结构损伤中起重要作用.
