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他克莫司治疗难治性类风湿关节炎疗效观察
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis ，RA ）是一种以关节破坏为主要表现的常见疾病［1］。其治疗方案近年已日趋成熟，多种慢作用抗风湿药物和（或）细胞毒药物已应用于治疗RA ，并取得了较好的疗效，但仍有部分患者经2种或2种以上改善病情药物（DMARD）联合治疗6个月以上病情仍有活动，此类患者通常称为难治性类风湿关节炎（re‐fractory rheumatoid arthritis ，RRA ）。他克莫司（TAC）是一种钙调神经磷酸酶抑制剂，主要通过抑制神经钙蛋白酶从而抑制 T 淋巴细胞免疫应答反应［2］，具有免疫抑制的作用。以往的研究中，他克莫司主要应用于肾移植后及各种肾脏疾病。本文旨在探索他克莫司对于RRA患者的疗效。
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钙蛋白酶与运动性骨骼肌损伤
钙蛋白酶系统存在于大多数动物细胞中,主要成员为钙蛋白酶一、蛋白酶二和钙蛋白酶抑制蛋白;钙蛋白酶三为骨骼肌特异性蛋白,它们激活都需要一定浓度的钙离子存在.大量研究证明,钙蛋白酶参与骨骼肌纤维降解,与运动性骨骼肌损伤和延迟性肌肉酸痛之间存在密切关系.
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雌激素通过钙蛋白酶上调P21/CCNE2mRNA表达并促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力
目的 探讨17β-雌二醇(E2)对乳腺癌细胞mRNA表达,观察E2侵袭的分子信号机制.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为观察模型,用RT-PCR检测目的基因周期抑制蛋白P21和周期蛋白E2 (CCNE2) mRNA的表达;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;蛋白印迹法检测蛋白表达;采用化学抑制剂或基因沉默法抑制胞内钙蛋白酶(CANP)活性.结果 E2(10 nmol/L)可刺激P21和CCNE2 mRNA表达显著增加(P＜0.01);CANP抑制剂calpeptin(10μmol/L)或MEK抑制剂PD98059 (10 μmol/L)对E2诱导的P21和CCNE2 mRNA上调均有显著抑制作用(P＜0.01);E2刺激细胞侵袭能力明显增强(P＜0.01),而基因沉默CANP2明显抑制E2对CANP的激活及E2诱导的细胞侵袭效应(P＜0.01).结论 E2可通过激活胞内CANP诱导乳腺癌细胞P21和CCNE2 mRNA表达上调并促进细胞侵袭,提示CANP可能为抑制乳腺癌转移的一个潜在药物靶点.
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钙蛋白酶抑制EGF诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞体外增殖
目的 观察钙蛋白酶对表皮生长因子(EGF)诱导的雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞增殖的影响.方法 体外培养人乳腺肿瘤系MDA-MB-231,经10 ng/mL EGF处理后,用蛋白印迹法检测FAK和CANP1蛋白表达.用CANP抑制剂Calpeptin (CALP)预处理对EGF上述效应的影响;通过集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力.结果 EGF可诱导FAK蛋白表达上调及蛋白剪切反应(P＜0.01),也可诱导CANP1自身蛋白剪切(P＜0.05),上述效应可被CALP显著削弱或阻断(P＜0.05);EGF还可诱导MDA-MB-231细胞集落形成(P＜0.05),此效应也可被CALP预处理显著抑制(P＜0.05).结论 CANP可能成为抑制ER阴性乳腺癌细胞增殖的一个潜在药物作用靶点.
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钙蛋白酶10的分子生物学特性及其与糖代谢关系的研究进展
钙蛋白酶10基因存在多种形式的单核苷酸多态性,是2型糖尿病发生发展过程中的危险因素.蛋白质研究发现,钙蛋白酶10属于非溶酶体类半胱氨酸蛋白酶,但结构中缺少经典钙蛋白酶所具有的EF手性结构域.新近研究表明,钙蛋白酶10广泛分布于胰岛、骨骼肌、肝脏等多种组织,在胰岛素分泌、骨骼肌等组织糖摄取、以及线粒体呼吸等生命过程中发挥着重要作用.
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钙蛋白酶小亚基1在细胞凋亡、细胞周期及肿瘤中作用机制的研究进展
钙蛋白酶(calpain)是一种存在于动物细胞中的钙离子依赖性的中性半胱氨酸蛋白酶.钙蛋白酶小亚基1(calpain-s1,capn4)作为 calpain的调节小亚基,对细胞周期、细胞凋亡及肿瘤的发生、发展等具有一定的影响.本文就近年来有关capn4在细胞周期、细胞凋亡及肿瘤中的作用机制作一综述.
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日本血吸虫钙蛋白酶肽链文库的制备及其B细胞表位的筛选
目的筛选钙蛋白酶(calpain)的B细胞表位,探讨其B细胞表位的免疫原性及其所诱导的免疫应答类型. 方法用Genetyx-MAC9.0分析calpain肽连的亲水性,在亲水性区域以9个氨基酸为肽链单位的固相重叠肽链库(每相邻两个肽链之间仅有一个氨基酸不同)被Auto-spot Robot制备,用Dot-ELISA在合成的肽链库上筛选B细胞表位,含有B细胞表位的肽链免疫BALB/c小鼠, ELISA鉴别特异性IgG抗体亚类的产生. 结果由758个氨基酸组成的日本血吸虫calpain蛋白含有2个主要的亲水区,其存在区域分别在氨基酸229～375和555～613;当我们测定合成的肽链文库时,在亲水区内筛选出4个B细胞的表位,分别是氨基酸234～251(YAHLSGGT);290～297(CLMGCSIH);338～346(PWGDSHEW);358～364(AWCDGAPQ);与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b特异性抗体有显著性意义的上升. 结论日本血吸虫calpain是一个具有免疫原性的蛋白,能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白,提示calpain的B细胞表位可以成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子.
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缬沙坦对压力负荷心肌肥大钙调神经磷酸酶(CaN)通路的作用
目的探讨血管紧张素Ⅱ受体(AngⅡ,AT1及AT2)拮抗剂对致心肌肥厚的钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路的影响.方法腹主动脉缩窄法建立大鼠压力负荷模型,实验动物分为手术组(n=8);缬沙坦组(n=8):手术组+缬沙坦(1 mg/kg·d);PD123319(AT2R受体拮抗剂)组(n=8):手术组+PD123319(30 mg/kg·d);假手术组(n=8).放射免疫法检测血浆、心肌AngⅡ浓度,免疫沉淀法检测心肌钙蛋白酶(u-calpain,m-calpain)及CaN蛋白表达及其磷酸化.结果缬沙坦组血浆AngⅡ浓度显著高于假手术组及PD123319组(P＜0.05),缬沙坦组心肌AngⅡ浓度则低于假手术照组及PD123319组(P＜0.05).手术组u-calpain蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.01),缬沙坦组显著低于手术组及PD123319组(P＜0.05),手术组与PD123319组间差异没有显著性(P＞0.05).手术组CaN磷酸化显著高于假手术组(P＜0.01),缬沙坦组显著低于手术组及PD123319组(P＜0.05),手术组与PD123319组间差异没有显著性(P＞0.05).结论u-calpain参与激活高压力负荷下心肌组织CaN通路,u-calpain的上调通过AT1起作用,AT1受体拮抗剂的心脏保护作用与其抑制了m-calpain有关.
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转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间质转化及其与钙蛋白酶的关系
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对肺泡上皮细胞上皮-间质转化的影响及与钙蛋白酶的关系.方法 体外培养人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为空白对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+钙蛋白酶抑制剂处理组、钙蛋白酶抑制剂组,给予相应处理后Western-blot和RT-PCR分别检测上皮细胞标志物E钙黏素和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙蛋白酶-1(Calpain-1)的表达.结果 与空白对照组对比,TGF-β1组钙蛋白酶-1的mRNA表达及蛋白表达明显增高(P＜0.01),E钙黏素的mRNA表达及蛋白表达均明显降低(P＜0.01),α-SMA的mRNA表达及蛋白表达明显增高(P＜0.01);加入钙蛋白酶抑制剂后再加入TGF-β1刺激,相对于TGF-β1处理组,钙蛋白酶-1的mRNA表达及蛋白表达明显降低(P＜0.01),E钙黏素的mRNA表达及蛋白表达明显升高(P＜0.05),α-SMA的mRNA表达水平及蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),而与对照组比较,钙蛋白酶-1、E钙黏素、α-SMA表达无明显差异(P＞0.05);单加入钙蛋白酶抑制剂后,与空白对照组比较,钙蛋白酶-1、E钙黏素、α-SMA的mRNA表达及蛋白表达无明显差异(P＞0.05).结论 TGF-β1可以通上调钙蛋白酶的表达诱导A549细胞发生上皮-间质转化.
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钠氢交换体1对糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶和糖原合成酶激酶-3β的调节作用
目的 探讨钠氢交换体1(NHE1)抑制剂卡立泊来德(CAR)对2型糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶(Calpain)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白的调节作用.方法 选取7周龄雄性C57BL/KS db/db小鼠和野生型(WT)小鼠各16只,采用随机数字表法分为4组:对照组(WT)、CAR组(WT+CAR)、模型组(db/db)和CAR干预组(db/db+CAR).10周后行血流动力学检查,测定空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)及胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);观察心肌病理改变,测定心肌组织氧化/硝化应激反应;RT-PCR测定心肌组织磷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox和gp91phox亚基、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)的mRNA水平.Western blotting检测心肌组织中钙蛋白酶1和2(Calpain-1和2)、钙调磷酸酶(CaN)、蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达;并测定心肌Calpain和CaN酶的活性.两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析.结果(1)与db/db组比较,CAR+db/db组小鼠FPG、TC、TG和HOMA-IR有下降趋势(t=1.213~2.112,P>0.05).(2)与WT组比较,db/db组心肌胶原含量、TGF-β1和MMP-2 mRNA水平明显增加,MMP-9 mRNA水平明显下降(t=3.695~4.905,P<0.05),而CAR干预后可逆转上述指标的改变(t=2.491~2.925,P<0.05).(3)CAR+db/db组小鼠±dp/dtmax绝对值增大,LVEDP下降(t=2.865~6.404,P<0.05),并且小鼠心肌损伤情况明显改善.(4)与db/db组比较,CAR干预能明显改善db/db小鼠心脏组织中氧化/硝化应激,两组相比较有统计学差异(t=2.519~4.845,P<0.05).(5)与db/db组比较,CAR能降低db/db小鼠心肌Calpain、CaN酶活性和蛋白含量(t=2.634~3.253,P<0.05),还能上调p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达(t=2.827,4.090,P<0.05).结论 CAR能改善db/db小鼠心脏损伤,其机制可能与CAR改善高糖高脂和胰岛素抵抗,抗氧化应激能力及调节Calpain和AKT/GSK-3β蛋白有关.
关键词： 糖尿病心肌病 钠氢交换体1 卡立泊来德 钙蛋白酶 糖原合成酶激酶-3β -
甲基强的松龙对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙蛋白酶表达的影响
目的:观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤后应用甲基强的松龙(MP)对脊髓组织钙蛋白酶表达的影响.方法:用纯种雄性成年SD大鼠,夹闭右肾动脉分支下腹主动脉30min后恢复血供,缺血再灌注组(损伤组)不作任何治疗,造成动物脊髓缺血再灌注损伤模型,治疗组于恢复血供后即刻静脉应用MP(治疗组),观察再灌注后3h、24h、72h和7d时脊髓损伤节段钙蛋白酶Ⅰ的表达以及钙蛋白酶特异性底物68-KD NFP的降解.结果:脊髓再灌注后3h出现钙蛋白酶Ⅰ阳性细胞和68-KD NFP的降解产物,随着时间的延长,阳性细胞数目逐渐增多,染色深度逐渐增加,再灌注后72h明显,MP治疗组较损伤组明显降低(P＜0.01).结论:脊髓再灌注损伤后静脉应用MP可以减少大鼠脊髓中calpain-Ⅰ阳性细胞的表达,对细胞骨架蛋白68-KD NFP具有明显保护作用.证实MP可以抑制钙蛋白酶的表达,可能是MP对脊髓损伤治疗的另一种机理.
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钙蛋白酶抑制剂MDL28170减轻大鼠缺血再灌注心肌损伤
目的 我们前期的结果表明,钙蛋白酶抑制剂MDL28170对离体灌注心脏可产生保护作用,本实验评价MDL28170对在体缺血再灌注心肌的保护作用.方法 建立急性缺血40 min、再灌注2h的大鼠心肌损伤模型;缺血前5 min静脉推注MDL28170(3 mg/kg b.w.),再灌注结束后TTC染色测量心肌梗死面积,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,比色法检测血清LDH和组织casapase 3活化的水平.结果 与对照组相比,缺血再灌注心肌出现明显的梗死灶、血清LDH水平升高;MDL28170处理可显著缩小梗死面积,降低LDH水平.细胞凋亡结果显示,缺血再灌注心肌凋亡指数与casapase 3活性显著增加,而MDL28170显著逆转二者的变化.MDL28170对正常心肌未产生明显的坏死或凋亡作用.结论 MDL28170对在体缺血再灌注心肌具有保护作用;抑制钙蛋白酶激活可能是一种行之有效的心肌保护方法.
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钙蛋白酶与肝移植缺血再灌注损伤关系的实验研究
目的探讨大鼠肝在不同冷缺血期、复温期及再灌注期钙蛋白酶活性变化,以及钙蛋白酶抑制剂对离体灌注肝功能及原位肝移植大鼠生存的影响.方法SD大鼠.共5个实验部分:(1)冷缺血实验;(2)冷缺血后复温实验;(3)冷缺血后再灌注实验;(4)钙蛋白酶抑制剂实验;(5)原位肝移植实验.结果冷缺血12 h始,肝组织中钙蛋白酶活力明显增加,并随着冷缺血时间的延长而逐渐明显增加(P＜0.01).冷缺血复温30 min始,肝组织中钙蛋白酶活力明显增加,并随着复温时间延长而逐渐明显增加(P＜0.01).肝组织冷缺血0和12 h再灌注60 min钙蛋白酶明显增加(P＜0.05).而冷缺血24 h再灌注30 min钙蛋白酶便明显增加(P＜0.05).钙蛋白酶抑制剂可明显地降低离体灌注肝AST水平及增加胆汁量(分别P＜0.01).结论肝移植冷缺血期、复温期及再灌注期钙蛋白酶均明显增高,钙蛋白酶抑制剂可明显地改善移植肝功能.
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严重烧伤后大鼠骨骼肌超微结构、微区C a2＋含量及钙蛋白酶变化规律的研究
目的：探讨严重烧伤后大鼠骨骼肌超微结构、骨骼肌细胞微区Ca2＋含量及钙蛋白酶（calpain-1和calpain-2）的变化规律。方法选取48只雄性SD大鼠按照速记数字表法分为对照组（n＝8）和实验组（n＝40，5个时相点，每时相点8只）。实验组大鼠在麻醉后背部浸入94℃热水12 s，造成30％总体表面积（TBSA ）Ш度烫伤；对照组大鼠背部同面积浸入37℃温水行假烫伤，其余操作同实验组。于伤后即刻、24h、3d、7d、14d采集两组大鼠腹主动脉血离心获取血清并收集各组大鼠胫骨前肌组织。透射电镜观察胫骨前肌组织超微结构，电子探针X射线显微分析法（EPMA）检测骨骼肌细胞微区Ca2＋相对含量，酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性，酶法检测calpain的活性，蛋白印迹方法检测胫骨前肌中calpain-1和calpain-2的含量。对数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果对照组大鼠胫骨前肌肌原纤维排列整齐；实验组大鼠伤后24 h胫骨前肌肌原纤维排列混杂，伤后3 d肌丝轻度溶解，Z线不规则，伤后7 d局部Z线消失。实验组骨骼肌细胞细胞质、线粒体Ca2＋相对含量伤后即刻开始升高，伤后24 h 达到峰值，其Ca2＋相对含量分别为0．96±0．06、1．08±0．11，与对照组0．27±0．03、0．60±0．07相比差异有统计学意义（P＜0．05），同时伤后24 h肌浆网Ca2＋相对含量迅速降低0．37±0．06，与对照组1．34±0．11相比差异有统计学意义（P＜0．05）；血清LDH和CK活性实验组伤后即刻和伤后24 h均明显升高，伤后24 h实验组血清LDH活性（3067．45±482．55）U／L显著高于对照组（735．00±291．30）U／L，差异有统计学意义（P＜0．05）；伤后24 h～14 d实验组calpain活性显著升高，伤后7 d达到峰值（10．59±0．18）μmol／L与对照组（7．62±0．19）μmol／L相比差异有统计学意义（P＜0．05）；胫骨前肌calpain-1和calpain-2含量伤后24 h～14 d明显增加，其中实验组calpain-1表达在伤后24 h达到峰值0．61±0．04，calpain-2表达在伤后3 d 达到峰值0．98±0．05，随后表达开始下降，伤后14 d calpain-1和calpain-2表达实验组仍高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论严重烧伤后骨骼肌出现明显的超微结构变化，同时伴有血清LDH和CK活性显著升高，肌组织出现损伤。致伤后骨骼肌细胞微区Ca2＋含量、calpain-1、calpain-2含量及其活性变化与骨骼肌超微结构变化及肌组织损伤动态变化基本一致。
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术前化疗对胃肠道恶性肿瘤细胞中钙蛋白酶的影响
目的通过观察术前口服去氧氟尿苷不同时间后,肿瘤组织中钙蛋白酶含量和活性的变化,探讨术前化疗的作用规律及其适宜时间,并进一步揭示化疗的作用机制.方法胃肠道恶性肿瘤患者共73例,根据术前口服去氧氟尿苷(600～1200 mg/d)至手术时间的不同分为:A组(3 d组)27例;B组(1周组)22例;C组(2周组)15例;D组(2个月组)9例.对照组(E组)为24例同期住院手术的胃肠道恶性肿瘤患者.上述所有患者术前均未接受过其他方案的化疗和放疗.采用蛋白免疫印迹法和免疫电镜检测各组肿瘤组织中钙蛋白酶的活性和表达水平.结果电镜显示,化疗后各组的肿瘤细胞中,金颗粒主要位于线粒体膜附近.A组的肿瘤细胞出现轻度损害;B组的肿瘤细胞除轻度损害外,还可见严重损害改变;C组的肿瘤细胞主要表现为严重损害改变;而D组的肿瘤细胞却以轻度损害为主.免疫电镜结果显示肿瘤组织中钙蛋白酶的表达水平随化疗时间延长呈进行性增加,化疗2周达到高峰,化疗2个月与2周组间的结果差异无显著意义.蛋白免疫印迹法检测钙蛋白酶活性的变化趋势与免疫电镜结果一致(r=0.86,P＜0.0001).结论术前口服去氧氟尿苷治疗胃肠道恶性肿瘤可以通过钙蛋白酶发挥抗肿瘤作用,这一作用以服药2周左右为明显.
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多囊卵巢综合征患者钙蛋白酶10基因单核苷酸多态性-19多态性分析
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌及生殖功能障碍性疾病,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)不仅是PCOS患者的重要特征,而且可能是发生PCOS的主要病理基础,在PCOS发病早期起一定的作用[1].钙蛋白酶10(calpain 10,CAPN10)基因是第1个被定位克隆的与2型糖尿病有关的基因,该基因的变异与IR的发生有关,并影响2型糖尿病的遗传易感性[2].本研究主要对PCOS患者CAPN10基因多态性进行分析,旨在探讨CAPN10基因多态性与PCOS发病的关系,为PCOS发病机制的研究提供可能的实验依据.
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钙蛋白酶通过降解突触蛋白Ⅰ介导脑出血后继发性神经元损伤
目的观察钙蛋白酶在实验性脑出血后继发性神经元损伤中的作用及其机制。
方法脑内注射自体血液法制作小鼠脑出血模型，将10周龄雄性C57BL/6J小鼠实验动物随机分为4组：0h组（对照组）、2h组、12h组和24h组，每组10只小鼠。收集血肿周围脑组织后检测血肿周围组织钙蛋白酶活性水平，免疫印迹法检测突触蛋白Ⅰ表达水平。重组的突触蛋白Ⅰ与钙蛋白酶共孵育后检测其降解过程，并观察钙蛋白酶抑制剂ALLN和MDL28170的作用。在体外培养的神经元样大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）中加入钙蛋白酶，观察其细胞损伤作用和对突触蛋白Ⅰ的降解。
结果脑出血后2h血肿周围脑组织钙蛋白酶活性升高，至24h达到高峰。脑出血0h、2h、12h和24h后钙蛋白酶活性读数分别为234.32、343.87、425.29和597.36，12 h组和24 h组与对照组相比差异具有显著性（P＜0.05）。同时突触蛋白Ⅰ水平逐渐降低，提示其降解。至血肿形成后24 h下降到对照组的67.00%（P＜0.01）。纯化的重组突触蛋白Ⅰ与钙蛋白酶共孵育后出现降解，孵育30 min后突触蛋白Ⅰ含量下降至对照组（0 h组）的57.75%（P=0.001），在钙蛋白酶抑制剂ALLN（50μmol/L）和MDL28170（10μmol/L）存在的情况下，突触蛋白Ⅰ水平分别为对照组的87.00%和84.75%（与单纯钙蛋白酶处理组30 min组相比，P＜0.05）。外源性钙蛋白酶与PC12细胞共孵育12 h后细胞活力下降到对照组的58.25%（P＜0.01），而ALLN和MDL28170处理组细胞活力升高到对照组的83.00%和80.25%（与单纯钙蛋白酶处理组相比，P＜0.01）。
结论钙蛋白酶通过降解突触蛋白Ⅰ参与脑出血后的继发性神经损伤，有可能成为脑出血的治疗靶点。 -
大鼠弥漫性轴突损伤后神经丝68蛋白水平减少
目的通过检测大鼠弥漫性轴突损伤(DAI)后神经丝蛋白68(NF68)水平,探讨弥漫性轴突损伤的病理机制.方法用一种对大鼠头颅旋转装置致伤引发大鼠DAl. Sprague-Dawley(SD)大鼠18只随机分3组(30min,24,72h组),每组6只,在不同时间点取脑白质、海马、胼胝体和脑干标本进行NF68印记杂交(Western blot),检查神经丝蛋白68水平.结果Western blot看到对照动物NF68水平没有变化,而损伤动物明显NF68的丢失,特别是脑干.NF68蛋白水平减少在损伤后30min即出现直到损伤后72h.在NF68丢失的同时伴有31、42.7和52Kda低分子量蛋白条带的出现,在24h明显.结论NF68降解是由病理性钙蛋白酶激活引起的.损伤后24h内是佳治疗时机.
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钙蛋白酶在卡那霉素致毒豚鼠耳蜗中的表达
目的 探讨钙蛋白酶(calpain)在卡那霉素(kanamycin,KM)致耳中毒豚鼠耳蜗的表达.方法 将豚鼠随机分成对照组、KM 3 d组、KM 7 d组和KM 14 d组,应用免疫组织化学SABC(streptavidin-biotin peroxidae complex,链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物)法和显微图像分析技术检测耳蜗中钙蛋白酶的表达,用药前后给予短纯音刺激检测听性脑干反应阈值,观察豚鼠听力的变化.结果 对照组calpain 1阳性免疫反应主要见于耳蜗毛细胞、螺旋神经节、血管纹和螺旋韧带,以螺旋神经节的染色较深,而其它部位均呈阴性.肌肉注射KM后,calpain 1在耳蜗中的阳性反应部位与对照组大致相同,显微图像分析结果表明,随着给药天数的增加,calpain 1在耳蜗上述部位的阳性反应逐渐减弱.Calpain 2在各组豚鼠耳蜗中的表达部位与calpain 1的相同,显微图像分析结果提示,随着给药天数的增加,calpain 2在耳蜗上述部位的阳性反应逐渐增强.结论 正常豚鼠耳蜗中有calpain1和calpain 2的表达.注射KM后,随着给药天数的增加,calpain 1在耳蜗的表达逐渐减弱,而calpain 2的表达则逐渐增强,提示calpain 2可能参与了卡那霉素致耳中毒的过程.
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钙蛋白酶在视网膜疾病中的作用
钙蛋白酶(calpain)是一类与细胞凋亡和坏死过程密切相关的蛋白,在包括视网膜在内的人体众多组织中,它的活化均与神经变性和细胞死亡有关,其抑制剂在多种神经细胞中具有神经保护作用,但它的特异性和潜在副作用仍需进一步研究.本文综述钙蛋白酶及其抑制剂在神经损伤与保护方面的作用,并探讨它在治疗多种视网膜疾病中的应用前景.
