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镇肝熄风汤对帕金森病肝阳上亢证大鼠中脑Akt和GSK-3β磷酸化的影响
目的:本研究主要观察镇肝熄风汤对帕金森病肝阳上亢证大鼠中脑Akt及其下游靶分子GSK-3β磷酸化的影响.方法:105只大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、镇肝熄风汤高、中、低剂量组和司来吉兰组.采用6-OHDA中脑微量注射合并附子汤灌胃制备帕金森病肝阳上亢证模型,采用分光光度法检测中脑组织caspase-3活性,Western blot检测脑组织Akt和GSK-3β磷酸化水平.结果:与假手术组比较,帕金森病肝阳上亢证大鼠中脑caspase-3活性明显增强,Akt和GSK-3β磷酸化水平明显升高,而镇肝熄风汤组中脑caspase-3活性明显减弱,Akt和GSK-3β磷酸化水平明显升高.结论:镇肝熄风汤能够减弱帕金森病肝阳上亢证大鼠中脑caspase-3活性,其机制可能与Akt活化和GSK-3β失活有关.
关键词： 肝阳上亢证 镇肝熄风汤 帕金森病 半胱天冬酶3 糖原合成酶激酶-3β -
逍遥散对大鼠阿尔茨海默病模型前额叶皮质PP-2A和GSK-3β的影响
目的:探讨逍遥散对阿尔茨海默病大鼠模型前额叶皮质相关指标的影响.方法:将清洁级4～5个月龄SD雄性大鼠随机分为4个组,模型组(B组)、西药组(C组)、中药组(D组)分别采用D-半乳糖腹腔注射和A-β1～42peptide双侧海马注射联合造模[用药剂量:D-半乳糖10 mL(100 mg·kg-1),每日1次,连续注射42 d;A-β每侧海马组织1次性注射2μL(10 μg)],生理组(A组)仅用等体积生理盐水做相同的造模处理.造模完成后,C、D组每日分别用奥拉西坦溶液0.75 g·kg-1和逍遥散煎剂10 ·g-1 ig干预,1次/d,连续28 d,用药体积均为5 mL·kg-1;A,B组采用等体积的生理盐水ig.ig结束后,4个组分别进行Y迷宫行为学检测,并对比分析.之后断头剥离前额叶皮质送检.结果:B,C,D两组与B组比较,其尝试次数和行为正确率均占明显优势,差异具有统计学意义(尝试次数P ＜0.05;行为正确率P＜0.01);B组与A组比较,尝试次数和行为正确率降低,差异具有统计学意义(尝试次数P ＜0.05;行为正确率P＜0.01);降低C、D组与A组比较差异无统计学意义.免疫组化染色显示,与B组比较,C组和D组PP-2A阳性细胞数量表达均明显增加,而GSK-3β阳性细胞数量表达均明显减少.结论:逍遥散能改善AD大鼠的空间记忆能力,与其能够上调AD大鼠前额叶的PP-2A的表达、抑制前额叶的GSK-3β的表达有关.
关键词： 逍遥散 阿尔茨海默病 糖原合成酶激酶-3β 蛋白磷酸酶-2A 前额叶皮质 -
膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝脏组织谷胱甘肽抗氧化系统的影响
目的:观察膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝脏组织氧化应激及谷胱甘肽(glutathione,GSH)抗氧化系统的影响.方法:60只大鼠随机分为空白组、正常组、模型组,膈下逐瘀汤组.以猪血清腹腔注射(0.5 mL/只,2次/周)制备免疫性大鼠肝纤维化模型,同时各组大鼠分别给予生理盐水或膈下逐瘀汤(生药7.37 g·kg-1 ·d-1)灌胃共12周.采用分光光度法检测肝组织丙二醛(MDA)和GSH含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLc) mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2),GCLc表达和糖原合酶激酶-3β(glycogen synthasc kinase-3β,GSK-3β)磷酸化.结果:与模型组比较,膈下逐瘀汤显著抑制了纤维化肝脏组织MDA含量(P＜0.05),增加了GSH含量(P＜0.05),上调了GCLc和Nrf2表达(P＜0.05),提高了GSK-3β磷酸化水平(P＜0.05).结论:膈下逐瘀汤通过活化Nrf2信号通路增强机体肝脏GSH抗氧化系统进而缓解大鼠纤维化肝脏组织氧化应激.
关键词： 肝纤维化 膈下逐瘀汤 氧化应激 谷胱甘肽 糖原合成酶激酶-3β -
鳖甲煎丸对肝星状细胞中Wnt信号通路信号分子β-catenin、GSK-3β及下游蛋白表达的影响
目的:通过研究鳖甲煎丸药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中Wnt信号通路信号分子β-catenin、GSK-3β及下游靶基因表达的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制.方法:用鳖甲煎丸药物血清培养永生化HSC-T6细胞,24h后采用Western blot法检测HSC-T6细胞Wnt/β-catenin信号分子β-catenin、GSK-3 β和磷酸化GSK-3β的表达水平,ELISA检测下游靶基因TIMP-1、MMP-2和MMP-9的表达水平.结果:与阴性及空白对照组比较,鳖甲煎丸低、中、高组和阳性对照组β-catenin、p-GSK-3 β蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).同时,鳖甲煎丸能够抑制TIMP-1的表达(P＜0.05),高剂量组可促进MMP-2和MMP-9的表达(P＜0.05).结论:鳖甲煎丸抗肝纤维化的药理作用可能与调控HSC-T6细胞中Wnt/β-catenin信号通路有关.
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黄连解毒汤对Aβ25-35诱导AD大鼠学习记忆能力及相关蛋白激酶表达的影响
目的:探讨黄连解毒汤(HJD)对A β25-35诱导AD大鼠学习记忆能力和相关蛋白激酶表达的影响.方法:SD雄性大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、阳性药多奈哌齐组、黄连解毒汤高、中、低剂量组(6、3、1.5g/kg),每组12只.除假手术组外,在大鼠双侧海马区立体定向注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,假手术组定向注射0.9％氯化钠溶液.术后连续灌胃30d,进行Morris水迷宫实验,测试结束后处死动物,摘全脑采用免疫组化和蛋白印迹法检测皮层相关蛋白激酶GSK-3β和CDK-5的表达.结果:黄连解毒汤可缩短AD大鼠平均逃避潜伏期(P＜0.05,P＜0.01),增加经过逃逸平台次数(P＜0.05)、延长有效区停留时间及有效区游泳路程(P＜0.05,P＜0.01),有效抑制大鼠脑内GSK-3β及CDK-5蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄连解毒汤能够改善A β25-35诱导AD模型大鼠的学习记忆能力,具有较好的益智作用,其机制可能与抑制脑内tau蛋白磷酸化关键蛋白激酶GSK-3β及CDK-5的活性,进而调控tau蛋白磷酸化水平,从而减少NF在细胞内聚积有关.
关键词： 黄连解毒汤 阿尔茨海默病 糖原合成酶激酶-3β 周期蛋白依赖性激酶-5 -
复方安神定志灵方对ADHD模型大鼠Akt、GSK-3β、β-catenin蛋白及mRNA的影响
目的:探讨安神定志灵方对自发性高血压大鼠(SHR)前额叶、纹状体及海马中Akt/GSK-3 β/β-catenin信号通路的影响.方法:将50只SHR大鼠随机分为模型组、利他林组(2mg/kg)、安神定志灵低、中、高剂量组(6.7、13.4、26.7g/kg),每组10只,另将10只Wistar京都大鼠设为正常组.每日灌胃2次,治疗4周后取大鼠脑组织.分别用蛋白质印迹法(Western Blot)、免疫组织化学法及实时定量荧光PCR检测各组大鼠前额叶、纹状体、海马组织中Akt、GSK-3β和β-catenin的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠前额叶、纹状体中β-catenin、Akt的蛋白及mRNA表达降低,GSK-3β相关表达增加;海马区β-catenin、Akt的OD值显著性降低(P＜0.05),GSK-3β的OD值显著性升高(P＜0.05).治疗后与模型组比较,利他林及安神定志灵组能够增加大鼠前额叶、纹状体中β-catenin、Akt的蛋白及mRNA表达,降低GSK-3 β的相关表达;增加大鼠海马区β-catenin、Akt的OD值,降低GSK-3β的OD值.结论:安神定志灵可以影响Akt、GSK-3 β、β-catenin表达水平,其药效可能与抑制细胞凋亡、保护神经元存在关联.
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逍遥散对大鼠阿尔茨海默病模型海马CA1区相关指标的影响
目的:研究逍遥散对阿尔茨海默病模型海马CA1区相关指标的影响.方法:将清洁级SD雄性大鼠按随机数字表法分为生理组(A组)、模型组(B组)、西药组(C组)、中药组(D组),B、C、D3组采用D-gal腹腔注射和A-β1 ～ 42peptide双侧海马注射联合造模,A组用等体积灭菌生理盐水做相同方法造模.造模结束后,每天上午9:00对各组大鼠进行灌胃给药干预,每日灌胃1次,连续干预治疗28 d,灌胃体积均为0.5 mL/100 g.A、B组均采用生理盐水灌胃,C、D组分别采用奥拉西坦溶液和逍遥散煎剂灌胃.结果:经药物干预后,D组PP-2A阳性细胞数量较B组明显增加(P＜0.05),阳性物面积、MOD、IOD均有明显增加(P＜0.01);D组GSK-3β阳性细胞数量较B组明显下降(P＜0.05),阳性物面积、MOD、IOD明显下降(P＜0.01).结论:逍遥散抑制动物海马GSK-3β的表达,进而增强PP-2A的表达,从而逆转Aβ诱导的tau蛋白过度磷酸化,对记忆、认知障碍起到积极的调节作用.
关键词： 逍遥散 阿尔茨海默病 糖原合成酶激酶-3β 蛋白磷酸酶-2A 海马 -
山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死大鼠心肌保护作用的影响
目的 观察山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死(acute coronary infarction,AMI)心肌线粒体保护作用及对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响.方法 采用结扎冠状动脉左前降支制备AMI大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸总苷预防给药组(总苷预防组)、山茱萸多糖治疗组(多糖治疗组)和山茱萸总苷治疗组(总苷治疗组),每组12只,除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余各给药组分别灌胃给予对应的药物治疗.进行超声心动图及血流动力学检测评价心功能;Masson三色染色法进行心肌梗死面积测定;荧光实时定量PCR法检测心肌组织线粒体发生相关基因过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(α subunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1 α)、PGC-1β、心肌细胞核呼吸因子(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)和GSK-3 p mRNA表达.结果 与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增大,心功能下降,PGC-1 α、PGC-1β和NRF-1 mRNA表达降低,GSK-3β mRNA表达升高(均P＜0.05).与模型组比较,总苷预防组、总苷治疗组和多糖治疗组心肌梗死面积缩小,心功能改善,NRF-1 mRNA表达升高,总苷预防组和多糖治疗组PGC-1α和PGC-1β mRNA表达升高,多糖治疗组GSK-3β mRNA表达降低(均P＜0.05).与总苷预防组比较,总苷治疗组短轴缩短率(fractional shortening,FS)、主动脉收缩压(aortic systolic blood pressure,SBP)升高,多糖治疗组射血分数(ejection fraction,EF)降低,总苷治疗组和多糖治疗组PGC-1α、PGC-1β及NRF-1 mRNA表达下降,多糖治疗组GSK-3β mRNA表达下降(均P ＜0.05).与总苷治疗组比较,多糖治疗组FS、EF、左室收缩末压(left ventricular end systolic pressure,LVESP)、SBP、GSK-3β mRNA降低(P＜0.05).结论 山茱萸总苷及山茱萸多糖具有改善AMI大鼠心功能、缩小心肌梗死面积、促进心肌线粒体生物合成的作用;山茱萸总苷及多糖对AMI大鼠心肌细胞线粒体保护作用可能是通过GSK-3β信号通路实现.
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糖尿病大鼠海马组织内Tau蛋白磷酸化水平和糖原合成激酶-3β活性增高
目的 研究1型及2型糖尿病对海马组织内Tau蛋白部分位点磷酸化水平的影响,并探讨其作用机制.方法 同月龄Wistar大鼠,分为对照组(CTL)、1型(T1DM)及2型(T2DM)糖尿病模型组.葡萄糖氧化酶法检测血糖,放免法检测血浆胰岛素,Western blot分析海马内总Tau以及Tau蛋白上部分位点(pSer199、pThr212、pSer214、pSer396及pSer422)的磷酸化水平.γ32P标记的ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号传导系统中的关键酶糖原合成激酶-3β(GSK-3β)活性.结果 T1DM及T2DM组血糖水平显著高于CTL组(P＜0.001);T2DM组血浆胰岛素水平显著高于CTL组(P＜0.001),而T1DM组显著低于CTL组(P＜0.01);T2DM组胰岛素抵抗指数显著高于T1DM及CTL组(P＜0.001).T1DM及T2DM组大鼠海马组织内总Tau蛋白水平与CTL比较无显著差异,但阿尔茨海默病相关的Tau蛋白磷酸化位点pS199、pT212及pS396在T1DM及T2DM组都呈现过度磷酸化状态.同时,GSK-3β活性在这两种糖尿病大鼠模型的海马组织内明显增高(P＜0.01,P＜0.001).结论 糖尿病大鼠海马组织内Tau蛋白部分位点磷酸化水平增高.胰岛素信号系统功能低下而导致传导途径中GSK-3β活性上调,这可能是引起大鼠海马内Tau蛋白磷酸化的一个主要原因.
关键词： 糖尿病 阿尔茨海默病 胰岛素 Tau蛋白 糖原合成酶激酶-3β -
糖原合成酶激酶-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用
目的 研究心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用及信号通路.方法 本研究在江西省分子医学重点实验室完成.用改良的方法培养出生1～3 d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞,根据实验要求分为5组:(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧组+CT-1组;(4)缺氧复氧组+CT-1+LY294002组(PIK3/Akt阻断剂);(5)缺氧复氧组+CT-1+助溶剂DMSO组.CT-1的质量浓度为10ng/mL,缺氧3 h,复氧3 h.MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(△ψm),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和PI3K蛋白检测用western blotting.以方差分析及q检验进行统计学分析.结果 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位(△ψm)下降[(40.55±4.25)vs.(86.28±7.15),P<0.01];磷酸化的GSK-3β和PI3K蛋白稍有增加.而CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升(87%),心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少,△ψm水平增加,磷酸化GSK-3β及PI3K蛋白水平明显增加.CT-1的作用能被PIK3/Akt阻断剂LY294002抑制,而助溶剂组则未观察到类似作用.结论 CT-1能保护缺氧复氧损伤的心肌细胞,且其作用依赖PI3K/GSK-3β信号通路的激活.
关键词： 心肌细胞 损伤 心肌营养素-1 糖原合成酶激酶-3β 信号通路 -
小强度跑台运动对小鼠空间学习记忆及海马糖原合成酶激酶-3β的影响
目的：观察小强度跑台运动对小鼠空间学习记忆能力及海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白及基因表达的影响。方法3月龄雌性C57BL/6J小鼠24只，分为运动组(n=12)与对照组(n=12)。5个月后行Morris水迷宫测试及GSK-3β检测。结果运动组小鼠逃避潜伏期短于对照组(P<0.05)，寻找平台路径长度短于对照组(P<0.05)，穿环次数多于对照组(P<0.05)；运动组小鼠GSK-3βmRNA表达水平低于对照组(P<0.05)，p-GSK-3β-Ser9/GSK-3β比值高于对照组(P<0.05)。结论小强度跑台运动可提高小鼠空间学习和记忆能力，降低GSK-3β活性可能是其健脑作用的分子机制之一。
关键词： 跑台运动 空间学习记忆功能 糖原合成酶激酶-3β 小鼠 -
糖原合成酶激酶-3β在D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭中的作用
目的:研究细胞信号分子糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在D-氨基半乳糖/脂多糖联合注射诱导小鼠重型肝炎肝衰竭中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖建立小鼠重型肝炎肝衰竭模型.动物实验分组:对照组,重型肝炎肝衰竭模型组,SB216763干预组(建模前2h腹腔注射),SB216763治疗组(建模后2h腹腔注射).Western blot检测肝脏组织GSK-3β磷酸化水平,检测血清转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)评价肝脏功能,观察肝脏组织病理变化评价肝脏损伤情况,实时荧光定量PCR法检测肝脏细胞炎症因子基因表达,并检测凋亡相关蛋白Caspase 3的活性表达.多组样本均数的两两比较采用One-way ANOVA分析(方差齐者用LSD-t检验,方差不齐者用Games-Howell法),P＜0.05有统计学意义.结果:Western blot结果显示,GSK-3β在急性肝衰竭过程中磷酸化水平先降低(活性升高)后再次升高；抑制GSK-3β活性,无论是干预还是治疗都改善肝脏功能(血清ALT、AST水平明显下降,肝组织病理损伤明显改善),并且抑制炎症反应[抑制促炎因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、IL-1β表达,促进抗炎因子IL-10高表达],并可降低凋亡相关蛋白Caspase 3表达.结论:在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭过程中GSK-3β被激活,抑制GSK-3β活性通过降低炎症反应和肝细胞凋亡从而改善肝损伤.因此,对信号分子GSK-3β活性进行干预有可能为重型肝炎肝衰竭的治疗提供一个新的靶点.
关键词： D-氨基半乳糖 脂多糖 炎症 急性肝衰竭 糖原合成酶激酶-3β -
钠氢交换体1对糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶和糖原合成酶激酶-3β的调节作用
目的 探讨钠氢交换体1(NHE1)抑制剂卡立泊来德(CAR)对2型糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶(Calpain)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白的调节作用.方法 选取7周龄雄性C57BL/KS db/db小鼠和野生型(WT)小鼠各16只,采用随机数字表法分为4组:对照组(WT)、CAR组(WT+CAR)、模型组(db/db)和CAR干预组(db/db+CAR).10周后行血流动力学检查,测定空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)及胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);观察心肌病理改变,测定心肌组织氧化/硝化应激反应;RT-PCR测定心肌组织磷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox和gp91phox亚基、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)的mRNA水平.Western blotting检测心肌组织中钙蛋白酶1和2(Calpain-1和2)、钙调磷酸酶(CaN)、蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达;并测定心肌Calpain和CaN酶的活性.两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析.结果(1)与db/db组比较,CAR+db/db组小鼠FPG、TC、TG和HOMA-IR有下降趋势(t=1.213~2.112,P>0.05).(2)与WT组比较,db/db组心肌胶原含量、TGF-β1和MMP-2 mRNA水平明显增加,MMP-9 mRNA水平明显下降(t=3.695~4.905,P<0.05),而CAR干预后可逆转上述指标的改变(t=2.491~2.925,P<0.05).(3)CAR+db/db组小鼠±dp/dtmax绝对值增大,LVEDP下降(t=2.865~6.404,P<0.05),并且小鼠心肌损伤情况明显改善.(4)与db/db组比较,CAR干预能明显改善db/db小鼠心脏组织中氧化/硝化应激,两组相比较有统计学差异(t=2.519~4.845,P<0.05).(5)与db/db组比较,CAR能降低db/db小鼠心肌Calpain、CaN酶活性和蛋白含量(t=2.634~3.253,P<0.05),还能上调p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达(t=2.827,4.090,P<0.05).结论 CAR能改善db/db小鼠心脏损伤,其机制可能与CAR改善高糖高脂和胰岛素抵抗,抗氧化应激能力及调节Calpain和AKT/GSK-3β蛋白有关.
关键词： 糖尿病心肌病 钠氢交换体1 卡立泊来德 钙蛋白酶 糖原合成酶激酶-3β -
大鼠脊髓损伤后Wnt信号分子的表达变化
目的:探讨大鼠脊髓损伤后不同时期Wnt信号分子Wnt-1、β-连锁蛋白(β-catenin)及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在脊髓损伤局部的表达情况.方法:50只成年雌性SD大鼠随机均分为对照组和实验组,麻醉下手术显露T9～T11椎板,切除T10全椎板,实验组大鼠用NYU打击器以10g×5cm的打击能量致伤T10脊髓,对照组只行全椎板切除,不致伤脊髓.分别于术后1d、3d、5d、7d、14d每组各取5只大鼠,取以损伤区为中心共15mm范围内(对照组取相应部位)脊髓组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR的方法检测脊髓组织中Wnt-1、β-catenin及GSK-3β的mRNA表达量.结果:脊髓损伤后1d和3d时Wnt-1和β-catenin出现高表达,5d后其表达逐渐减弱,14d左右其表达基本恢复到正常水平,而在脊髓损伤后1d和3d时GSK-3β呈低表达,5d后其表达逐渐增强,各时间点之间差异有显著性(P<0.05).对照组中Wnt-1和β-catenin及GSK-3β均呈低表达,各时间点表达无显著差异(P<0.05).结论:大鼠脊髓损伤后损伤局部脊髓组织中Wnt-1,β-catenin及GSK-3β的表达发生变化,提示Wnt信号在脊髓损伤后的早期被激活,其可能与脊髓损伤后的修复再生有关.
关键词： 脊髓损伤 Wnt-1 β-连锁蛋白 糖原合成酶激酶-3β -
氯胺酮对老年大鼠腹壁疝术后炎症的影响及作用机制的探讨
目的 观察小剂量氯胺酮对老年腹壁疝大鼠术后炎性细胞因子释放的影响及作用机制的探讨.方法 选用老年雄性SD大鼠,腹正中切口去除腹壁的肌层、筋膜和腹膜后直接缝合皮肤,一周后将腹壁疝SD大鼠60只随机分为四组:分别为对照组、手术组、KTM(氯胺酮)组和手术+KTM组,其中手术组采用补片进行腹壁疝修补术(IPOM).术后处死,断头取脑组织.四组中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达量用RT-PCR来检测;总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平用Western blotting方法分别检测.结果 与对照组相比,手术组和手术+ KTM组的IL-1β、TNF-α和p-GSK-3β的表达量明显增加(P ＜0.05);KTM组中上述各项指标无明显变化(P＞0.05).手术+ KTM组中的炎性因子(IL-1β和TNF-α)表达量与手术组相比显著降低,而p-GSK-3β表达量则比手术组显著增高(P＜0.05),GSK-3β总的表达量在各组之间无统计学差异.结论 小剂量的氯胺酮可以减轻老年大鼠腹壁疝修补术后脑组织中的炎性因子(IL-1β和TNF-α)的表达水平,且此作用可能与GSK-3β的活性有关,对预防老年术后认知功能障碍具有一定的指导意义.
关键词： 腹壁疝 氯胺酮 炎性因子 糖原合成酶激酶-3β -
氯化锂对卵巢癌细胞增殖凋亡影响及其机制探讨
目的:观察氯化锂(lithium chloride,LiCl)对卵巢癌SKOV3细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:使用20(A组)、40(B组)和60(C组)mmol/L LiCl处理SKOV3细胞,正常对照组用等体积的细胞培养基培养.采用CCK8法观察LiCl对卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测LiCl作用后细胞周期变化及凋亡情况.蛋白质印迹法检测细胞糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phos-phorglation-glycogen synthase kinase3β,p-GSK-3β)及有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient2,MAD2)蛋白表达的变化.结果:不同浓度LiCl分别作用于SKOV3细胞48 h后,A组细胞增殖活性为(80.64±1.06)％,与B组(57.18±1.56)％比较,差异有统计学意义,P=0.001;与C组(43.18±6.12)％比较,差异有统计学意义,P＜0.001.B组作用24 h细胞增殖活性为(75.12士9.35)％,48 h为(57.18±1.56)％,72 h为(35.36±1.00)％,与24 h组相比,48 h组(P=0.158)和72 h组(P=0.036)细胞增殖活性降低.LiCl能有效抑制SKOV3细胞增殖,呈时间与剂量依赖性.不同浓度LiCl作用96 h后SKOV3细胞的凋亡率相对于对照组升高,A组为(7.82±0.87)％,P=0.037;B组为(21.09±1.57)％,P＜0.001;C组为(27.83±0.47)％,P＜0.001,差异均有统计学意义.不同浓度LiCl作用48 h后,细胞出现了明显的G2/M期阻滞,G2/M期的比例由对照组的(10.23±1.50)％依次升高,A组为(19.9士4.16)％,P=0.352;B组为(30.29±0.51)％,P=0.045;C组为(39.32±1.11)％,P=0.009,差异有统计学意义.蛋白质印迹法检测结果显示,LiCl浓度升高,p-GSK-3β蛋白相对表达量升高,A组为(54.39±2.75)％,P=0.019;B组为(72.39±2.89)％,P=0.009;C组为(86.57士2.52)％,P=0.005,差异有统计学意义.LiCl浓度升高,MAD2蛋白相对表达量升高,A组为(52.29±1.34)％,P=0.041;B组为(58.35±1.36)％,P=0.030;C组为(72.07±2.93)％,P=0.006,差异有统计学意义.结论:LiCl能有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,并诱导其凋亡;上调MAD2增强有丝分裂检测点功能,终导致细胞G2/M期阻滞可能是LiCl抑制增殖促进凋亡的机制.
关键词： 卵巢肿瘤 氯化锂 增殖 凋亡 糖原合成酶激酶-3β 有丝分裂阻滞缺陷蛋白2 -
锌离子参与白藜芦醇的心肌线粒体保护作用及其机制研究
目的:研究锌离子(Zn2+)是否参与白藜芦醇(resveratrol)的心肌线粒体保护作用并探讨其可能的机制.方法:H9c2细胞常规培养,随机分为对照组、白藜芦醇或ZnCl2组、白藜芦醇+锌离子螯合剂(TPEN)组.Western blot观察白藜芦醇对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和AKT磷酸化的影响;流式细胞仪检测细胞存活率;共聚焦显微镜观察白藜芦醇对线粒体通透性转移孔(mPTP)开放及对细胞Zn2+产生的影响.结果:白藜芦醇增加GSK-3β的磷酸化、抑制mPTP开放、增加Zn2+产生,此作用均被TPEN所阻断.缺血/再灌注减少细胞存活率,白藜芦醇增加再灌注期细胞存活率,未增加缺血期及GSK-3β质粒转染细胞存活率.结论:白藜芦醇通过Zn2+使GSK-3β失活抑制mPTP开放发挥心肌线粒体保护作用,AKT可能未参与此过程.
关键词： 白藜芦醇 锌离子 糖原合成酶激酶-3β 线粒体通透性转移孔 心肌保护 -
白藜芦醇对缺氧心肌细胞的保护作用及机制研究
目的:探讨白藜芦醇(resveratrol)是否可通过抑制内质网应激机制保护缺氧心肌细胞.方法:①H9c2心肌细胞随机分为对照组和缺氧组(1～8b),Western blot法检测内质网应激(ERS)特征性分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)的表达以确定缺氧诱导ERS的时间.②培养H9c2心肌细胞建立缺氧模型,随机分为对照组、缺氧组、白藜芦醇+缺氧组、白藜芦醇组.Western blot检测缺氧对GRP 78,GRP 94,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达,观察白藜芦醇对缺氧所致GRP 78,GRP 94,GSK-33磷酸化的影响;共聚焦显微镜观察白藜芦醇对缺氧所致线粒体通透性转移孔(mPTP)开放的影响;电镜观察白藜芦醇对缺氧所致心肌细胞超微结构的影响.结果:与对照组相比,缺氧3h导致H9c2细胞GRP 78和GRP 94表达增加多;白藜芦醇明显抑制缺氧所致GRP 78和GRP 94的表达及GSK-3β磷酸化水平.与对照组相比,缺氧组TMRE荧光强度明显减少,白藜芦醇明显抑制缺氧所致TMRE荧光强度的减少(即线粒体膜电位减少、mPTP开放).与对照组相比,白藜芦醇明显减轻缺氧所致心肌细胞线粒体、内质网等超微结构的损伤.结论:白藜芦醇对缺氧所致H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与抑制ERS使GSK-33失活,进而阻止mPTP开放有关.
关键词： 白藜芦醇 缺氧 内质网应激 糖原合成酶激酶-3β 线粒体通透性转移孔 -
白藜芦醇对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的内质网应激机制研究
目的:研究白藜芦醇(resveratrol)对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的“内质网-线粒体对话”保护作用并探讨其可能的机制.方法:培养H9c2心肌细胞建立氧化应激模型,随机分为4组:正常组(对照组)、模型组(H2O2组)、白藜芦醇+H2O2组、白藜芦醇组.Western blot测定H2O2对内质网应激(ERS)特征性分子伴侣,即葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP 94)的表达;观察白藜芦醇对氧化应激所致GRP 78、GRP 94、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化的影响;共聚焦显微镜观察白藜芦醇对氧化应激所致线粒体通透性转移孔(mPTP)开放的影响;电镜观察白藜芦醇对氧化应激所致心肌细胞超微结构的影响.结果:与正常组相比,H2O2(600 μmol·L-)引起H9c2心肌细胞氧化损伤并使GRP 78,GRP 94表达明显增加;白藜芦醇(10 μmol· L-1)明显抑制氧化应激所致GRP 78,GRP 94的表达及GSK-3β磷酸化水平.与正常组相比,模型组TMRE荧光强度明显减少,白藜芦醇明显抑制氧化应激所致TMRE荧光强度的减少(即线粒体膜电位减少、mPTP开放).白藜芦醇明显减少氧化应激所致心肌细胞线粒体、内质网超微结构的损伤.结论:白藜芦醇对氧化应激所致H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与抑制ERS使GSK-3β失活,进而阻止mPTP开放有关.
关键词： 白藜芦醇 细胞损伤 内质网应激 糖原合成酶激酶-3β 线粒体通透性转移孔 -
锌离子的心肌线粒体保护作用及其机制研究
目的 研究外源性锌(Zn2+)的心肌线粒体保护作用及其可能的细胞内信号转导机制.方法 大鼠心脏组织来源的H9c2细胞株的常规培养;随机分为对照组、ZnCl2组(1～20 μmol· L-1,孵育20 min)、ZnCl2+抑制剂组[PI3K抑制剂LY294002,10 μmol·L-1、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mKATP)抑制剂5-羟基癸酸甘油酯(5-HD),0.5 mmol·L-1,孵育10 min后加入ZnCl2 20 min]、抑制剂组(孵育10 min);激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体染料TMRE红色荧光强度的变化以确定线粒体膜电位(△ψm),600 μmol·L-1H2O2造成心肌细胞氧化损伤,进而了解线粒体通透性转移孔(mPTP)的开放程度;Western blot检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和AKT/PKB(蛋白激酶B,protein kinase B)蛋白表达;模拟缺血/再灌注损伤,流式细胞仪检测细胞存活率;Fugene 6转染试剂盒进行激活型GSK-3β质粒(GSK-3β-S9A)转染,观察其对mPTP开放的影响.结果 与正常组相比,对照组H2O2处理细胞20 min使TMRE荧光强度明显减少,不同浓度Zn2+能够抑制H2O2引起的TMRE荧光强度的减少,其中以10 μmol· L-1明显;Zn2+使磷酸化GSK-3β和AKT蛋白表达明显增多,此作用被LY294002所阻断,5-HD未改变此作用;与正常组相比,缺血/再灌注明显减少细胞存活率,Zn2+没有增加缺血期细胞存活率而明显增加再灌注期细胞存活率;Zn2+能够模拟mPTP抑制剂环孢素(1 μmol·L-1)阻止mPTP开放,此作用同样被LY294002所逆转,5-HD未改变此作用,Zn2+未能改变GSK-3β-S9A转染细胞的荧光强度.结论 Zn2+通过PI3 K/AKT通路使GSK-3β失活进而抑制mPTP的开放,发挥心肌线粒体保护作用,mKATP可能未参与此过程.
关键词： 锌离子 心肌保护 线粒体 糖原合成酶激酶-3β 线粒体通透转移孔
