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针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体通路研究进展
目的：探讨针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体细胞信号转导机制，为后续研究提供思路。方法：通过对近年来国内外有关线粒体心脏损伤的研究入手，分析针灸防治心肌缺血再灌注损伤的线粒体通路的研究进展。结果：研究多以大鼠为观察对象，主要从针刺改善线粒体功能，减少线粒体活性氧类（ROS）产生过量引起氧化应激，防止细胞内 Ca2＋超载和阻止线粒体通透性转换孔（mPTP）的开放等角度切入研究。结论：微小 RNA（microRNA，miRNA）是基因网络、蛋白网络、代谢网络等的上游网络的调控环节。鉴于针灸作用的整体性特点，将 miRNA 引入针灸作用机制研究领域，可在基因或其他水平层面更好地揭示针灸作用机制。
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夏枯草对人甲状腺髓样癌细胞增殖的影响和诱导其凋亡的作用机制
目的:探索夏枯草对人甲状腺髓样癌(TT)细胞增殖和诱导其凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:采用MTT比色法测定2～200mg/mL夏枯草作用24h对TT细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术(Annexin V-FITC/PI联合标记)观察0.425、0.850、1.700、3.400、6.800mg/mL夏枯草作用24h TT细胞凋亡的影响;采用流式细胞术(JC-1荧光染色)观察0.425、0.850、1.700、3.400、6.800mg/mL夏枯草作用24h对TT细胞线粒体膜电位变化的影响;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定1.700、3.400mg/mL夏枯草作用24h对TT细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果:在2～200mg/mL的浓度范围内夏枯草作用24h对TT细胞增殖有明显抑制作用(P＜0.05),IC50值为3.438mg/mL.流式细胞术检测结果显示夏枯草可诱导TT细胞凋亡,0.425、0.850、1.700、3.400、6.800mg/mL组TT细胞总凋亡率,与对照组相比明显升高(P＜0.05);夏枯草可影响TT细胞线粒体膜电位变化,与对照组相比,0.425、1.700、3.400、6.800mg/mL组TT细胞线粒体膜电位显著降低(P＜0.05);与对照组相比,1.700、3.400mg/mL夏枯草作用24h胞浆内细胞色素C(Cyto C)表达增多(P＜0.01),抑制凋亡蛋白Bcl-2和Caspase-3原蛋白表达减少(P＜0.05,P＜0.01).3.400mg/mL组活化的Caspase-3表达显著增多(P＜0.01).结论:夏枯草能抑制Tr细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化线粒体凋亡通路有关.
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益胃汤对初老雌性大鼠卵巢细胞凋亡线粒体通路的影响
目的 探讨益胃汤延缓初老雌性大鼠卵巢机能衰老的机理.方法 4~6月龄雌性SD大鼠为正常对照组;10~12月龄、阴道细胞学表现动情期延长的雌性SD大鼠作为初老大鼠模型,随机分为益胃汤高剂量组、益胃汤中剂量组、益胃汤低剂量组、己烯雌酚组、模型对照组.灌药4周后,取左侧卵巢用于检测卵巢Bcl-2、Bax、Caspase3、细胞色素C.结果 与模型对照组比较,益胃汤可使卵巢Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比例增加(P<0.05),Caspase表达减少,细胞色素C减少,卵巢细胞凋亡减少,但达不到正常对照组水平(P＞0.05),且益胃汤高、中、低剂量组在实验中呈现一定的量效关系.结论 益胃汤通过抑制线粒体通路引起的级联反应抑制初老雌性大鼠卵巢细胞凋亡,这可能是其延缓卵巢机能衰老的机理之一.
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流体剪切力抑制肿瘤坏死因子α诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的实验研究
目的 研究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的影响.方法 将MC3T3-E1分为TNF-α干预组(实验组)和无TNF-α干预组(对照组),TNF-α(10 ng/ml)×4 h诱导MC3T3-E1凋亡后,四个实验组分别加载12 dyn/cm2 FSS作用0,15,30,60 min.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜和流式细胞技术(FΑCS)检测细胞的增殖能力和凋亡,免疫印迹法检测半胱氨酸蛋白激酶9(caspase 9)和凋亡蛋白酶活化因子1(Αpaf-1)蛋白的表达.采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果 TNF-α(10 ng/ml)×4 h能诱导明显的凋亡信号,FSS(12 dyn/cm2)能明显抑制这种凋亡,而且随着刺激时间的增加,从0 min逐渐延长至60 min,细胞活性逐渐增加,凋亡细胞数逐渐减少,实验组与对照组单因素方差分析及各组间LSD两两比较有显著性差异(P＜0.05),同时caspase 9和Αpaf-1蛋白的表达也逐渐增加.结论 生理范围的FSS能够抑制TNF-α诱导的MC3T3-E1细胞的凋亡,作为线粒体通路的关键蛋白,caspase 9和Αpaf-1在凋亡时增加而FSS后表达减少,说明FSS抑制这种凋亡至少部分是减弱了凋亡的线粒体通路.
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DCLAK11经线粒体通路诱导非小细胞肺癌细胞凋亡研究
目的 DCLAK11是一种新型小分子酪氨酸激酶抑制剂,可显著抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung canc-er,NSCLC)细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制值得深入探究.本研究探讨DCLAK11是否通过线粒体凋亡通路发挥抗肿瘤作用.方法 细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)检测细胞存活率;AnnexinⅤ-PI染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)染色检测线粒体膜电位;蛋白质印迹法检测Bcl-2家族蛋白Bcl-xL、Bax、Bid、Bim、Bad和Cleaved Caspase-9表达水平.结果 DCLAK11可抑制NSCLC细胞HCC827(IC50=10 nmol/L)和HCC4006(IC50=20 nmol/L)增殖,且抑制作用具有浓度依赖性.AnnexinⅤ-PI染色结果显示,当给予不同浓度DCLAK11处理48 h后,HCC827细胞凋亡率分别为(34.90±6.22)％、(49.33±10.42)％、(53.77±4.55)％和(62.87±3.19)％,与对照组比较差异有统计学意义,F=29.990,P<0.001;HCC4006细胞凋亡率分别为(12.36±2.80)％、(21.38±3.28)％、(32.14±6.44)％和(33.53±8.32)％,与对照组比较差异有统计学意义,F=46.439,P<0.001.JC-1染色结果显示,DCLAK11增加HCC827和HCC4006细胞中去极化细胞比例,与对照组比较差异均有统计学意义(F=63.910,P<0.001;F=11.831,P=0.001).蛋白质印迹法结果显示,DCLAK11增加HCC827和HCC4006中Bcl-2家族促凋亡蛋白Bid、Bim、Bad和Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-xL表达及Bcl-xL/Bax比值,以及上调Cleaved Caspase-9表达.结论 DCLAK11通过线粒体凋亡通路发挥对 NSCLC 细胞的抗肿瘤作用.
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Disulfiram联合铜对B淋巴细胞白血病细胞株增殖与凋亡影响机制探讨
目的 研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用,JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相关蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)的表达变化.结果 0.5 μmol/L Cu作用24h后对nalm6细胞的增殖抑制率为(6.39±4.93)％,与对照组比较差异无统计学意义,t=-2.244,P=0.154.而不同浓度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu对nalm6细胞均具有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为(22.29±6.69)％、(48.66±11.58)％、(50.83±12.61)％、(59.24±9.43)％、(62.74±9.17)％、(66.7±7.63)％、(72.13±7.94)％和(77.86±5.43)％,与对照组比较差异均有统计学意义,P值均＜0.05;24 h的IC50为(0.18±0.08) μmol/L.Annexin V/PI检测细胞凋亡结果显示,0.5 μmol/L Cu作用24 h后nalm6细胞的凋亡比例为(7.82±5.13)％,与对照组(8.34±6.23)％比较差异无统计学意义,t=0.112,P=0.916.而不同浓度的DS/Cu对nalm6细胞均具有显著的诱导凋亡作用,0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L的DS联合Cu(0.5 μmol/L)作用24h后的凋亡率分别为(17.84±7.68)％、(31.39±5.86)％、(60.41±13.87)％、(69.26±13.29)％和(81.37±12.72)％,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.05.JC-1法检测线粒体膜电位变化结果显示,单药Cu(0.5μmol/L)组的JC-1多聚体/单体比值为1.12±0.09,与对照组(0.90±0.13)比较差异无统计学意义,t=-2.442,P=0.071.不同浓度的(0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu组处理nalm6细胞12 h后,线粒体膜电位水平明显降低,表现为JC-1多聚体/单体比值随浓度的增加而逐渐降低,分别为1.4±0.32、0.32±0.13、0.14±0.09、0.1±0.02和0.06±0.005,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.001.蛋白质印迹法显示,DS/Cu处理nalm6细胞12 h后能下调Bcl-2及Bcl-xl蛋白的表达.结论 DS/Cu对BALL具有增殖抑制及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过线粒体通路实现的.
关键词： 双硫仑 铜 nalm6 线粒体通路 急性B淋巴细胞白血病 -
三七皂苷R1对CD34+人急性髓系白血病细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响
目的 研究三七皂苷R1对CD34+人急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响.方法 将CD34+ AML细胞Kasu-mi-1分为对照组和低、中、高剂量实验组.低、中、高剂量实验组分别用10,20,40μmol·L-1三七皂苷R1处理,对照组加等量生理盐水处理.分别用溴化四唑蓝(MTT)法、JC-1染色法检测细胞增殖及细胞线粒体膜电位,用蛋白免疫印迹法测定细胞中线粒体通路相关蛋白表达.结果 培养12,24,36,48 h后,实验组细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05),且随三七皂苷R1浓度的升高细胞存活率逐渐降低(P＜0.05).低、中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较对照组降低(均P＜ 0.05);中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较低剂量实验组降低(均P＜0.05).对照组和低、中、高剂量实验组Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.96±0.15,0.67±0.22,0.41±0.12,0.22±0.09,Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为0.72±0.26,1.33±0.35,1.71±0.39,2.09±0.53,低、中、高剂量实验组细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组(均P＜0.05),实验组随三七皂苷R1浓度的升高Bcl-2蛋白相对表达量逐渐降低,Bax蛋白相对表达量逐渐升高(P＜0.05).结论 三七皂苷R1可抑制CD34+人AML细胞增殖,可能是通过激活线粒体通路促进细胞凋亡而发挥作用的.
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壁虎活性多肽对线粒体通路诱导的人食管癌Ec 9706细胞增殖与凋亡的影响
目的 研究壁虎活性多肽(GAP)对人食管癌Ec 9706细胞的增殖与凋亡的影响.方法 将7个不同质量浓度(0.3,1,3,10,30,100和300μg·mL-1)的GAP处理Ec9706细胞48 h,以CCK8法检测细胞增殖水平,根据CCK8的结果,将细胞分为4组:对照组(不加药)和低、中、高3个剂量(GAP:15,30,60μg·mL-1)实验组.用流式细胞仪检测Ec 9706细胞的凋亡率;用蛋白免疫印迹法检测细胞线粒体凋亡通路B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)蛋白的表达情况.结果 GAP在24,48 h的IC50分别为70.2和54.6μg·mL-1.处理48 h后,对照组和低、中、高3个剂量实验组凋亡率分别为(6.24±1.73)％,(35.40±6.33)％,(50.60±8.61)％和(84.70±8.89)％,3个剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).这4组的Bax蛋白相对灰度值分别为0.55±0.07,0.61±0.06,0.77±0.11和1.07±0.14;这4组的Bcl-2蛋白相对灰度值分别为0.80±0.13,0.54±0.11,0.36±0.04和0.11±0.03;这4组的Caspase3蛋白相对灰度值分别为0.45±0.05,0.51±0.09,0.92±0.12和0.98±0.16.3个剂量实验组与对照组比较,以上各指标的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 GAP可以显著抑制食管癌Ec 9706细胞增殖,并且诱导细胞凋亡,其机制与其调控线粒体凋亡通路相关蛋白表达有关.
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没食子酸乙酯通过线粒体通路诱导人结肠癌Lovo细胞凋亡的机制研究
目的 研究没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人结肠癌细胞Lovo凋亡的影响并探讨相关机制.方法 以体外培养的Lovo细胞作为研究对象,采用倒置显微镜观察细胞生长的变化、Annexin V-FITC/P1双染法和DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳法检测没食子酸乙酯的凋亡诱导作用;采用免疫细胞化学法检测cleaved caspase-3,cleaved caspase-9蛋白的表达.结果 没食子酸乙酯可明显抑制Lovo细胞生长,倒置显微镜下观察到细胞密度明显降低:各用药组的细胞凋亡率随着药物浓度升高而升高:DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显DNA梯状条带:各用药组细胞cleaved caspase-3,cleaved caspase-9基因蛋白阳性表达率明显升高.结论 没食子酸乙酯可通过上调cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白的表达,激活线粒体通路从而促进Lovo细胞凋亡,这是没食子酸乙酯发挥其抗癌作用的重要机制之一.
关键词： 没食子酸乙酯 凋亡 线粒体通路 人结肠癌细胞LoVo -
异土木香内酯通过线粒体和PI3K/AKT通路诱导MCF-7细胞凋亡的研究
目的 研究异土木香内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用与PI3K/Akt通路和线粒体通路的关系.方法 本实验采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法考察了异土木香内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用,并将2种方法所测结果进行拟合比较;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察给药24h后诱导细胞凋亡的变化;透射电镜观察异土木香内酯给药24h后细胞超微结构的变化;罗丹明123荧光标记,激光共聚焦扫描显微镜检测异土木香内酯对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响;Western blot检测异土木香内酯给药后对MCF-7细胞内Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt蛋白表达的影响;活性比色法检测给药后细胞内caspase-3活性的影响.结果 异土木香内酯对MCF-7细胞具有较好的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,MTT法与SRB法测得的IC50分别为15.21和14.908 μg·mL-1,拟合结果基本吻合;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态发现,异土木香内酯可以诱导MCF-7细胞发生凋亡,随给药剂量增加,细胞核形态均发生不同程度的改变;透射电镜结果显示,不同给药剂量下,细胞出现了典型的细胞凋亡早、中、晚期特征;机制研究表明,异土木香内酯可以通过PI3K/Akt途径和线粒体途径共同诱导MCF-7细胞凋亡.异土木香内酯作用于癌细胞后,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,使位于胞质的促凋亡蛋白Bax表达增加并转位于线粒体,同时,降低Akt的磷酸化(p-Akt)水平,导致线粒体膜电位紊乱,使线粒体膜通透性和完整性遭到破坏,通过一系列变化,使caspase-3活性被激活,终诱导细胞凋亡.结论 异土木香内酯对乳腺癌MCF-7细胞具有较好的抗增殖活性,其对MCF-7抗增殖活性可通过诱导细胞凋亡来实现,PI3K/Akt途径和线粒体途径是其诱导细胞凋亡的途径之一.
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果蔬发酵液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及氧化应激机制
目的：研究果蔬发酵液（vegetables and fruits ferment liquid ,VFFL）对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及其氧化应激机制。方法50只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、乙醇模型组、果蔬发酵液组[10、30、60ml/(kg·d)]，正常对照组和乙醇模型组蒸馏水灌胃，其余组用不同剂量果蔬发酵液灌胃，连续30d，后一次灌胃16h 后，乙醇模型组和各果蔬发酵液组均1次性50%乙醇12ml/kg·bw灌胃，6h后处死、取血和肝组织。分别采用HE染色观察肝组织，试剂盒测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）含量及肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、蛋白质羰基、活性氧（ROS）含量， TUNEL 法测定肝细胞凋亡，蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果与乙醇模型组比较，果蔬发酵液组的肝组织水肿和坏死明显减轻；血清中的ALT、AST、AKP水平和肝细胞凋亡明显低于乙醇模型组(P<0.05)；肝组织中SOD、GSH、GSH-Px水平明显高于乙醇模型组(P<0.05)，而ROS、MDA、蛋白质羰基含量明显低于乙醇模型组(P<0.05)；果蔬发酵液组的VDAC（电压依赖性阴离子通道蛋白）、Bcl-2蛋白表达增高(P<0.05)，细胞色素C、caspase-9、caspase-3、Bax蛋白表达下降(P<0.05)。结论果蔬发酵液具有较好的抗氧化作用，它可通过阻止ROS介导的线粒体信号通路，抑制肝细胞凋亡，从而保护小鼠酒精性肝损伤。[营养学报，2015，37（4）：366－371]
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ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究
目的 观察ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制.方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、缺血组(B组)、KATP开放剂治疗组(C组)及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组(D组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,各组于缺血后2 h进行再灌注.各组于再灌注6、12、24、48和72 h分别取5只大鼠脑组织标本,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测神经元凋亡,用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和caspase-9的蛋白表达;各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达.结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组(P＜0.05或P＜0.01),C组各指标均显著低于B组和D组(P＜0.05或P＜0.01),而B组与D组各指标间比较差异均无显著性(P均＞0.05).结论 KATP开放剂能显著减少脑I/R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I/R损伤后的神经元凋亡.
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野黄芩苷通过抑制线粒体凋亡通路对抗心肌细胞急性缺血损伤
目的 观察野黄芩苷对心肌细胞急性缺血损伤的保护作用,并探讨其分子作用机制.方法 用出生1～3d的SD大鼠进行心肌细胞原代培养,将生长良好的心肌细胞按随机数字表法分为空白对照组、缺血模型组以及高、中、低剂量野黄芩苷组(缺氧前加入100、50、25 μmol/L药物)5组,每组设6个样本.通过体外建立低氧(O2＜1％)、无糖的培养条件(6 h),模拟心肌细胞急性缺血损伤;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞的生长活性;用流式细胞仪测定细胞凋亡率,用烟酸己可碱-碘化丙啶(Hoechst-PI)染色观察细胞凋亡形态学变化;用蛋白质免疫印迹试验(Westem Blot)分析细胞色素C、Bax、Bcl-2及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白表达水平.结果 与空白对照组比较,缺血模型组细胞活性显著降低[吸光度(A值):0.053±0.013比0.173±0.017],细胞凋亡率显著升高[(44.78±5.73)％比(5.09±0.43)％,均P＜0.01];在高、中、低剂量野黄芩苷干预下细胞活性则较缺血模型组明显回升(A值:0.159±0.022、0.133±0.015、0.124±0.011比0.053±0.013),细胞凋亡率则显著下降[(19.58±0.22)％、(24.49±3.15)％、(26.09±0.27)％比(44.78±5.73)％,均P＜0.01].与空白对照组比较,缺血模型组中大量细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态改变,各剂量野黄芩苷干预下凋亡细胞明显减少.与空白对照组比较,缺血模型组细胞色素C、Bax及caspase-3蛋白表达升高[细胞色素C(A值):0.784±0.039比0.694±0.035,Bax(A值):0.623±0.031比0.490±0.025,caspase-3:0.744±0.037比0.624±0.031],Bcl-2蛋白表达降低(0.813±0.041比0.917±0.046,均P＜ 0.01);与缺血模型组比较,高、中、低剂量野黄芩苷组细胞色素C、caspase-3及Bax蛋白表达降低[细胞色素C:0.735±0.037、0.736±0.037、0.744±0.037比0.784±0.039,caspase-3(A值):0.652±0.033、0.684±0.034、0.691±0.035比0.744±0.037,Bax(A值):0.523±0.026、0.527±0.026、0.579±0.027比0.623±0.031],Bcl-2蛋白表达升高(A值:0.885±0.044、0.876±0.044、0.841±0.042比0.813±0.041,均P＜0.01).结论 野黄芩苷可以显著对抗心肌细胞急性缺血损伤,其机制是通过调控线粒体通路抑制心肌细胞凋亡的发生.
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山茱萸总苷干预急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的研究
目的 探讨山茱萸总苷对急性缺氧乳鼠心肌细胞凋亡线粒体通路的影响.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,采用液状石蜡封闭法建立缺血缺氧模型,并将原代培养3d的心肌细胞分为正常组、缺氧组(1h、2h、3h、5h)及药物治疗组,药物浓度采用生药10 g/L,免疫组化法检测各组caspase-9表达.结果 与对照组相比,缺氧各组caspase-9表达增加,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着时间延长,阳性表达的比例增加,5h达到高,给予山菜萸总苷干预之后,治疗组各个时间点caspase-9表达都有所下降,与缺氧组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 山茱萸总苷可以抑制caspase-9表达,通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路达到对心肌细胞的保护作用.
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硒对氟诱导NRK-52E细胞凋亡干预作用机制
目的 探讨硒对氟诱导NRK-52E细胞凋亡的拮抗作用.方法 实验设对照组、染氟组、染硒组、硒干预组,培养NRK-52E细胞,染毒72 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测AMPK及线粒体通路相关蛋白表达水平.结果 与对照组[(5.97±0.09)％]比较,5、20 mg/L NaF组细胞凋亡率[分别为(7.92±0.24)％、(11.06-±0.17)％]明显升高(P＜0.05);与20 mg/L NaF组比较,17.1、34.2 μg/L硒干预组细胞凋亡率[分别为(8.46±0.09)％、(9.88±0.08)％]明显降低(P＜0.05);与对照组比较,20 mg/L NaF组细胞AMPK磷酸化蛋白、bax、Cyt-C蛋白表达[分别为(0.73±0.16)、(0.99±0.16)、(0.73±0.08)]、活性caspase-9和caspase-3蛋白表达[分别为(1.17±0.17)、(1.51±0.42)]均升高(P＜0.05);与20 mg/L NaF组比较,17.1、34.2 g/L硒干预组AMPK磷酸化蛋白表达量[分别为(0.46±0.12)、(0.48±0.15)]、bax、Cyt-C蛋白表达量[分别为(0.55±0.09)、(0.61±0.16)与(0.30±0.06)、(0.34±0.05)]及活性caspase-9、caspase-3蛋白表达量[分别为(0.76±0.11)、(0.40±0.12)与(0.35±0.12)、(0.27 ±0.04)]均降低(P＜0.05).结论 AMPK介导的线粒体通路参与了硒拮抗氟诱导NRK-52E细胞凋亡过程.
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周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导
背景：功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建，以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者，周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡，而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。
目的：明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。
方法：以大鼠L6成肌细胞为实验对象，在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上，通过多通道细胞牵张应力加载系统，分别对待测细胞持续施加1，6，12，24 h的周期性张应力，不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况；运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。
结果与结论：倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好，细胞无变性并且脱落率极低，说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示，随着加力时间的延长，半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加，而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。 -
线粒体通路与缺血性脑血管病中神经细胞凋亡的关系
线粒体是细胞内一个重要的细胞器，它不仅为真核生物提供能量，而且在凋亡发生过程中发挥了重要的作用。通过对缺血性脑血管病中神经细胞凋亡以及线粒体通路的研究，将有助于开发缺血性脑血管疾病药物。因此，我们将这三者之间的关系一一综述。
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地黄饮子对快速老化小鼠 SAMP8线粒体通路细胞凋亡的影响
目的：研究地黄饮子对快速老化小鼠P8线粒体通路细胞凋亡的影响，探讨其治疗AD的药效及作用机制。方法：运用RT-PCR检测地黄饮子对SAMP8小鼠Caspase -3、Caspase -9、Apaf -1基因mRNA表达的影响，观察小鼠细胞凋亡情况。结果：地黄饮子能下调海马Caspase-3 mRNA、Caspase -9mRNA、Apaf-1mRNA的表达，且均有统计学意义。结论：地黄饮子可通过对细胞凋亡的线粒体途径的影响，抑制促凋亡基因，减少神经元的丢失，从而改善学习记忆能力。
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夏枯草诱导人甲状腺乳头状癌细胞K1增殖和凋亡的影响及其作用机制
目的:探索夏枯草对人甲状腺乳头状癌细胞(K1)增殖和诱导K1细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:采用MTT比色法测定2～200 mg/mL夏枯草作用24 h对K1细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术(Annexin V-FITC/PI联合标记)观察0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24h K1细胞凋亡的影响;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24h对K1细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果:在2～200 mg/mL的浓度范围内夏枯草作用24h对K1细胞增殖有明显抑制作用(P＜0.05),IC50值为2.427 mg/mL.流式细胞术检测结果显示夏枯草可诱导K1细胞凋亡,2.4、4.8 mg/mL组K1细胞总凋亡率分别为(11.35± 0.92)％、(44.57± 3.07)％,与对照组相比明显升高(P＜0.05);与对照组相比,1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24 h胞浆内凋亡蛋白Bax、细胞色素C(Cyto C)、Caspase-9、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)表达增多.结论:夏枯草能抑制人甲状腺癌K1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化线粒体凋亡通路有关.
关键词： 夏枯草 人甲状腺乳头状癌细胞 凋亡 线粒体通路 -
氯乙酸致人支气管上皮细胞16HBE的凋亡机制研究
[目的]探讨氯乙酸对人支气管上皮细胞16HBE氧化应激以及线粒体凋亡通路的影响. [方法]以16HBE细胞为研究对象,将实验分为对照组和0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mmol/L的氯乙酸染毒组,染毒24h后检测细胞存活率、凋亡率及超氧化物歧化酶(SOD)活力;染毒0.25、0.5、1、8、24h后检测细胞内活性氧(ROS)水平;染毒8、24h后检测线粒体膜电位以及Bcl-2和Bax mRNA表达水平.用1.5、2.5 mmol/L氯乙酸染毒24h后,检测Bcl-2、Bax、细胞色素C、Caspase-9、Caspase-3、PARP-1凋亡相关蛋白的表达水平. [结果]随氯乙酸染毒浓度升高,染毒24h后细胞存活率、SOD活力和线粒体膜电位呈剂量依赖性下降(r=-0.902、-0.732和-0.863,P＜0.05),而细胞凋亡率呈剂量依赖性上升(r=0.914,P＜ 0.05).与对照组相比,1.5、2.0、2.5 mmol/L剂量组细胞存活率分别降低了12％、20％和30％,SOD活力分别降低了9％、21％和30％,线粒体膜电位分别降低了11％、18％和24％,而细胞凋亡率分别是对照组的3、4和7倍.各剂量组细胞内ROS水平呈先升高后降低的趋势,在染毒0.5h达到峰值,与对照组相比分别增加了15％、35％、48％和55％(P＜0.05),染毒1h后反而降低.染毒各时间点染毒浓度与ROS水平均存在剂量-效应关系(r=0.756、0.893、0.735、0.667和0.653,均P＜0.05);相关性分析表明染毒24h后ROS水平与细胞凋亡率呈明显正相关(r=0.826,P＜0.05).染毒8、24h两个时间点,染毒浓度与Bcl-2、Bax mRNA表达量存在剂量效应关系(8h:r=-0.634和0.754,24h:r=-0.773和0.823,P＜0.05);与对照组相比,染毒24h后染毒浓度≥1.5mmol/L时Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下调,而Bax mRNA和蛋白表达明显上调(P＜0.05);相关性分析表明Bax mRNA表达与ROS水平具有正相关(r=0.886和0.824,P＜0.05),而Bcl-2mRNA表达与ROS水平具有负相关(r=-0.862和-0.815,P＜0.05).与对照组相比,染毒24h后染毒浓度2.5 mmol/L时细胞色素C、活化的Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量显著增加,而PARP-1蛋白表达量明显下降(P＜0.05). [结论]氯乙酸可致16HBE细胞发生氧化应激,在其通过氧化应激诱导细胞凋亡过程中可上调促凋亡蛋白Bax而下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,进一步激活线粒体依赖的凋亡通路,终诱导细胞凋亡的发生.
